Artigo de método

Determinação da competência reprodutiva, confirmando o início puberal e realizando um ensaio de fertilidade em camundongos e ratos

DOI:

10.3791/58352

⸱

13 de outubro de 2018

1Department of Animal Science, Michigan State University

Neste artigo

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Muitos tratamentos e mutações genéticas impactam o momento da maturidade sexual e fertilidade. Este protocolo descreve um método não-invasivo para avaliar o início puberal em camundongos e ratos antes da criação de um estudo de fertilidade em animais sexualmente maduros.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Avaliação da competência reprodutiva é fundamental para a compreensão do impacto de um tratamento ou manipulação genética do eixo reprodutivo, também denominado o eixo hipotálamo-hipófise-gonadal. O eixo reprodutivo é um integrador de chave de entrada interna e ambiental adapta a fertilidade de condições favoráveis para a reprodução. Antes de embarcar em um estudo de fertilidade em ratos e ratos, a maturidade sexual é avaliada para excluir a possibilidade de que os fenótipos reprodutivos observados são causados por atraso ou ausência de início puberal. Este protocolo descreve uma abordagem não-invasivo para avaliar o início puberal em machos através da determinação da separação prepucial e nas fêmeas através da abertura vaginal e do primeiro estro. Após a confirmação da conclusão da puberdade e a consecução da maturidade sexual, um estudo de fertilidade pode ser iniciado. O procedimento descreve as condições de reprodução ideal para ratos e ratos, como configurar um estudo de fertilidade e quais os parâmetros para avaliar e determinar se o tratamento ou supressão do gene tem um impacto sobre a fertilidade.

Introdução

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A transição da puberdade é necessário para atingir a maturidade sexual e reprodutiva competência. A transição da puberdade e a manutenção da fertilidade na idade adulta é regulada pelo eixo reprodutivo, também denominado o eixo hipotálamo-hipófise-gonadal (Figura 1). O calendário de início puberal e manutenção da fertilidade é fortemente regulamentados por fatores internos, bem como ambientais para aumentar as chances de sobrevivência da prole e os pais de1,2. Este protocolo fornece uma abordagem não-invasivo para determinar o início puberal em camundongos e ratos para confirmar a....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e uso Comitê da Michigan State University e conduzidos de acordo com o guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório.

1. determinar o início puberal

  1. Siga as orientações institucionais para a roupa, no mínimo, é necessário usar um jaleco limpo e luvas esterilizadas. Sempre lidar com ratos usando luvas limpas.
  2. Prepare a área de trabalho, colocando uma almofada em cima da mesa.
    1. Coloque um top de gaiola limpa do mouse com a grade virada para cima no teclado.
    2. Configure uma escala na área de trabalho. Coloque um copo....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os resultados apresentados são de dois modelos de mouse diferente de transgênicos, onde o fator dos transcrição, nomeadamente a homeobox anterior Ventral 1 (Vax1) foi excluído em todo o corpo em um alelo, aqui referido como heterozigoto ratos (HET)13, ou Vax1 foi condicionalmente excluído dentro de GnRH neurônios22, aqui denominado KO condicional (cKO). Antes de configurar o estudo de fertilidade, é importante confirmar o i.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O bem-estar geral dos ratos é fundamental para um ensaio de fertilidade bem sucedida21. Ao realizar um ensaio de fertilidade, é importante verificar fisicamente não nos ratos todos os dias pois isso pode causar estresse. Mais Evite mudanças frequentes de gaiola, como estas também são estressantes. Idealmente as alterações gaiola serão feitas não mais do que 1 - 2 vezes por semana. Exposição à luz durante a fase de escura impacta negativamente reprodutores em roedores noturnos. Não ligue as luzes n.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O autor não tem nada para divulgar.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Agradeço os autores que contribuem para o trabalho inicial, que é a base desta publicação. Graças a Aitor Aguirre, Genevieve E. Ryan e Erica L. Schoeller para ajudar a preparar o manuscrito. Graças a Jessica Lee de Sora e queixo de Austin para assistência técnica com o manuscrito. H.M.H. foi apoiado por Eunice Kennedy Shriver National Institute de saúde infantil & desenvolvimento humano do institutos nacionais da saúde sob prêmio número R00HD084759.

....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Bolas de algodão estéreisFisher22456885
Protetor de superfícieFisher1420637
Medidor de luzVWR21800-014
Azul de metileno Lâminas de Microscópio Sigma-AldrichM9140
Genesee Scientific29-101
Suporte Optimouse com gaiolasCesta deC89100
 Sistemas AnimalCareC61011
Tampos de gaiola filtradosSistemas AnimalCareC78210
Alimentador padrão OptimiceSistemas AnimalCareC40100SG
Porta-cartões de gaiolaSistemas AnimalCareC43251
Cartões de gaiolaSistemas AnimalCareM52010
Garrafa AssambleySistemasAnimalCare
Cama R'Nest NestingThe AndersonsBRN4WSR
1/8" Cama de Espiga de Milho A8B
Teklad7904 (7004)
ScaleVWR10205-004
Copo de polipropilenoFisher14-955-111F
Garrafas de Água da AnimalCare SystemsC79122P ração de rato padrão Andersons

Referências

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schneider, J. E. Energy balance and reproduction. Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).
  2. Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function. Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Solicitar permissão para reutilizar o texto ou as figuras deste artigo JoVE

Solicitar permissão

Etiquetas

Separa o PrepucialAbertura VaginalCria o de CamundongosCria o de RatosMaturidade SexualEstabelecimento do EstroManejo Animal

Artigos relacionados