Este protocolo descreve o estabelecimento de um modelo do rato do tumor-rolamento para monitorar a progressão e a angiogênese do tumor no tempo real pela imagem latente dupla do bioluminescência.
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Artigo de método
Imagem de bioluminescência dupla de progressão tumoral e angiogênese
Neste artigo
Resumo
Resumo
A angiogênese, como um processo crucial de progressão tumoral, tornou-se um ponto de pesquisa e alvo de terapia antitumoral. Entretanto, não há nenhum modelo de confiança para traçar a progressão e a angiogênese do tumor simultaneamente em uma maneira visual e sensível. A imagem latente de bioluminescence indica sua superioridade original na imagem latente viva devido a suas vantagens da sensibilidade elevada, da especificidade forte, e da medida exata. É apresentado aqui um protocolo para estabelecer um modelo do rato do tumor-rolamento injetando um renilla luciferase-etiquetou a linha de pilha do cancro da mama murino 4T1 no rato transgênicas com expressão angiogénese-induzida do luciferase do Firefly. Este modelo do rato fornece uma ferramenta valiosa para monitorar simultaneamente a progressão e a angiogênese do tumor no tempo real pela imagem latente dupla do bioluminescência em um único rato. Este modelo pode ser amplamente aplicado na triagem de drogas antitumorais e na pesquisa oncológica.
Introdução
A angiogênese é um processo essencial na progressão do câncer de neoplasias pequenas e localizadas para tumores maiores e potencialmente metastáticos1,2. A correlação entre o crescimento tumoral e a angiogênese torna-se um dos pontos de ênfase no campo da pesquisa oncológica. Entretanto, os métodos tradicionais de medir mudanças morfológicas não conseguem monitorar a progressão e a angiogênese do tumor simultaneamente em animais vivos usando uma aproximação visualizada.
A imagem de bioluminescência (bli) de células tumorais é um método experimental particularmente apropriado para mo....
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Protocolo
Os experimentos devem obedecer aos regulamentos nacionais e institucionais relativos ao uso de animais para fins de pesquisa. As permissões para realizar experimentos devem ser obtidas. O tratamento dos animais e os procedimentos experimentais do estudo aderem às diretrizes da Comissão de cuidados e uso de animais da Universidade Nankai, que estão em conformidade com as diretrizes para a assistência aos animais aprovadas pelos institutos nacionais de saúde (NIH).
1. LV-Rluc-RFP (RR) e LV-Rluc-RFP-HSV-TTK (RRT) embalagem e produção de Lentivirus
Nota: o pLV-RR transporta as sequências genéticas de Renilla luciferase....
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Resultados
Neste experimento, foi estabelecido um modelo de camundongo de câncer de mama utilizando células 4T1 para investigar a relação entre o crescimento tumoral e a angiogênese tumoral (Figura 1). Primeiramente, dois Lentivirus foram empacotados, que carregaram seqüências do gene que expressam Rluc/RFP (LV-RR) e Rluc/RFP/HSV-TTK (LV-RRT), respectivamente, como relatado previamente7. Em seguida, duas linhas de células 4T1 diferentes, denomina.......
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Discussão
Neste protocolo, uma aproximação dupla não invasora de BLI é descrita para monitorar o desenvolvimento e a angiogênese do tumor. O sistema do repórter de BLI é desenvolvido primeiramente, contendo o gene do suicídio de HSV-TTK/GCV para seguir a progressão do tumor e a regressão in vivo pela imagem latente de Rluc. Enquanto isso, a angiogênese tumoral é avaliada usando camundongos Vegfr2-Fluc-KI via imagem Fluc. Este modelo do rato do tumor-rolamento é capaz de fornecer uma plataforma prática para o desenvolvimento de seg.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi apoiada pelo programa de chave nacional R & D da China (2017YFA0103200), Fundação Nacional de ciência natural da China (81671734), e projetos-chave do programa de apoio à ciência e tecnologia de Tianjin (18YFZCSY00010), fundos de pesquisa fundamentais para Universidades centrais (63191155). Reconhecemos as revisões da Gloria Nance, que foram valiosas para melhorar a qualidade do nosso manuscrito.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,25% Tripsina-0,53 mM EDTA | Gibco | 25200072 Tubos | |
| 1,5 mL | Axygen Scientific | MCT-105-C-S | |
| Tubos de 15 mL | Corning Glass Works | 601052-50 | |
| 293T | ATCC | CRL-3216 | |
| 4T1 | ATCC | CRL-2539 | |
| 60 mm Prato | Corning Glass Works | 430166 | |
| Placa de 6 poços | Corning Glass Works | 3516 | |
| Gabinete de Biossegurança | Shanghai Lishen Scientific | Hfsafe-900LC | |
| Cloridrato de Blasticidina S (BSD) | Sigma-Aldrich | 15205 | |
| Kit de Contagem de Células-8 | MedChem Express | HY-K0301 | |
| CO2 Incubadora Termo-Fisher | Scientific | 4111 | |
| Coelenterazina (CTZ) | Tecnologia NanoLight | 479474 | |
| D-luciferina Paquímetro de Sal de Potássio | Ciências da Vida 119222 | ||
| DMEM Médio | Gibco | C11995500BT | |
| Fetal Soro Bovino (FBS) | BIOIND | 04-001-1A | |
| Microscópio de Fluorescência | Nikon | Ti-E / U / S | |
| Ganciclovir (GCV) | Sigma-Aldrich | Y0001129 | |
| Software | GraphPad Software Graphpad | Prism 6 | |
| Agulhas de seringa de insulina | Becton Dickinson | 328421 | |
| Isoflurano | Baxter | 691477H | |
| Sistema de embalagem lentiviral | Biosettia | cDNA-pLV03 | |
| Lipossoma | Invitrogen | ||
| Software de imagem viva | Paquímetro Life Sciences | Software de imagem viva 4.2 | |
| Sistema de imagem viva | Paquímetro Ciências da Vida | IVIS Lumina II | |
| MEM Medium | Invitrogen | 31985-070 | |
| Penicilina-estreptomicina | Invitrogen | 15140122 | |
| solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Corning Glass Works | R21031399 | |
| Polybrene | Sigma-Aldrich | H9268-1G | |
| RPMI1640 Médio | Gibco | C11875500BT | |
| SORVALL ST 16R Centrífuga | Thermo Fisher Scientific | Thermo Sorvall ST 16 ST16R | |
| Refrigerador de temperatura ultrabaixa | Haier | DW-86L338 | |
| XGI-8 Sistema de anestesia a gás | XENOGEN Corporação | 7293 |
Referências
- Folkman, J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. The New England Journal of Medicine. 285, 1182-1186 (1971).
- Kerbel, R. S. Tumor angiogenesis. The New England Journal of Medicine. 358, 2039-2049 (2008).
- Hosseinkhani, S.
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Reimpressões e permissões
