O componente complementar de-de-de-a é uma molécula pró-inflamatória altamente expressa no microambiente tecidual que pode interagir com a matriz extracelular. Aqui, nós descrevemos um método para testar como o-de-de-ácido hialurônico afeta a adesão celular.
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Artigo de método
Avaliação da interação entre o complemento protéico-de-n-n e ácido hialurônico na promoção da adesão celular
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Tem sido demonstrado cada vez mais que o microambiente tumoral desempenha um papel ativo no crescimento e metástase da neoplasia. Através de diferentes vias, as células tumorais podem eficientemente recrutar células estromal, imunológicas e endoteliais secretando fatores estimulatórios, quimiocinas e citocinas. Por sua vez, essas células podem alterar as propriedades de sinalização do microambiente, liberando sinais de promoção de crescimento, metabólitos e componentes da matriz extracelular para sustentar alta proliferação e competência metastática. Neste contexto, identifica-se que o componente complementar-de-n, altamente expresso localmente por uma gama de tumores malignos humanos, ao interagir com o ácido hialurônico da matriz extracelular, afeta fortemente o comportamento das células primárias isoladas do tumor humano Espécimes. Aqui, nós descrevemos um método para testar como o-de-de-aço para o ácido hialurônico (HA) impacta a adesão de células tumorais, subjacente ao fato de que as propriedades biológicas dos principais componentes da matriz extracelular (neste caso HA) podem ser moldadas por sinais bioativos em direção ao tumor Progressão.
Introdução
O microambiente do tumor (TME) influencia o desenvolvimento e a progressão do cancro desde que pode fornecer um Niche permissiva para a sobrevivência, o crescimento e a invasão da pilha. A identificação de novos atores-chave na TME pode ser útil para a descoberta de novas ferramentas moleculares para a terapia alvo. A TME inclui uma rede complexa e dinâmica de células não malignas, como células endoteliais, fibroblastos e células do sistema imunológico, encaixadas nos componentes da matriz extracelular circundante (ECM), incluindo colágenos, lamininas, fibronectinas, proteoglicanos e hyaluronans. Ambas as células tumorais e não-tumorais sintetizam e secretam component....
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Protocolo
Amostras de tecido de pacientes foram coletadas após consentimento informado após aprovação das considerações éticas pelo Conselho institucional do hospital universitário de Trieste, Itália.
1. isolamento e cultura de células tumorais (dia 1)
- Isole pilhas humanas do mesotelioma dos espécimes contínuos do MPM. Picar finamente o tecido com um cortador para obter fragmentos de cerca de 2-3 mm2 em tamanho e incubar em 5 ml de solução de digestão composta de Hanks ' Balanced Salt Solution (HBSS) suplementado com 0,5 mm CA2 +/mg2 +, 0,5% tripsina e 50 μg/ml DNase I, durante a noite a 4 ° c.
- Iso....
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Resultados
HA é um polissacárido de alto peso molecular carregado negativamente, que é composto de repetição (β,1-4)-D-glucurônico ácido-(β,1-3)-N-acetil-D-glucosamina dissacarínico unidades (Figura 1b)7. A ocorrência da ligação de HA na placa 96-well, bem como a eficiência de sua imobilização foram testadas aproveitando-se de HA biotinylated (bio-HA). Diferentes concentrações de bio-HA, variando de 10 μg/mL a 1 mg/mL, foram resuspensas em 100 mM.......
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Discussão
Nós descrevemos um método fácil para investigar como o componente do complemento, que interage com o ácido hialurônico, é capaz de modular o comportamento de células primárias isoladas de tecidos tumorais humanos. Tanto o HA quanto o n. º n estão presentes no microambiente tecidual em condições fisiológicas e patológicas, participando de diversos processos biológicos celulares. Por exemplo, foi demonstrado que o n. º-8 está presente no microambiente da placenta, onde favorece a invasão de trofoblastos trophoblast da decí.......
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Divulgações
Os autores declaram que a pesquisa foi conduzida na ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que pudessem ser interpretadas como um potencial conflito de interesses.
Agradecimentos
Agradecemos a Ivan Donati pelo fornecimento de HA, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (departamento de Ginecologia da IRCCS "burlo Garofolo", Trieste, Itália) e Andrea Romano (unidade clínica operatória de anatomia e histologia patológica, hospital Cattinara, Trieste, Itália ) para a coleta de amostras de tecido. Agradecemos também Nicolò Morosini pela ajuda na preparação de vídeo e Alex Coppola, a voz. Este trabalho foi apoiado por subsídios do Instituto de saúde materna e infantil, IRCCS "burlo Garofolo", Trieste, Itália (RC20/16) e Fondazione Cassa di risparmio Trieste para R. Bulla.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 100 µ Filtro de poros BD | Falcon | 352360 | |
| Solução de Anfotericina B (fungizona) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
| Ciências Imunológicas Básicas FGF | GRF-15595 | ||
| Cloreto de Cálcio | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
| Colagenase tipo I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
| DNase I | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
| EGF | Ciências Imunológicas | GRF-10544 | |
| Sondas moleculares FAST DiI | , Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Soro fetal bovino | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectina | Roche | 11051407001 | |
| Frasco para cultura de células | Corning | 430639 | estéril e ventilada |
| de gentamicina | Sigma-Aldrich | G1397-10ML | |
| Hank ' s Solução salina balanceada (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Suplementado com EDTA, Glicose, penicilina-estreptamicina, gentamicina e fungizona |
| Ácido hialurônico de alto peso molecular | Gentil presente do Prof. Ivan Donati | ||
| Soro endotelial humano meio livre | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Suplementado com EGF (5 ng/mL), FGF básico (10 ng/mL) e 1% de penicilina– estreptomicina (Sigma-Aldrich) |
| Cloreto de magnésio | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Médio 199 com Hank' s sal | Sigma-Aldrich | M7653 | |
| Penicilina-Estreptomicina | Sigma-Aldrich | P0781 | |
| Microscopia de lapso de tempo | Nikon | Sistema de Imagem BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T4674 |
Referências
- Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function. Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).
- Lorusso, G., Ruegg, C.
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Reimpressões e permissões
