Aplicação de consistente massagem-como perturbações em bezerros do mouse e monitoramento das mudanças de pressão intramuscular resultante

Naoyoshi Sakitani; Takahiro Maekawa; Kumiko Saitou; Katsuhiko Suzuki; Shuhei Murase; Masakuni Tokunaga; Daisuke Yoshino; Keisuke Sawada; Atsushi Takashima; Motoshi Nagao; Toru Ogata; Yasuhiro Sawada

doi:10.3791/59475

Artigo de método

Aplicação de consistente massagem-como perturbações em bezerros do mouse e monitoramento das mudanças de pressão intramuscular resultante

DOI:

10.3791/59475

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20 de setembro de 2019

Naoyoshi Sakitani^*¹ , Takahiro Maekawa^*¹ , Kumiko Saitou¹^,² , Katsuhiko Suzuki³ , Shuhei Murase¹^,⁴ , Masakuni Tokunaga¹ , Daisuke Yoshino⁵ , Keisuke Sawada⁶ , Atsushi Takashima⁷ , Motoshi Nagao¹ , Toru Ogata¹ , Yasuhiro Sawada¹^,⁸

¹Department of Rehabilitation for Motor Functions, National Rehabilitation Center for Persons with Disabilities, ²Graduate School of Sport Sciences, Waseda University, ³Faculty of Sport Sciences, Waseda University, ⁴Department of Orthopaedic Surgery, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo, ⁵Frontier Research Institute for Interdisciplinary Sciences, Tohoku University, ⁶University of Cincinnati College of Medicine, ⁷Department of Assistive Technology, National Rehabilitation Center for Persons with Disabilities, ⁸Department of Clinical Research, National Rehabilitation Center for Persons with Disabilities

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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Aqui nós descrevemos os protocolos para aplicar cargas mecânicas definidas aos bezerros do rato e para monitorar as mudanças intramusculares concomitantes da pressão. Os sistemas experimentais que desenvolvemos podem ser úteis para investigar o mecanismo por trás dos efeitos benéficos do exercício físico e da massagem.

Resumo

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A massagem é geralmente reconhecida para ser benéfico para aliviar a dor e inflamação. Embora os estudos precedentes relatem efeitos anti-inflammatory da massagem em músculos esqueletais, os mecanismos moleculars atrás são compreendidos mal. Nós desenvolvemos recentemente um dispositivo simples para aplicar a compressão cíclica local (LCC), que pode gerar ondas intramusculares da pressão com amplitudes de variação. Usando este dispositivo, Nós demonstramos que o LCC modula respostas inflamatórios de macrófagos in situ e alivia a atrofia do músculo imobilização-induzida. Aqui, nós descrevemos protocolos para a optimização e a aplicação de LCC como uma massagem-como a intervenção de encontro à inflamação imobilização-induzida e à atrofia de músculos esqueletais de hindmembros do rato. O protocolo que desenvolvemos pode ser útil para investigar o mecanismo subjacente aos efeitos benéficos do exercício físico e da massagem. Nosso sistema experimental fornece um protótipo da abordagem analítica para elucidar a regulação mecânica da homeostase muscular, embora mais desenvolvimento precise ser feito para estudos mais abrangentes.

Introdução

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A massagem é geralmente reconhecida como benéfica tanto para o alívio da dor quanto para a melhora do desempenho físico entre atletas competitivos e não atletas iguais^1,2^. Na verdade, estudos anteriores mostraram que a massagem suprime a inflamação local³ e solicita a recuperação do dano muscular pós-exercício⁴^,⁵. Os mecanismos moleculares subjacentes aos efeitos benéficos da massagem permanecem largamente desconhecidos.

Uma das dificuldades com a investigação mecanicista sobre massagem relaciona-se c....

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Protocolo

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Todos os experimentos com animais foram conduzidos a aprovação do Comitê institucional de cuidados e uso de animais do centro nacional de reabilitação para pessoas com deficiência.

1. imobilização dos membros posteriores bilaterais do rato

Nota: camundongos machos C57BL/6 foram utilizados para experimentos com idade de 11-12 semanas após aclimatação por pelo menos 7 dias.

Anestesiam adequadamente um rato utilizando pentobarbital sódico (50 mg/kg i.p.). Certifique-se de que os ratos não respondem a uma pitada do dedo do pé do membro traseiro.
Nota: conduza o procedimento da imobilização entre 10 a.m. ....

