Subaguda Microhemorrhages Cerebral induzida pela injeção de lipopolissacarídeo em ratos

Resumo

Apresentamos um protocolo para induzir e detectar CMHs causadas pela injeção de LPS em ratos Sprague-Dawley, que pode ser utilizaram no futuro pesquisa investigações na patogênese do CMHs.

Resumo

Microhemorrhages cerebrais (CMHs) são comuns em pacientes idosos e estão correlacionados com vários distúrbios neuropsiquiátricos. A etiologia da CMHs é complexa e neuroinflammation frequentemente é observada como uma co-ocorrência. Aqui, descrevemos um sub-aguda CMHs modelo de rato induzido pela injeção de lipopolissacarídeo (LPS), bem como um método para a detecção de injeção CMHs. LPS sistêmica é relativamente simples, econômica e rentável. Uma grande vantagem da injeção de LPS é sua estabilidade para induzir a inflamação. CMHs causadas pela injeção de LPS podem ser detectadas pela observação bruta, hematoxilina e coloração eosina (HE), do Perl coloração prussiano, double-rotulagem de azul de Evans (EB) e tecnologia de (MRI-SWI) imagem de ressonância magnética-susceptibilidade ponderada. Finalmente, outros métodos de desenvolver modelos animais CMHs, incluindo suas vantagens ou desvantagens, também são discutidos neste relatório.

Introdução

Microhemorrhages cerebrais clássicas (CMHs) consulte perivascular pequenos depósitos de produtos de degradação do sangue tais como hemossiderina de células vermelhas do sangue no cérebro¹. De acordo com o estudo de varredura de Rotterdam, CMHs podem ser encontrados em cerca de 17,8% das pessoas com idade entre 60-69 anos e 38,3% daqueles com 80 anos². A prevalência do CMHs no idoso é relativamente alta, e uma correlação entre a acumulação de CMHs e disfunção cognitiva e neuropsiquiátricas tem sido estabelecida^3,4. Vários modelos animais de CMHs recentemente têm s....

Protocolo

Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo Comitê de uso (ACUC) do Hospital Geral do exército de PLA e cuidado Animal.

1. materiais

1. Preparação da injeção de LPS
   1. Adicione 25 mL de água destilada a 25 mg de pó de LPS derivado de S. typhimurium a uma concentração final de 1 mg/mL. Loja a injeção em um tubo estéril a 4 ° C.
      Cuidado: LPS é tóxico.
   2. Prepare uma solução EB 2% no normal 0,9% de solução salina para manter a injeção EB na concentração do trabalho.

2. os animais

1. Administrar LPS para ratos machos Sprague-Dawley (SD), com 10 semana....

Resultados

CMHs podem ser detectadas usando várias abordagens. Os métodos mais bem aceitados incluem o seguinte: (1) Observação bruta e avaliação da superfície CMHs (mostrado na Figura 1, painel superior); (2) ele mancha para a detecção de células vermelhas do sangue (mostrado na Figura 2A, painel superior) ou prussiana coloração detectando ferro férrico derivado da lise das células vermelhas do sangue (Figura 2A

Discussão

Estudos sobre CMHs têm aumentado nos últimos anos. No entanto, o mecanismo de CMHs permanece obscuro, levando cientistas para a criação de modelos animais que simulam esta condição particular. Por exemplo, Hoffmann et al . desenvolveu um modelo de rato CMHs induzida por hipóxia que mostra que CMHs são causadas pela hipoxia e o rompimento de autoregulação cerebrovascular¹². Reuter et al . ⁵ estabeleceu um modelo CMHs em ratos transgénicos-APP23, que mostrou.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
LPS	Sigma-Aldrich	L-2630	para indução de inflamação
EB	Sigma-aldrich	E2129	para detecção de vazamento
EB DAPI solução de morte	Servicbio	G1012	contagem média para IF
Perl' s Coloração prussiana	Solarbio	G1424	Kit para coloração prussiana
Coloração HE	Kit Solarbio	G1120	para coloração HE hidrato de
cloral	Sigma-Aldrich	47335U	Para
anestesia tampão fosfato solução salina (PBS)	Solarbio	P1022	um tipo de solução tampão comumente usada em
experimento solução	salina a 0,9%Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China		solução para
paraformaldeído de	Sigma-Aldrich	158127	um tipo de solução comumente usada para fixação solução de
sacarose a 20%	Solarbio	G2461	um tipo de solução comumente usada para fixação Solução de
sacarose a 30%	Solarbio	G2460	um tipo de solução comumente usada para fixação
pomada veterinária	Solcoseryl eye gel, Bacel, Suíça		para proteção dos olhos de rato

perfusão