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Artigo de método

Um modelo de câncer endometrial ortotópico com linfadenopatia retroperitoneal feita a partir de in vivo propagadas e cultivadas VX2 células

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DOI:

10.3791/59340

12 de setembro de 2019

Neste artigo

Resumo

Este protocolo apresenta um método estandardizado para crescer VX2 pilhas na cultura e para criar um modelo VX2 transplantação orthotopic do do cancro endometrial com metástases de nó de linfa retroperitoneal nos coelhos. Os modelos do cancro endometrial de orthotopic são importantes para o estudo pré-clínico de modalidades novas da imagem latente para o diagnóstico de metástases de nó de linfa.

Resumo

O cancro endometrial é a malignidade gynecologic a mais comum em America do Norte e a incidência está levantando-se no mundo inteiro. O tratamento consiste em cirurgia com ou sem terapia adjuvante, dependendo da participação do linfonodo, conforme determinado pela linfadenectomia. Lymphadenectomy é um procedimento mórbido, que não seja mostrado para ter um benefício terapêutico em muitos pacientes, e assim um método novo para diagnosticar metástases de nó de linfa é exigido. Para testar os agentes novos da imagem latente, um modelo de confiança do cancro endometrial com metástases de nó de linfa retroperitoneal é necessário. O modelo VX2 do cancro endometrial foi descrito freqüentemente na literatura; no entanto, existe uma variação significativa no que diz respeito ao método de estabelecimento de modelo. Além disso, nenhum estudo relatou sobre o uso de células VX2 cultivadas para criar esse modelo, pois apenas as células propagadas in vivo têm sido utilizadas anteriormente. Neste estudo, apresentamos um método cirúrgico padronizado e um método de monitorização pós-operatória para o estabelecimento do modelo de câncer endometrial VX2 e relato do primeiro uso de células VX2 cultivadas para criar esse modelo.

Introdução

O cancro endometrial, ou o cancro do forro do útero, são a segunda malignidade gynecologic a mais comum no mundo inteiro e a malignidade a mais comum em nações desenvolvidas1. A incidência de câncer de endométrio tem aumentado constantemente, elevando-se em 2,3% ao ano entre 2005-2013 com um aumento correspondente de 2,2% na mortalidade1,2,3. O diagnóstico das metástases linfonodais é primordial, pois a presença de linfonodos positivos é um forte preditor negativo desobrevida4,5....

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Protocolo

Fechamento da parede abdominal profunda: identifique o ápice da incisão peritoneal e segure o peritônio, músculo reto e fáscia com fórceps tecidual. Todos os estudos em animais foram conduzidos em instalações aprovadas pelo centro de recursos animais (ARC) da rede de saúde universitária e de acordo com os protocolos de uso e cuidado de animais aprovados (AUP #3994/#4299). A linha celular VX2 foi obtida do laboratório do Dr. Aken na rede de saúde da Universidade.

1. criação de linha celular in vitro VX2

  1. Colha o tumor de VX2 do músculo do alongamento do coelho e do crescimento no flanco do rato.
    1. Descongelar blocos de tumor V....

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Resultados

Vinte e oito coelhos foram utilizados para a criação do modelo de câncer endometrial. Os coelhos apresentaram um peso médio de 2,83 kg (2,71-40, 5kg) no momento do experimento. Os tumores uterine cresceram com sucesso em 21 coelhos para uma taxa de sucesso total do modelo de 75%. Antes da inclusão da sutura uterina no protocolo, a taxa de sucesso foi de 57% em relação a 81% após a sutura uterina ser adicionada. A sutura uterina foi adicionada ao protocolo após o 7º coelho em re.......

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Discussão

Nisto, nós relatamos um método cirúrgico estandardizado para o estabelecimento de um modelo endometrial do cancro de VX2 e relatado no primeiro uso de pilhas VX2 cultivadas para criar este modelo. O tumor toma a taxa de 75% é mais baixo do que a taxa de 100% por cento relatada previamente na literatura35,37,53,56; Entretanto, a taxa de THW 90% de metástases de nó de linfa patològica confirmadas.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Este estudo foi financiado pelo Terry Fox Research Institute (PPG # 1075), o Instituto canadense de pesquisa em saúde (Fundação Grant #154326), o Instituto canadense de pesquisa da sociedade do câncer (704718), ciências naturais e Conselho de pesquisa de engenharia do Canadá, Fundação сanada para a inovação e a Princesa Margaret Cancer Foundation.

Gostaria de agradecer ao Dr. Marguerite Akens por fornecer as células VX2 iniciais para o estabelecimento do modelo inicial de VX2 e os blocos de tumor VX2 congelados. Gostaria de agradecer a Marco DiGrappa por ajudar a realizar experimentos iniciais de cultura de células VX2 e Lili Ding para ajud....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Bisturi de 11 lâminas, Estéril, DescartávelAspen Surgical (VWR)80094-086
Cateter de veias da orelha de 22 gaguesCDMV14332
Sutura de polifilamento absorvível absorvível absorvível absorvível 3-0 3-0 (Polysorb
)Filtrode células Covidien 356718
70uM, Embalado individualmente, NylonFalcon352350
Acepromazina (Atravet)CDMV1047
Sabonete Betadine (iodo de poviodona 7,5%)Solução de CDMV4363
Betadine (iodo de poviodona 10%)Lojas UHN457955
BuprenorfinaUniversidade McGill
CefazolinaUHN farmácia de internaçãoNo Cat # Necessário
Solução de clorexidinaCDMV119872
Corning BioCoatCellware, Colágeno Tipo I, placas de 100 mmCorning354450marca não importante
Corning BioCoatCellware, Colágeno Tipo I, placas de 24 poçosCorning354408marca não importante
Corning BioCoatCellware, Colágeno Tipo I, placas de 6 poçosCorning354400marca não importante
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *sem LDEV, 10 mLCorning354234
DMEM/HAM F12 1:1Life Technologies11320marca não importante
DMSOCaledon Lab Chem1/10/4100
Enrofloxacina (injetável Baytril)CDMV11242
Falcon TubeCorning Centri-Star430828
Soro Fetal Bovino, Qualificado, Origem Canadense, 500mlde 12483020Life Technologiesnão é importante
IsofluranoUHN farmácia hospitalarNão Cat # Necessário
contraste de isohexolGE Healthcare407141210
Meloxicam (Metacam 0,5%)CDMV104674
Normal SalinoCasa Marca (UofT Medstore)1011
PBSMulticell ou Sigma331-010-CL ou D8537-500mL
Penicilina / Estreptomicina (100mL; 10000U Penicilina, 10000ug Estreptomicina)Corning-CellgroCA45000-652
Solução Salinal Balanceada Estéril Hanks (-Ca ++, -Mg ++, -Vermelho de Fenol)TCMF (Dr. Bristow)28-Jan-11
Cola Cirúrgica (Adesivo de Tecido)3M Vetbond14695B
Tripsina (0,25%), Grau ProteômicoSigmaT-6567-5X20UG
Tripsina-EDTA, 0,05%, 100mlWisent Inc325-542-ELmarca não importante
356718 Marca / fonte

Referências

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....

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Reimpressões e permissões

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