Isolamento e quantificação do vírus Zika de múltiplos órgãos em um mouse

James  D. Brien; Mariah Hassert; E. Taylor Stone; Elizabeth Geerling; Lillian Cruz-Orengo; Amelia K. Pinto

doi:10.3791/59632

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Artigo de método

Isolamento e quantificação do vírus Zika de múltiplos órgãos em um mouse

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DOI:

10.3791/59632

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15 de agosto de 2019

James D. Brien^*¹ , Mariah Hassert^*¹ , E. Taylor Stone¹ , Elizabeth Geerling¹ , Lillian Cruz-Orengo² , Amelia K. Pinto¹

¹Department of Molecular Microbiology and Immunology, Saint Louis University, ²School of Veterinary Medicine University of California Davis

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O objetivo do protocolo é demonstrar as técnicas utilizadas para investigar a doença viral, isolando e quantificando o vírus Zika, de múltiplos órgãos em um camundongo após a infecção.

Resumo

Os métodos apresentados demonstram procedimentos laboratoriais para o isolamento de órgãos de animais infectados pelo vírus Zika e a quantificação da carga viral. O objetivo do procedimento é quantificar os títulos virais em áreas periféricas e do SNC do camundongo em diferentes pontos temporais pós-infecção ou diferentes condições experimentais para identificar fatores virológicos e imunológicos que regulam a infecção pelo vírus Zika. Os procedimentos da isolação do órgão demonstraram permitem a quantificação do ensaio da formação do foco e a avaliação quantitativa do PCR de Titers virais. As técnicas rápidas da isolação do órgão são projetadas para a preservação do Titer do vírus. A quantificação do Titer viral pelo ensaio de conformação de foco permite a avaliação rápida da taxa de transferência do vírus Zika. O benefício do ensaio de formação de foco é a avaliação do vírus infeccioso, a limitação deste ensaio é o potencial para toxicidade de órgãos reduzindo o limite de detecção. A avaliação do Titer viral é combinada com o PCR quantitativo, e usar um número de cópia do genoma viral do controle da cópia do RNA recombinante dentro do órgão é avaliado com baixo limite de deteção. No geral, essas técnicas fornecem um método de alta taxa de transferência rápida e precisa para a análise dos títulos virais da Zika na periferia e no SNC dos animais infectados pelo vírus Zika e podem ser aplicados à avaliação de títulos virais nos órgãos de animais infectados com a maioria dos patogénicos, incluindo o vírus da dengue.

Introdução

O vírus Zika (ZIKV) é um arbovírus pertencente à família Flaviviridae, que inclui importantes patógenos humanos neuroinvasivos, como o vírus Powassan (POWV), o vírus da encefalite japonesa (JEV) e o vírus do Nilo Ocidental (WNV)¹. Após seu isolamento e identificação, houve relatos periódicos de infecções humanas de zikv na África e na Ásia²^,³^,⁴^,⁵e epidemias dentro da América Central e do Sul (revisada em referência⁶). Entretanto, não era até recentemente que o ZIKV estêve pensado para causar a ....