Modelo de pulmão acelular e celular para estudar o Tumor metástase

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para um ex vivo pulmão câncer modelo que imita as etapas de progressão do tumor e ajuda a isolar um tumor primário, circulam células tumorais e lesões metastáticas.

Resumo

É difícil isolar células tumorais em diferentes pontos da progressão do tumor. Criamos um ex vivo modelo de pulmão que pode mostrar a interação de células tumorais com uma matriz natural e contínuo fluxo de nutrientes, bem como um modelo que mostra a interação de células tumorais com componentes celulares normais e uma matriz natural. O modelo de pulmão acelular ex vivo é criado, isolando um bloco de coração-pulmão de rato e removendo todas as células usando o processo de decellularization. O brônquio principal direito é amarrado e células tumorais são colocadas na traqueia por uma seringa. As células se mover e preenchem o pulmão esquerdo. O pulmão é então colocado em um bioreator onde a artéria pulmonar recebe um fluxo contínuo de mídia em circuito fechado. O tumor crescido no pulmão esquerdo é o tumor primário. As células do tumor que são isoladas nos meios circulantes circulam células tumorais e as células do tumor no pulmão direito são lesões metastáticas. O modelo de pulmão celular ex vivo é criado por ignorar o processo de decellularization. Cada modelo pode ser usado para responder a perguntas de pesquisa diferente.

Introdução

Metástase do cancro é o culpado por trás da maioria das mortes relacionadas ao câncer e representa o desafio final no esforço para combater o câncer. O objetivo geral deste método é desenhar um protocolo para uma cultura de quadridimensional (4D) de celular que tem uma dimensão de fluxo, além do crescimento tridimensional (3D) celular. Ele representa as três fases distintas do processo de metástase [isto é, o tumor primário, circulam células tumorais (CTC) e lesões metastáticas].

Nas últimas três décadas, os cientistas ao redor do mundo gerou uma riqueza incomparável de informações para entender os mecanismos subjacentes a progress....

Protocolo

Protocolos para experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê de uso no Instituto de pesquisa de Metodista de Houston e institucional Cuidado Animal e efectuados em conformidade com todos os regulamentos, leis, diretrizes e políticas.

1. colheita de pulmão do rato

1. Anestesia um rato Sprague-Dawley masculino de 4 a 6 semanas de idade por uma injeção intraperitoneal de (IP) da cetamina (100 mg/kg) e xilazina (10mg/kg) em seu flanco. Certifique-se de anestesia, verificando-se uma ausência de movimento quando o dedo do pé do membro posterior é comprimido com fórceps.
2. Depois de 10 min, depilar o peito e abdômen e limpe ....

Resultados

O pulmão de rato colhido mantém intacta vasculatura e alvéolos¹¹ (Figura 3A e 3B). Sobre decellularization, os componentes de matriz extracelular de um pulmão acelular, tais como a fibronectina, colágeno e elastina, conservam-se¹¹ (Figura 3, 3D, 3Ee 3F). O decellularization leva a uma completa remoção das células de.......

Discussão

O pulmão ex vivo 4-D fornece uma oportunidade para estudar o crescimento do tumor e metástases em uma configuração de laboratório. Uma matriz de pulmão nativo é um sistema complexo que oferece suporte ao tecido normal e mantém interações célula-célula, interações célula-matriz, diferenciação celular e organização do tecido. Ele fornece uma oportunidade para adicionar quaisquer componentes de microambiente do tumor para estudar seus efeitos sobre o crescimento do tumor e a interação com outras células.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Sprague Dowley rat	Harlan	206M	Macho
Cotonete de clorexidina	Prevantics, NY, EUA	NDC 10819-1080-1
Heparina	Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, EUA	NDC 25021-400-10
Agulha de calibre 18	McMaster Carr, EUA	75165A249
Gravata de seda 2-0	Ethicon, San Angelo, TX, EUA	A305H
Bomba Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	EW-07554-80
Cabeça da bomba Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	EW-07519-05
Cartucho da bomba Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	EW-07519-70
Tygon Tube	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	14171211
Tubo da bomba MasterFlex	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-16
Conectores de trava luer fêmea	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-34	75165A249
Conectores de trava luer macho	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45513-04
anel de nylon preto	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-45509-04
Conjunto intravenoso	CareFusion	41134E
Dodecil Sulfato de Sódio (SDS)	Fisher Scientific	CAS151-21-3
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Antibióticos	Gibco	15240-062
Oxigenador de silicone	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	ABW00011	Saint-GoBain-Malha de
arame	1164610105	Lowes	New York Fio
Fêmea Luer Lug Estilo TEE	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	45508-56
Macho luer anel de bloqueio integral para 200series Barb	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	45518-08
Acoplador de estilo de rosca luer fêmea	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	45508-22
Conector de clave	ICU Medical	11956
Hi-Flo ™ Torneira de 4 vias com chave giratória masculina luer lock	smith Medical	MX9341L
MasterFlex Tubo de bomba	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EUA	06598-13	para cânula