Artigo de método
O objetivo preliminar deste artigo é fornecer detalhes de como gravar o potencial da membrana (Vm) da artéria cerebral média usando o método do impalement do microelétrodo. A artéria cerebral média canulada é equilibrada para ganhar o Tom miogênico, e a parede do vaso é empalada usando microeletrodos de alta resistência.
O potencial de membrana (Vm) das células musculares lisas vasculares determina o tom do vaso e, portanto, o fluxo sanguíneo para um órgão. Mudanças na expressão e função de canais iônicos e bombas eletrogênicas que regulam Vm em condições de doença poderiam potencialmente alterar vm, tônus vascular e fluxo sanguíneo. Assim, uma compreensão básica da eletrofisiologia e os métodos necessários para gravar com precisão Vm em Estados saudáveis e doentes são essenciais. Este método permitirá modulando Vm usando diferentes agentes farmacológicos para restaurar vm. Embora existam vários métodos, cada um com suas vantagens e desvantagens, este artigo fornece protocolos para registro de Vm de vasos de resistência canulados, como a artéria cerebral média, utilizando o método de empalamento do microeletrodo. As artérias cerebrais médias podem ganhar o Tom myogenic em uma câmara do miógrafo, e a parede da embarcação é empalada usando microeletrodos da resistência elevada. O sinal de Vm é coletado através de um electrometer, digitalizado, e analisado. Este método fornece uma leitura exata do Vm de uma parede da embarcação sem danificar as pilhas e sem mudar a resistência da membrana.
O potencial de membrana (Vm) de uma célula refere-se à diferença relativa da carga iónica através da membrana plasmática e a permeabilidade relativa da membrana a estes íons. O Vm é gerado pela distribuição diferencial de íons e é mantido por canais de íons e bombas. Os canais iônicos como K+, na+e CL− contribuem substancialmente para o repouso Vm. As pilhas de músculo liso vasculares (VSMCs) expressam mais de quatro tipos diferentes de K+ Channels1, dois tipos de CA2 + Channels tensão-fechados (vgcc)2, mais de dois tipos de CL−<....
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Os ratos machos foram alojados na unidade de cuidados com animais da UMMC, que é aprovada pela Associação para avaliação e acreditação de cuidados com animais de laboratório (AAALAC). Os animais tiveram livre acesso à alimentação e à água durante todo o estudo. Os animais foram mantidos em ambiente controlado com temperatura a 24 ± 2 ° c, níveis de umidade de 60 – 80% e 12 h de luz/ciclos escuros. Todos os protocolos foram aprovados pelo Comitê de cuidados e uso de animais da UMMC.
1. preparação do equipamento
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O método apresentado pode ser usado confiantemente para gravar Vm em embarcações canulados. Um breve procedimento descrevendo como isolar MCA do cérebro é apresentado na Figura 1a. Após separar o cérebro do crânio, o MCA foi dissecado para fora e coloc em um prato de Petri que contem o baixo cálcio PSS. Parte do tecido conjuntivo que foi anexado também foi dissecado juntamente com MCA usando tesouras de mola e fórceps para evitar danos ao MCA duran.......
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Este artigo fornece as etapas necessárias em como usar um método afiado do impalement do microelétrodo para gravar Vm de uma preparação canulados da embarcação. Este método é amplamente utilizado, e oferece gravações consistentes de alta qualidade de Vm que respondem a uma vasta gama de perguntas experimentais.
Algumas considerações críticas e etapas de solução de problemas são descritas aqui para garantir o sucesso do método. A qualidade do microeletrodo (sua nitidez e r.......
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Os autores não têm nada a revelar.
Este trabalho foi apoiado em parte por subsídios do programa de pesquisa de apoio intramural (IRSP) de UMMC, AHA cientista Development Grant (13SDG14000006) concedido a Mallikarjuna R. Pabbidi.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Instrumentos de dissecação | |||
| Aneshetic Vaporizador | Parkland científico | V3000PK | |
| microscópio de dissecação | Nikon Instruments Inc., NY | Eclipse Ti-S | |
| Kleine Guilhotina Tipo 7575 | Harvard Apparatus, MA | 73-198 | |
| Littauer Bone Cutter | Ferramentas | de ciências finas16152-15 | |
| Moria MC40 Fórceps Ultra Fino | Ferramentas de ciências finas | 11370-40 | |
| Tesoura cirúrgica Sharp-Blunt | Ferramentas de ciências finas | 14008-14 | |
| Sutura | Harvard Apparatus | 72-3287 | |
| Tesouras de mola Vannas | Ferramentas de ciências finas | 15018-10 | |
| Instrumentos de eletrofisiologia | |||
| Câmera de dispositivo de carga acoplada | Qimaging, , BC | Retiga 2000R | |
| Amplificador de eletrômetro diferencial | WPI | FD223A | |
| Transdutor de pressão em linha | Harvard Apparatus, MA | MA1 72-4496 | |
| Micromanipulador | Thor labs | PCS-5400 | |
| Microeletrodos | Warner Instruments LLC, CT | G200-6, | |
| Micro Fil (seringa de microfibra) | WPI | MF28G67-5 | |
| Suporte de microeletrodo | WPI | MEH1SF | |
| Instrumentação de sistemas vivos | de miógrafo | CH-1-SH | |
| Extrator | Sutter Instrumento, San Rafael, CA | P-97 | |
| Mesa livre de vibração | TMC | 3435-14 | |
| < strong>Softwares | |||
| Clampex 10 | Dispositivos | ||
| p Clamp 10 | Dispositivos | ||
| Software de imagem | Nikon, NY | NIS-elements | |
| Chemicals | |||
| NaCl | Sigma | S7653 | |
| KCl | Sigma | P4504 | |
| MgSO4 | Sigma | M7506 | |
| CaCl2 | Sigma | C3881 | |
| HEPES | Sigma | H7006 | |
| Glicose | Sigma | G7021 | |
| NaH2PO4 | Sigma | S0751 | |
| NaHCO3 | Sigma | S5761 |
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