O hemisection espinal torácico do rato é um modelo valioso e reprodutível de ferimento unilateral da medula espinal para investigar os mecanismos neural da recuperação locomotora e da eficácia do tratamento. Este artigo inclui um guia detalhado passo a passo para realizar o procedimento de hemisection e avaliar o desempenho locomotor em uma arena de campo aberto.
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Artigo de método
Cirurgia do Hemisection da medula espinal torácica e avaliação do locomotor do aberto-campo no rato
Neste artigo
Resumo
Resumo
Ferimento da medula espinal (SCI) causa distúrbios na função motora, sensorial, e autonômica abaixo do nível da lesão. Modelos animais experimentais são ferramentas valiosas para compreender os mecanismos neurais envolvidos na recuperação locomotora após a SCI e para projetar terapias para populações clínicas. Existem vários modelos experimentais de SCI, incluindo contusão, compressão e ferimentos de transecção que são usados em uma grande variedade de espécies. Um hemisection envolve o transecção unilateral da medula espinal e interrompe todos os intervalos ascendentes e descendentes em um lado somente. O hemisection espinal produz um ferimento altamente seletivo e reprodutível em comparação às técnicas da contusão ou da compressão que é útil para investigar a plasticidade neural em caminhos poupados e danificados associados com a recuperação funcional. Nós apresentamos um protocolo detalhado passo a passo para executar um hemisection torácico no nível T8 vertebral no rato que conduz a uma paralisia inicial do hindmembro na lateral da lesão com recuperação espontânea graduada da função locomotora sobre diversos Semanas. Nós também fornecemos um protocolo de Pontuação locomotora para avaliar a recuperação funcional no campo aberto. A avaliação locomotora fornece um perfil linear da recuperação e pode ser executada cedo e repetidamente após ferimento a fim fazer exame exatamente dos animais para os pontos de tempo apropriados em que para conduzir um teste comportável mais especializado. A técnica de hemisection apresentada pode ser prontamente adaptada a outros modelos e espécies de transecção, e a avaliação locomotora pode ser utilizada em uma variedade de SCI e outros modelos de lesão para pontuar a função locomotora.
Introdução
Ferimento da medula espinal (SCI) é associado com os distúrbios severos na função motora, sensorial, e autonômica. Modelos experimentais de animais de SCI são ferramentas valiosas para compreender os acontecimentos anatômicos e fisiológicos envolvidos na patologia da SCI, para investigar os mecanismos neurais na reparação e recuperação, e para a tela para a eficácia e segurança do potencial terapêutico Intervenções. O rato é a espécie mais comumente utilizada na pesquisa SCI1. Modelos de ratos são de baixo custo, fácil de reproduzir, e uma grande bateria de testes comportamentais estão disponíveis para avaliar os resultados funcionais
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Protocolo
Os experimentos descritos neste artigo foram realizados em conformidade com as diretrizes do Conselho canadense de cuidado animal e foram aprovados pelo Comitê de ética da Université de Montréal.
1. cirurgia de hemisection torácica
- Use o equipamento de proteção apropriado (luvas, máscara, e vestido) para manter um ambiente asséptico para a cirurgia. Limpe a área cirúrgica com toalhetes de álcool e coloque cortinas cirúrgicas estéreis sobre o campo cirúrgico. Esterilizar ferramentas cirúrgicas e colocar no campo cirúrgico.
- Anestesie o rato uma mistura de gás isoflurano (3% de indução, 0,5 − 3% de manutenção) e oxigénio (1....
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Resultados
Lesões reprodutíveis com alto grau de consistência podem ser geradas com a técnica de hemisection. Para avaliar e comparar os tamanhos das lesões entre os grupos experimentais, a área máxima da lesão como uma porcentagem do cross-section total da medula espinal pode prontamente ser calculada com mancha histológica de seções da medula espinal. A Figura 1 mostra uma lesão representativa do hemicord esquerdo e uma sobreposição da proporção da área máxima da lesão compartilhada entre ratos com u.......
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Discussão
A maior força da técnica de hemisection é a seletividade e reprodutibilidade da lesão que leva à redução da variabilidade nos fenótipos histológicos e comportamentais entre os animais25. A fim assegurar uma lesão unilateral a nível espinal apropriado, a identificação exata do segmento vertebral apropriado e do midline da medula espinal é crítica. Como pode haver uma tendência para a medula espinhal girar na direção do corte durante o procedimento de hemisection, pode ser benéfico estabilizar o cor.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelos institutos canadenses de pesquisa em saúde (CIHR; MOP-142288) para m. h. foi apoiado por um prêmio de salário de Fonds de Recherche Québec Santé (FRQS), e A. R. B foi apoiado por uma bolsa da FRQS.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Baytril | CDMV | 11242 | |
| tesoura de dissecação sem corte | World Precision Instruments | 503669 | |
| Buprenorfina hidrocoreto | CDMV | ||
| Lente da câmera | Pentax | C31204TH | 12.5-75mm, f1.8, formato 2/3 ", C-mount |
| CMOS câmera de vídeo | Basler | acA2000-165uc | Formato de 2/3", 2048 x 1088 pixels, até 165 fps, montagem C, USB3 |
| Gás oxigênio comprimido | Praxair | ||
| 108703 | Cortadores | ||
| de ossos delicados | Ferramentas de ciência fina | 16109-14 | |
| Faca de dissecação | Ferramentas de ciência fina | 10055-12 | |
| Pinça fina Dumont | Ferramentas de ciência fina | 11254-20 | |
| Ethicon Vicryl 4/0 Sutura FS-2 Violeta Trançada (J392H) | CDMV | 111689 | |
| Almofada de aquecimento controlada por feedback | Aparelho Harvard | 55-7020 | |
| Ratos Long-Evans fêmeas | Charles River Laboratories | Código da cepa: 006 | 225-250g |
| Gelfoam | CDMV | 102348 | |
| Pinça hemostática curva | Fina Ferramentas de Ciência | 13003-10 | |
| Esterilizador de esferas quentes | Ferramentas de Ciência Fina | 18000-45 | |
| Hidrogel | 70-01-5022 | Isofluorano H20 | |
| Transparente | CDMV | 118740 | |
| Solução de Ringer com lactato | CDMV | 116373 | |
| Lidocaína (2%) | 123684 | CDMV | |
| 30 ga | CDMV | 4799 | |
| Área de campo aberto | Arena circular personalizada | de acrílico 96 cm de diâmetro, 40 cm de altura da parede | |
| Pomada oftálmica | CDMV | 110704 | |
| Computador pessoal | Com conectividade USB3 para gravar vídeo com a câmera listada | ||
| Solução salina fisiológica | CDMV | 1399 | |
| Proviodo | CDMV | 4568 | |
| Dieta líquida para roedores | Bioserv | F1268 | |
| Lâmina de couro cabeludo #11 | CDMV | 6671 | |
| Retrator de auto-retenção | World Precision Instruments | 14240 | |
| Tesoura de mola de iridectomia Vannas | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Máquina de anestesia veterinária e vaporizador de isofluarane | Dispomed | 975-0510-000 | |
| VLC media player | VideoLAN | videolan.org/vlc |
Referências
- Sharif-Alhoseini, M., et al. Animal models of spinal cord injury: a systematic review. Spinal Cord. 55 (8), 714-721 (2017).
- Sedy, J., Urdzikova, L., Jendelova, P., Sykova, E. Methods for behavioral testing of spinal cord injured rats. Neuroscience and Biobeha....
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Reimpressões e permissões
