Aqui, apresentamos métodos para estudo da elevado-produção de uma série do mexicano cavefish comportamentos e coloração vital de um sistema de mechanosensory. Esses métodos usam scripts de software livre e sob medidos, fornecendo um método prático e econômico para os estudos de comportamentos.
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Artigo de método
Acompanhamento comportamental e Neuromast imagem de Cavefish mexicano
Neste artigo
Resumo
Resumo
Caverna-moradia animais evoluíram uma série de características morfológicas e comportamentais para se adaptar a seus ambientes perpetuamente escuros e comida esparsas. Entre essas características, comportamento de forrageamento é uma das janelas úteis em vantagens funcionais da evolução do traço comportamental. Aqui apresentados são atualizados métodos para analisar o comportamento de atração de vibrações (VAB: um comportamento de forrageamento adaptativo) e da imagem latente do associado mechanosensors da caverna-adaptado tetra, Astyanax mexicanus. Além disso, métodos são apresentados para o seguimento do elevado-throughput de uma série de comportamentos cavefish adicionais, incluindo hiperatividade e perda de sono. Cavefish também mostram asociality, comportamentos repetitivos e maior ansiedade. Portanto, cavefish servir como um modelo animal para comportamentos evoluídos. Esses métodos usam software livre e feito por scripts que podem ser aplicados a outros tipos de comportamento. Esses métodos fornecem alternativas práticas e econômicas para software de rastreamento disponíveis comercialmente.
Introdução
O tetra mexicano, Astyanax mexicanus (Teleostei: Characidae), é único entre os peixes para ter dois morfos alternativos radicalmente distintos - um morph avistado, superfície-moradia e um morph cego, caverna-moradia composta de várias distintas as populações1. Embora diferentes em morfologia e fisiologia, são ainda interfertile2,3. Estes morfos interfertile parecem ter evoluído rapidamente (~ 20.000 anos)4, que os torna um sistema de modelo ideal para o estudo da adaptação rápida. Cavefish são conhecidos por terem um conjunto de características morfológi....
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Protocolo
Todos os procedimentos são realizados seguindo as orientações descritas em "Princípios de laboratório Animal Care" (Instituto Nacional de saúde publicação n º 85-23, revista em 1985) e os aprovados pela Universidade do Havaí em Manoa institucional Animal cuidados e uso Protocolo de Comité animal 17-2560-3.
1. ensaio de comportamento (VAB) vibração atração (≤ 10 min para o procedimento de gravação)
Nota: Usar uma câmera de infravermelha sensível ou construir uma câmera infravermelha, modificando uma webcam USB. Para modificar uma webcam USB, consulte uma descrição detalhada, apresentado pelo laboratório Keene nesta ....
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Resultados
Os resultados aqui apresentados são representativos exemplos do que pode ser adquirido com os métodos apresentados. Portanto, os resultados podem desviar ligeiramente aqueles aqui apresentados para cavefish e peixes de superfície dependendo das condições experimentais.
Comportamento de atração de vibrações
Resultados representativos para VAB podem ser .......
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Discussão
Estes métodos apresentados são de fácil acesso, mas podem ser complicados para realizar devido à natureza de suas origens de freeware. Portanto, é altamente recomendável realizar ensaios experimentais e análises antes de qualquer experimentação real.
A taxa de geração de dados pode ser rápida, uma vez que o quadro analítico e experimental são estabelecidos. Uma vez estabelecida, é possível gravar dois peixes em 7 min para o ensaio de VAB, 30 peixes em 24 h para o ensaio de atividade/sono e um .......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos a todos os membros do laboratório Yoshizawa incluindo Cetraro N. s. Simon, C. Valdez, C. Macapac, J. Choi, L. Lu, J. Nguyen, S. Podhorzer, H. Hernandes, J. Fong, J. Kato e I. senhor para cuidar de peixes no peixe experimental usado neste manuscrito. Agradecemos também a membros de laboratório r. Keene, incluindo P. Miranda Silva para treinar meu para montar a câmera do CCD do IR. Por último, gostaríamos de agradecer o Media Lab - faculdade de ciências sociais - escola de comunicações para a Universidade de Hawai ' i Manoa por sua inestimável ajuda fazendo o vídeo, especialmente B. Smith, J. Lam e S. branco. Este trabalho foi apoiado pela Fundação da Comuni....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 4-Di-1-ASP (4-(4-(dimetilaminoestiril)-1-iodeto de metilpiridínio) | MilliporeSigma | D3418 | |
| 880 nm comprimento de onda luz negra | Advanced Illumination | BL41192-880 | |
| avfs | freeware | Versão 1.0.0.6 | http://turtlewar.org/avfs/ |
| Avisynth | freeware | Versão 2.6.0 | http://avisynth.nl/index.php/Main_Page |
| Cygwin | freeware | Versão 2.11.0 | https://www.cygwin.com/ |
| Câmara de ensaio cilíndrica (prato de vidro Pyrex 325 ml) | Corning | 3140-100 | 10 cm de diâmetro 5 cm de altura |
| Ethovision XT | Noldus Informações Tecnologia, Wageningen, Holanda | Versão 14 | https://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt |
| Cilindro de aquário de peixes Esponja macia Filtro de água de pedra, Black | Jardin (até Amazon.com) | NA | Filtro de esponja para sistema de registro de sono / hiperatividade |
| Grau A Ovos de artêmia Camarão em salmoura | direto | BSEA16Z | |
| ImageJ | freeware | Versão 1.52e | https://imagej.nih.gov/ij/ |
| macro 1.8/12.5-75mm Lente zoom C-mount | Toyo | NA | Anexar à webcam USB usando c-mount, que é impresso na impressora 3-D |
| Regulador Neutro | Seachem | NA | |
| Filtro de passagem longa IR de plástico fundido óptico | Edmund optics | 43-948 | Corte em um pequeno pedaço para caber no CCD do freeware |
| pfmap da webcam USBConstruir 178 | http://pismotec.com/download/ (em " Baixar arquivo" link na parte inferior) | ||
| Reef Crystals Reef Salt Instant | Ocean | RC15-10 | |
| SwisTrack | freeware | Versão 4 | https://en.wikibooks.org/wiki/SwisTrack |
| webcam USB (LifeCam Studio 1080p HD Webcam) | Microsoft | Q2F-00013 | Corte 2-2,5 cm da frente |
| WinAutomation | freeware | Versão 8 | https://www.winautomation.com/ (autônomo gratuito aplicativo para este procedimento) |
| Sistema operacional Windows | Microsoft | 7, 8 ou 10 | https://www.microsoft.com/en-us/windows |
| x264vfw | freeware | NA | https://sourceforge.net/projects/x264vfw/ |
Referências
- Keene, A. C., Yoshizawa, M., McGaugh, S. E. Biology and Evolution of the Mexican Cavefish. Biology and Evolution of the Mexican Cavefish. , Elsevier Inc. Amsterdam. (2015).
- Mitchell, R. W., Russell, W. H., Elliott, W. R.
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Reimpressões e permissões
