Cirurgia do nervo facial no modelo de rato para estudar inibição e regeneração axonal

Resumo

Este protocolo descreve uma abordagem reprodutível para a cirurgia do nervo facial no modelo de rato, incluindo descrições de vários padrões induziveis de lesão.

Resumo

Este protocolo descreve métodos consistentes e reprodutíveis para estudar a regeneração e inibição axonal em um modelo de lesão do nervo facial de rato. O nervo facial pode ser manipulado ao longo de toda a sua extensão, desde seu segmento intracraniano até seu curso extratemporal. Existem três tipos primários de lesão nervosa utilizados para o estudo experimental de propriedades regenerativas: esmagamento nervoso, transsecção e abertura nervosa. A gama de possíveis intervenções é vasta, incluindo manipulação cirúrgica do nervo, parto de reagentes neuroativos ou células, e manipulações centrais ou de órgãos finais. As vantagens deste modelo para estudar a regeneração nervosa incluem simplicidade, reprodutibilidade, consistência entre espécies, taxas de sobrevivência confiáveis do rato e um tamanho anatômico aumentado em relação aos modelos murina. Suas limitações envolvem uma manipulação genética mais limitada versus o modelo do rato e a capacidade regenerativa superlativa do rato, de modo que o cientista do nervo facial deve avaliar cuidadosamente os pontos de tempo para recuperação e se traduzir resultados para animais superiores e estudos humanos. O modelo de rato para lesão do nervo facial permite parâmetros funcionais, eletrofisiológicos e histomorfométricos para a interpretação e comparação da regeneração nervosa. Assim, possui um enorme potencial para promover a compreensão e o tratamento das consequências devastadoras da lesão do nervo facial em pacientes humanos.

Introdução

A lesão do nervo craniano na região da cabeça e do pescoço pode ser secundária às etiologias congênitas, infecciosas, idiopáticas, iatrogênicas, traumáticas, neurológicas, oncológicas ou sistêmicas¹. O nervo craniano VII, ou nervo facial, é comumente afetado. A incidência de disfunção do nervo facial pode ser significativa, pois afeta de 20 a 30 por 100.000 pessoas a cada ano². Os principais ramos motores do nervo facial são os ramos temporal, zigomático, bucal, mandibular marginal e cervical; dependendo do ramo envolvido, as consequências podem incluir incompetência oral ou baba, secura da córnea, obstrução do campo vis....

Protocolo

Todas as intervenções foram realizadas de acordo com as diretrizes dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH). O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais Institucionais (IACUC) da Universidade de Michigan antes da implementação. Foram utilizados ratos sprague-dawley adultos de dez semanas de idade.

1. Antes do dia da operação

1. Garanta um estoque adequado de instrumentos cirúrgicos esterilizados, medicamentos analgésicos, medicamentos anestésicos e oxigênio antes do dia de operação. Consulte Tabela de Materiais para obter uma lista completa.

2. Configu....

Resultados

Após o procedimento cirúrgico inicial, existem dois tipos principais de medidas de desfecho: medidas seriais no animal vivo e medidas que requerem sacrifício do animal. Exemplos de medidas seriais incluem ensaios eletrofisiológicos, como uma medição potencial de ação muscular composta³⁰, avaliações do movimento muscular facial através de laser assistido ou videografia significa⁹, ou mesmo imagens ao vivo repetitivas de recrescimento do nervo.......

Discussão

O modelo de lesão do nervo facial de rato emergiu como o sistema mais versátil para a avaliação de fatores neurotróficos devido à sua acessibilidade cirúrgica, padrão de ramificação e significância fisiológica^{27,29,33,34,35,36}. A combinação de demonstração de vídeo e aplicação de dados de animais transgênicos abre novas possi.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
1,8% de isoflurano	VetOne	13985-030-40
11-0 microssuturas de nylon	AROSuture	TK-117038
4-0 sutura monocryl	VWR	75982-084
Buprenorfina SR	ZooPharm	MIF 900-006
Carprofeno	Sigma-Aldrich	MFCD00079028
Clorexidina	VWR
Pinça de joalheiro	VWR	21909-458
Micro afastador Weitlaner	VWR	82030-146
Micro-tesoura	VWR	100492-348
Mini tesoura de tenotomia	VWR	89023-522
Lâmina de bisturi número 15	VWR	102097-834
Microscópio cirúrgico	Leica
Gel para os olhos de petrolato	Pharmaderm	B002LUWBEK
Água estéril	VWR	89125-834
Adesivo tecidual	Vetbond,	3M NC9259532
Almofada condutora de água	Sistema de alívio de água	ARS2000B
Bupivacaína			Utilização como analgésico local

IC19135805