Isolamento e cultura de células endoteliais aórticas primárias de suínos em miniatura

Yanli Zhao; Chengjiang Zhao; David K.C. Cooper; Ying Lu; Kewang Luo; Huiyun Wang; Pengfei Chen; Changchun Zeng; Shaodong Luan; Lisha Mou; Hanchao Gao

doi:10.3791/59673

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Isolamento e cultura de células endoteliais aórticas primárias de suínos em miniatura

8.4K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/59673

⸱

14 de agosto de 2019

Yanli Zhao¹^,²^,³ , Chengjiang Zhao⁴ , David K.C. Cooper⁵ , Ying Lu² , Kewang Luo⁶ , Huiyun Wang³ , Pengfei Chen³ , Changchun Zeng³ , Shaodong Luan¹ , Lisha Mou² , Hanchao Gao¹^,²^,³

¹Department of Nephrology, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, ²Shenzhen Xenotransplantation Medical Engineering Research and Development Center, Shenzhen Second People's Hospital, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen University School of Medicine, ³Department of Medical Laboratory, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, ⁴Department of Endocrinology, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, ⁵Xenotransplantation Program, Department of Surgery, University of Alabama at Birmingham, ⁶People's Hospital of Longhua

Neste artigo

Resumo

Um método enzimático eficaz para o isolamento de células endoteliais aórticas primárias porcinas (pAECs) de suínos em miniatura é descrito. Os pAECs preliminares isolados podem ser usados para investigar a resposta imune e da coagulação no xenotransplante.

Resumo

Xenotransplante é uma maneira promissora para resolver a escassez de órgãos humanos para pacientes com insuficiência de órgãos em estágio final, e o porco é considerado como uma fonte de órgão adequada. A rejeição imune e a coagulação são dois obstáculos principais para o sucesso do xenotransplante. A lesão e a disfunção da célula endotelial vascular (EC) são importantes para o desenvolvimento das respostas de inflamação e coagulação no xenotransplante. Assim, o isolamento de células endoteliais aórticas porcinas (pAECs) é necessário para investigar as respostas de rejeição imune e coagulação. Aqui, desenvolvemos uma abordagem enzimática simples para o isolamento, caracterização e expansão de pAECs altamente purificados de suínos em miniatura. Primeiramente, o porco diminuto foi anestesiado com cetamina, e um comprimento da aorta foi extirpado. Em segundo lugar, a superfície endotelial da aorta foi exposta a 0, 5% de solução digestiva de colagenase IV por 15 min. terceiro, a superfície endotelial da aorta foi raspada em apenas uma direção com raspador de células (< 10 vezes), e não foi comprimida durante o processo de Raspagem. Finalmente, os paecs isolados do dia 3, e após a passagem 1 e a passagem 2, foram identificados pelo fluxo citometria com um anticorpo CD31. As porcentagens de células CD31-positivas foram 97,4% ± 1,2%, 94,4% ± 1,1% e 92,4% ± 1,7% (média ± DP), respectivamente. A concentração de Collagenase IV, o tempo digestivo, o sentido, e a freqüência e a intensidade da raspagem são críticas para diminuir a contaminação do fibroblasto e obter a elevado-pureza e um grande número ECs. Em conclusão, nosso método enzimático é um método altamente effctive para isolar ECs da aorta diminuta do porco, e as pilhas podem ser expandidas in vitro para investigar as respostas imunes e da coagulação no xenotransplante.

Introdução

A escassez de órgãos disponíveis para a transplantação é um problema proeminente World-Wide¹. De acordo com a Cruz Vermelha da sociedade de China, somente um número pequeno de pacientes com falha de órgão da fase final recebeu um órgão apropriado em China em 2018.

O xenotransplante é uma forma promissora de resolver o problema da escassez de órgãos. Os órgãos do porco são considerados ser os órgãos os mais apropriados para seres humanos por causa das similaridades anatômicas e fisiológico^2,3^. A falha de um xenograft do porco é relacionada pela maior parte às ....