Modelo de matriz extracelular óssea tridimensional para osteossarcoma

Summary

O modelo de matriz extracelular (BEM) de osso de osteossarcoma (OS) é bem estabelecida e mostrado aqui. Ele pode ser usado como um andaime apropriado para simulando tumor primário crescimento em vitro e fornecendo um modelo ideal para o estudo da heterogeneidade de mutagénese e histológica do sistema operacional.

Abstract

Osteossarcoma (OS) é o mais comum e um tumor ósseo primário altamente agressivo. É caracterizado com variações anatômicas e histológicas, juntamente com as dificuldades de diagnósticos ou prognósticos. Sistema operacional é composto por células cancerosas Leishmania e fenotipicamente heterogêneas. Elementos do microambiente ósseo são provou conta para progressão de doença e heterogeneidade do tumor. Matriz extracelular óssea (BEM) retém a matrizes microestrutural e componentes bioquímicos do nativo da matriz extracelular. Este nicho de tecido-específica fornece um andaime favorável e a longo prazo para proliferação e célula OS semeadura. Este artigo fornece um protocolo para a preparação da modelo BEM e sua aplicação mais experimental. OS células podem crescer e se diferenciar em múltiplos fenótipos consistentes com a complexidade histopatológica das amostras clínicas OS. O modelo também permite a visualização de diversas morfologias e sua associação com alterações genéticas e mecanismos reguladores subjacentes. Como homólogo para OS humanos, este modelo BEM-OS pode ser desenvolvido e aplicado para a patologia e pesquisa clínica do sistema operacional.

Introduction

Osteossarcoma (OS) geralmente ocorre em áreas, a metáfise de ossos longos, um crescimento activo durante a adolescência. Mais de 80% dos sites OS afetados têm preferência para a metáfise da tíbia proximal proximal do úmero e fêmur distal e proximal, correspondente à posição do crescimento placa¹. OS compreende vários subtipos de células com propriedades mesenquimais e considerável diversidade nas características histológicas e grau. Evidências suportam as células-tronco mesenquimais (MSCs), cometido precursores de osteoblastos e pericitos como as células de origem^2,3,

Protocol

Uso e cuidados com animais sejam realizadas de acordo com os institutos nacionais de saúde guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório (publicação de NIH NO.80-23, revisto em 1996) após aprovação do Animal ética Comissão de Sun Yat-sen da Universidade.

1. osso preparação

1. Obter 4 de camundongos BALB/c de 6 semanas de idade (sem exigência de sexo-específico). Eutanásia em um rato assepticamente por deslocamento cervical e corte fresca fíbula, tíbia e fêmur de um membro posterior com tesoura cirúrgica estéril. Retire o tecido epitelial e em seguida retire o máximo de tecido mole quanto possível, usando uma tesoura e pinça.<....

Results

Após a desmineralização e decellularization, BEM parece ser translúcido com forte resistência e tenacidade em relação ao osso nativo do rato. Um pequeno resíduo de músculo e o espaço da cavidade medular podem ser claramente observadas (Figura 1A, B). Para determinar a decellularization eficaz do BEM, BEM é incorporado em parafina, após a fixação e em seguida cortado em seções de 3 – 5 μm para coloração de hematoxilina-eosina (H & E). A remoção completa do núcleo de célul.......

Discussion

Geralmente, OS podem ser classificados como osteoblástica, chondroblastic e fibroblastic subtipos dependendo de seu componente histológico dominante. Seu prognóstico é dependente não só parâmetros histológicos, mas também no seu sítio anatômico. Pode ocorrer no interior dos ossos (na haste intramedular ou compartimento intracortical), nas superfícies dos ossos e em sites extraosseous¹⁹. O surgimento e a heterogeneidade do sistema operacional podem ser elucidados como uma conjugação de eventos oncog.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubo de centrífuga de 15 mL	Greiner	188271
Tubo de centrífuga de 50 mL	Greiner	227270
Placa de cultura de células de 6 cm	Greiner	628160
Placa de 6 poços	Greiner	657160
Ampicilina	Sigma-Aldrich	A9393
C57-BL/6J camundongo	Laboratório da Universidade Sun Yat-sen Centro
CO2 incubadora	SHEL LAB	SCO5A
Fosfato de sódio dibásico Fábrica	reagentes químicos de Guangzhou	BE14-GR-500G
DMEM/F12	Sigma-Aldrich	D0547
Soro bovino fetal	Hyclone	SH30084.03
BLAU		717805
Kanamicina	Sigma-Aldrich	PHR1487
MG-63	Academia Chinesa de Ciências, Banco		Linha celular de osteossarcoma humano
MNNG/HOS	Academia Chinesa de Ciências, Banco		Linha celular de osteossarcoma humano
Vermelho de fenol	Sigma-Aldrich	P4633	Uma solução de vermelho de fenol é usada como indicador de pH: sua cor exibe uma transição gradual do amarelo para o vermelho na faixa de pH de 6,6 a 8,0.
Cloreto de potássio	Sangon Biotech	A100395
Fosfato de potássio Monobásico	Sangon Biotech	A501211
Cloreto de sódio	Sangon Biotech	A501218