Análise digital de imunocoloração da proteína ZW10 interagindo em tecidos pulmonares humanos

Resumo

A proteína de interação ZW10 (ZWINT) participa no ponto de verificação mitotic do eixo e na patogénese da carcinoma. Aqui, apresentamos uma metodologia de imunocoloração de ZWINT em tecidos de câncer de pulmão humano, seguido pela digitalização digital de slides inteiros e análise de imagem. Esta metodologia pode fornecer imagens digitais de alta qualidade e resultados confiáveis.

Resumo

A finalidade deste estudo é introduzir uma metodologia da imunomarcação de tecidos humanos do pulmão, seguida pela exploração digital da todo-corrediça e pela análise de imagem. A digitalização digital é uma maneira rápida de digitalizar uma pilha de slides e produzir imagens digitais com alta qualidade. Pode produzir resultados concordantes com a microscopia de luz convencional (CLM) por patologistas. Além disso, a disponibilidade de imagens digitais torna possível que o mesmo slide pode ser observado simultaneamente por várias pessoas. Além disso, imagens digitais de slides podem ser armazenadas em um banco de dados, o que significa que a deterioração a longo prazo das lâminas de vidro é evitada. As limitações desta técnica são as seguintes. Primeiramente, precisa o tecido preparado de alta qualidade e as corrediças immunohistochemistry originais (IHC) sem nenhum dano ou resíduo excedente do vedador. Em segundo, as áreas do tumor ou do Atlas devem ser especificadas por patologistas experientes antes da análise usando o software, a fim evitar toda a confusão sobre as áreas do tumor ou do Atlas durante a pontuação. Em terceiro lugar, o operador precisa de controlar a reprodução da cor durante todo o processo da digitalização na imagem latente do inteiro-corrediça.

Introdução

ZW10 proteína interagindo (zwint) é um componente necessário do complexo cinetócoro que está envolvido no ponto de verificação do fuso mitótico^1,2,3. Relatou-se que a prostração de zwint conduz à segregação prematura aberrante^1,2,3do cromossoma. Estudos recentes sugerem que a zwint está envolvida na patogênese de múltiplos tumores, promovendo a proliferação de células tumorais^4,5. Nós relatamos previamente o superexpressão de....

Protocolo

Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo Comitê de ética do hospital Zhongnan da Universidade de Wuhan e Renmin hospital da Universidade de Wuhan.

1. preparação de slides IHC

1. Fixar a amostra de tecido pulmonar, imersando o fragmento de tecido pulmonar humano (cerca de 3 x 3 cm) em paraformaldeído a 4% em solução salina tampão fosfato (PBS) por 24 h à temperatura ambiente (RT).
2. Desidratar o tecido em 80%, 95%, e 100% etanol por 15 min, 20 min e 20 min, respectivamente, à temperatura ambiente. Finalmente, mergulhe o tecido em 100% xileno 3x por 20 min cada em temperatura ambiente.
3. Para a incorporação,....

Resultados

Nós medimos os níveis da expressão de zwint em 28 pares de espécimes do cancro do pulmão da não-pequeno-pilha (NSCLC) (tumor e de tecidos Atlas adjacentes), incluindo 14 carcinomas de pilha Squamous (SCCs) e 14 adenocarcinomas (ADCs), por IHC. A digitalização digital do slide inteiro das lâminas forneceu imagens digitais de alta qualidade (Figura 1a). Os resultados mostraram que o escore-H do câncer de pulmão foi significativamente maior que o dos tecidos adj.......

Discussão

A digitalização de slides inteiros está se tornando um tema quente para sua digitalização robusta e produção de imagens de alta qualidade para fins clínicos e de pesquisa^11,12,13. As imagens podem ser produzidas por microscópios de slide-scanning dentro dos minutos^11,12,13. Aplicando esta metodologia, nós obtivemos imagens de alta quali.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Pannoramic MIDI	3D HISTECH	Cat: PMIDI-040709	Um scanner de slides digital automatizado com um conjunto de recursos notável: capacidade de 12 slides, varredura de fluorescência e muito mais.
QuantCenter	3D HISTECH	Baixado do site oficial da empresa	A estrutura para os aplicativos de análise de imagem da 3DHISTCH.
LEICA RM2235	Leica Microsystems	Cat: 14050038604	A precisão aprimorada dos novos acessórios adicionará conveniência à abordagem do bloco à faca, bem como à orientação da amostra.
Anticorpo anti-ZWINT humano de coelho	Abcam	Cat: ab197794	Análise imuno-histoquímica de ZWINT em tecido pulmonar humano.
Anticorpo secundário anti-coelho	Tecnologia Wuhan Goodbio Cat	: GB23303-1	Anticorpo secundário para coloração IHC.
Solução salina tamponada com fosfato	Wuhan Goodbio Technology	Cat:G0002	Uma solução contendo um tampão fosfato.
OLYMPUS CX23	OLYMPUS	Cat: 6M87620	Microscópio para detecção de H & Lâminas E ou IHC.
Reagente químico Dimetilbenzeno	Shanghai Lingfeng	Cat: 1330-20-7	Um fluido incolor e inflamável usado como solvente e agente clarificante na preparação de seções de tecido para estudo microscópico.
Hematoxilina que colore a	tecnologia de Wuhan Servicebio	: G1039	É de uso geral para estudos histológicos, colore o oftern os núcleos das pilhas azuis.
Tween 20	Baitg	Cat:2005-64-5	É um surfactante não iônico do tipo polissorbato formado pela etoxilação do sorbitano antes da adição de ácido láurico. É usado como dissuasor e emulsificante em aplicações farmacológicas.
Ácido cítrico reparação líquido	Wuhan Servicebio technology	Cat: G1202	É usado para reparar o antígeno após a fixação durante o procedimento IHC.
LEICA ASP200s	Leica	Cat: 14048043626	Foi projetado para histopatologia de rotina e pesquisa de até 200.
LEICA Arcadia H	Leica	Cat: 14039354103	É uma estação de embutir de parafina aquecida e permite uma operação simples e controle preciso, resultando em melhor qualidade, um fluxo de trabalho suave e confiabilidade.
LEICA Arcadia C	Leica	Cat: 14039354102	É uma placa fria com mais de 60/65 em sua grande superfície de trabalho. Ele foi projetado com um módulo de controle adaptativo ao ambiente para garantir que a temperatura operacional esteja sempre estabilizada em -6 graus Celsius.
Software CaseViewer	3DHISTECH

da solução da coloração