Método do impalement do microelétrodo para gravar o potencial da membrana de uma artéria cerebral média Cannulated

Summary

O objetivo preliminar deste artigo é fornecer detalhes de como gravar o potencial da membrana (V_m) da artéria cerebral média usando o método do impalement do microelétrodo. A artéria cerebral média canulada é equilibrada para ganhar o Tom miogênico, e a parede do vaso é empalada usando microeletrodos de alta resistência.

Abstract

O potencial de membrana (V_m) das células musculares lisas vasculares determina o tom do vaso e, portanto, o fluxo sanguíneo para um órgão. Mudanças na expressão e função de canais iônicos e bombas eletrogênicas que regulam V_m em condições de doença poderiam potencialmente alterar v_m, tônus vascular e fluxo sanguíneo. Assim, uma compreensão básica da eletrofisiologia e os métodos necessários para gravar com precisão V_m em Estados saudáveis e doentes são essenciais. Este método permitirá modulando V_m usando diferentes agentes farmacológicos para restaurar v_m. Embora existam vários métodos, cada um com suas vantagens e desvantagens, este artigo fornece protocolos para registro de V_m de vasos de resistência canulados, como a artéria cerebral média, utilizando o método de empalamento do microeletrodo. As artérias cerebrais médias podem ganhar o Tom myogenic em uma câmara do miógrafo, e a parede da embarcação é empalada usando microeletrodos da resistência elevada. O sinal de V_m é coletado através de um electrometer, digitalizado, e analisado. Este método fornece uma leitura exata do V_m de uma parede da embarcação sem danificar as pilhas e sem mudar a resistência da membrana.

Introduction

O potencial de membrana (V_m) de uma célula refere-se à diferença relativa da carga iónica através da membrana plasmática e a permeabilidade relativa da membrana a estes íons. O V_m é gerado pela distribuição diferencial de íons e é mantido por canais de íons e bombas. Os canais iônicos como K⁺, na⁺e CL⁻ contribuem substancialmente para o repouso V_m. As pilhas de músculo liso vasculares (VSMCs) expressam mais de quatro tipos diferentes de K⁺ Channels¹, dois tipos de CA^{2 +} Channels tensão-fechados (vgcc)², mais de dois tipos de CL^−<....

Protocol

Os ratos machos foram alojados na unidade de cuidados com animais da UMMC, que é aprovada pela Associação para avaliação e acreditação de cuidados com animais de laboratório (AAALAC). Os animais tiveram livre acesso à alimentação e à água durante todo o estudo. Os animais foram mantidos em ambiente controlado com temperatura a 24 ± 2 ° c, níveis de umidade de 60 – 80% e 12 h de luz/ciclos escuros. Todos os protocolos foram aprovados pelo Comitê de cuidados e uso de animais da UMMC.

1. preparação do equipamento

1. Coloque um amplificador de eletrômetro diferencial de canal duplo (veja a tabela de materiais) perto da c....

Results

O método apresentado pode ser usado confiantemente para gravar V_m em embarcações canulados. Um breve procedimento descrevendo como isolar MCA do cérebro é apresentado na Figura 1a. Após separar o cérebro do crânio, o MCA foi dissecado para fora e coloc em um prato de Petri que contem o baixo cálcio PSS. Parte do tecido conjuntivo que foi anexado também foi dissecado juntamente com MCA usando tesouras de mola e fórceps para evitar danos ao MCA duran.......

Discussion

Este artigo fornece as etapas necessárias em como usar um método afiado do impalement do microelétrodo para gravar V_m de uma preparação canulados da embarcação. Este método é amplamente utilizado, e oferece gravações consistentes de alta qualidade de V_m que respondem a uma vasta gama de perguntas experimentais.

Algumas considerações críticas e etapas de solução de problemas são descritas aqui para garantir o sucesso do método. A qualidade do microeletrodo (sua nitidez e r.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Instrumentos de dissecação
Aneshetic Vaporizador	Parkland científico	V3000PK
microscópio de dissecação	Nikon Instruments Inc., NY	Eclipse Ti-S
Kleine Guilhotina Tipo 7575	Harvard Apparatus, MA	73-198
Littauer Bone Cutter	Ferramentas	de ciências finas16152-15
Moria MC40 Fórceps Ultra Fino	Ferramentas de ciências finas	11370-40
Tesoura cirúrgica Sharp-Blunt	Ferramentas de ciências finas	14008-14
Sutura	Harvard Apparatus	72-3287
Tesouras de mola Vannas	Ferramentas de ciências finas	15018-10
Instrumentos de eletrofisiologia
Câmera de dispositivo de carga acoplada	Qimaging, , BC	Retiga 2000R
Amplificador de eletrômetro diferencial	WPI	FD223A
Transdutor de pressão em linha	Harvard Apparatus, MA	MA1 72-4496
Micromanipulador	Thor labs	PCS-5400
Microeletrodos	Warner Instruments LLC, CT	G200-6,
Micro Fil (seringa de microfibra)	WPI	MF28G67-5
Suporte de microeletrodo	WPI	MEH1SF
Instrumentação de sistemas vivos	de miógrafo	CH-1-SH
Extrator	Sutter Instrumento, San Rafael, CA	P-97
Mesa livre de vibração	TMC	3435-14
< strong>Softwares
Clampex 10	Dispositivos
p Clamp 10	Dispositivos
Software de imagem	Nikon, NY	NIS-elements
Chemicals
NaCl	Sigma	S7653
KCl	Sigma	P4504
MgSO4	Sigma	M7506
CaCl2	Sigma	C3881
HEPES	Sigma	H7006
Glicose	Sigma	G7021
NaH2PO4	Sigma	S0751
NaHCO3	Sigma	S5761