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Resultados

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Em consonância com as observações anteriores¹², a CSA de miofibras de gastrocnêmio foi significativamente diminuída pela imobilização do membro posterior (Figura 2A, B). Além disso, nossa análise da coloração da imunofluorescência revelou que as pilhas que expressam MCP-1 e TNF-α, ambo desempenham papéis chaves em regular processos inflamatórios¹³^,¹⁴, aumentaram significativamente no músculo d.......

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Discussão

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Nós descrevemos um método para aplicar uma massagem-como o estímulo mecânico, que tem efeitos anti-inflammatory. Nosso sistema tem as seguintes vantagens mesmo quando comparado com aqueles relatados previamente. Em primeiro lugar, estudos prévios não definiram quantitativamente as forças mecânicas aplicadas² ou definiram suas magnitudes com base na medida na superfície do corpo, mas não dentro dos tecidos¹⁰. Ao contrário, Nós medimos a pressão intramuscular usando um teleme.......

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Divulgações

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Os autores declaram que não há interesses concorrentes associados ao manuscrito.

Agradecimentos

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Agradecemos a K. Nakanishi, K. Hamamoto, N. Kume e K. Tsurumi pelo seu apoio consistente em todo o projeto. Este trabalho foi, em parte, apoiado pelo fundo de investigação intramural do Ministério japonês da saúde, trabalho e bem-estar; Subvenções em auxílio à investigação científica da sociedade japonesa para a promoção da ciência; MEXT-programa apoiado para a Fundação de pesquisa estratégica em universidades privadas, 2015-2019 do Ministério japonês da educação, cultura, esportes, ciência e tecnologia (S1511017).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Fio de alumínio	DAISO JAPAN	B028	Um fio de alumínio é usado para evitar escapar da restrição pelo fio
Telémetro de pressão arterial	Millar	SPR-671	Um telémetro de pressão arterial é usado para medir a pressão intramuscular.
DAPI	Thermo Fisher Scientific	D1306	DAPI é uma sonda fluorescente que é comumente usada para corar DNA para microscopia fluorescente.
Cabra anti-coelho Alexa Fluor 488 (taxa de diluição, 1:500)	Invitrogen	A11034	Anticorpo para coloração imuno-histoquímica.
Cabra anti-rato Alexa Fluor 568 (taxa de diluição, 1:500))	Invitrogen	A11077	Anticorpo para coloração imuno-histoquímica.
ImageJ	NIH	N/A	Software de análise para imagem
LabChart8	ADInstrumens		Software de análise para aquisição de sinais biológicos.
Prolong gold	Thermo Fisher Scientific	P36930	Prolong gold é para montagem de amostras manchadas.
Protein Block Serum-Free	Dako	X090930-2	Para bloquear a coloração de fundo inespecífica em procedimentos imuno-histoquímicos.
Anticorpo monoclonal anti-laminina-2 de rato (taxa de diluição, 1:1000)	Sigma Aldrich	L0663	Anticorpo para coloração imuno-histoquímica.
Anticorpo monoclonal anti-F4/80 de rato (taxa de diluição, 1:500)	Abcam	ab6640	Anticorpo para coloração imuno-histoquímica.
Anticorpo policlonal anti-MCP-1 de coelho (taxa de diluição, 1:1000)	Abcam	ab25124	Anticorpo para coloração imuno-histoquímica.
Anticorpo policlonal de coelho anti-TNF-&alfa; (taxa de diluição, 1:1000)	Abcam	ab66579	Anticorpo para coloração imuno-histoquímica.
Fita cirúrgica	3M Japão	1530EP-0	A fita cirúrgica é usada para restringir o movimento articular.

Referências

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Furlan, A. D., Imamura, M., Dryden, T., Irvin, E. Massage for low back pain: an updated systematic review within the framework of the Cochrane Back Review Group. Spine. 34 (16), 1669-1684 (2009).
Robertson, A., Watt, J. M., Galloway, S. D. R.

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Local Cyclical Compression Intramuscular Pressure Monitoring Mouse Hindlimb Immobilization Gastrocnemius Muscle Analysis Histomorphometric Analysis Immunofluorescent Staining Macrophage Accumulation Muscle Attenuation Mechanical Regulation Biological Signal Analysis

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