Estimativa do número de néfron em rim inteiro usando o método de maceração ácida

Summary

As estimativas do número inteiro do nephron do rim são importantes clìnica e experimentalmente, porque há uma associação inversa entre o número do nephron e um risco aumentado de doença renal e cardiovascular. Nisto, o uso do método ácido da maceração, que fornece estimativas rápidas e de confiança do número inteiro do nephron do rim, é demonstrado.

Abstract

O investidura de nephron refere o número total de néfrons um indivíduo é carregado com, porque o nefrogênese nos seres humanos é terminado por 36 semanas da gestação e nenhum néfrons novo é dado forma ao borne-nascimento. O número de néfron refere-se ao número total de néfrons medidos em qualquer momento pós-parto. Tanto os fatores genéticos quanto os ambientais influenciam tanto a investidura de néfron quanto o número. Entender como genes ou fatores específicos influenciam o processo de nefrogênese e perda ou morte de néfron é importante, já que indivíduos com menor investidura ou número de néfron são pensados para estarem em maior risco de desenvolver doenças renais ou cardiovasculares. Compreender como as exposições ambientais no decorrer da vida de uma pessoa afeta o número de néfron também será vital para determinar o risco de doença futuro. Assim, a capacidade de avaliar o número de néfron de rim inteiro de forma rápida e confiável é um requisito experimental básico para compreender melhor os mecanismos que contribuem para ou promovem a nefrogênese ou perda de néfron. Aqui, nós descrevemos o método ácido da maceração para a estimativa do número inteiro do nephron do rim baseado no procedimento descrito por Damadian, por Shawayri, e por Bricker, com modificações ligeiras. O método de maceração ácida fornece estimativas rápidas e confiáveis do número de néfron (conforme avaliado pela contagem de glomérulos) que estão dentro de 5% daqueles determinados usando métodos mais avançados, embora caros, como a ressonância magnética. Além disso, o método de maceração ácida é um excelente método de alta taxa de transferência para avaliar o número de néfron em grandes quantidades de amostras ou condições experimentais.

Introduction

O nephron é a unidade estrutural básica e funcional do rim¹. Estruturalmente, o nephron consiste no glomérulo (capilares e podocytes) situados dentro da cápsula de Bowman e do túbulo renal, consistindo no túbulo proximal, no laço de Henle, e no túbulo longe do ponto de origem que termina no duto de coleta. Funcionalmente, o papel do nephron é a filtração e a reabsorção de água e eletrólitos e a secreção de resíduos. Em geral, a nefrogênese é concluída em 36 semanas de gestação em seres humanos e logo após o nascimento em várias espécies, como o rato e o rato². A investidura de nephron refere-se ao número total de néfrons....

Protocol

Suprimentos e reagentes listados abaixo são para a determinação de todo o número de nefrons renais em um rato, ou seja, dois rins. As modificações para o uso do método ácido da maceração para o rato são identificadas com asteriscos. Todos os protocolos experimentais conformados com o guia nacional de saúde para o cuidado e uso de animais de laboratório e foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais do centro médico da Universidade do Mississippi.

1. procedimento de isolamento renal

1. Pesar o rato (ou outras espécies) e eutanizar-lo com um isoflurano (5%-8%) dose excessiva ou pentobarbital (150 mg/kg de inje....

Results

Estão abaixo as estimativas representativas do número inteiro do nephron do rim de um modelo estabelecido do rato da hipertensão e de um modelo genético do rato da doença de rim crônica idade-relacionada. As principais características de identificação dos glomérulos, como uma estrutura esférica com ou sem estruturas anexadas pré ou pós-arteriolar ou Tubular, são destacadas para aqueles que são novos no método de maceração ácida (Figura 1).

Discussion

Com boa técnica experimental, o método de maceração ácida é ideal para estimar o número de néfron em rim inteiro. Embora o rim seja dissolvido em ácido, os glomérulos permanecem em grande parte intactos e são prontamente identificáveis, tornando a contagem de glomérulos individuais relativamente fáceis e diretas. A técnica de maceração ácida é particularmente vantajosa por várias razões. Primeiro, o método de maceração ácida é um método rápido e conveniente que requer relativamente pouco em termos de despesa e esforço fí.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anestesia com isoflurano	Abbott Laboratories	05260-05
Sistema vaporizador de isoflurano e medidor de fluxo	Braintree Scientific	VP I	Inclui suprimento de oxigênio de grau médico
Leica Microscópio invertido DMIL LED	Leica Microsystems	DMIL LED	Qualquer marca também adequada
Banho-maria digital	Fisher Scientific	2239	Qualquer marca também Tesoura
cirúrgica ToughCut Fine	Ferramentas de Fine Science	14058-11	Aresta de corte de 25 mm, 11,5 cm de comprimento; Dicas: afiado-afiado; Forma da ponta: pinça
de dissecação micro reta 4 1/4 pol.	Biomed Res Instruments, Inc	10-1760 Placa de	com ponta curvada
5 pol. x 7 pol.	qualquer fonte adequada	n/a	Qualquer marca também adequada
Prato de pesagem de poliestireno hexagonal	Fisher Scientific	02-2002-100	Qualquer marca também adequada
Lâminas de barbear	Fisher Scientific	12-640	Aço carbono de borda única 0.009
Esponjas de gaze 4 x 4 pol. 8 camadas	Fisher Scientific	MSD-1400250
10x concentrado fosfato tamponado salina (PBS)	Sigma Aldrich	P5493-4L	Diluído para 1x
Solução de ácido hidrocólrico 6 N	Sigma Aldrich	3750-32
Tubo de centrífuga cônico de 15 mL	Fisher Scientific	14-959-70C	Qualquer marca também adequada
Tubo de centrífuga cônico de 50 mL	Fisher Scientific	14-959-49A	Qualquer marca também adequada
Seringa descartável de 5 mL	Cole Palmer	EW-07944-06	Qualquer marca também adequada
18G1.5 descartável agulha	Fisher Scientific	14-826-5D	Qualquer marca também adequada
21G1.5 agulha descartável	Fisher Scientific	14-826-5B	Qualquer marca também adequada
placas de cultura de células de múltiplos poços de 12 poços com tampa	Cole Palmer	#FW-01959-06	Qualquer marca também adequada
Polipropileno modular tubo de ensaio rack	Cole Palmer	#EW-06733-00	Capaz de acomodar tubos cônicos de 15 e 50 mL; qualquer marca também adequada