Este protocolo apresenta uma abordagem simples e flexível para a avaliação de novos agentes condicionantes ou estratégias para aumentar a viabilidade da doação cardíaca após a morte circulatória.
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Artigo de método
Modelo pré-clínico de doação cardíaca após a morte circulatória
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A demanda de transplante cardíaco está em ascensão; no entanto, a disponibilidade de órgãos é limitada devido a uma escassez de doadores adequados. A doação de órgãos após a morte circulatória (DCD) é uma solução para abordar essa disponibilidade limitada, mas devido a um período de isquemia morna prolongada e ao risco de lesão tecidual, seu uso rotineiro no transplante cardíaco raramente é observado. Neste manuscrito nós fornecemos um protocolo detalhado que imita pròxima práticas clínicas atuais no contexto de DCD com monitoração contínua da função de coração, permitindo a avaliação de estratégias e de intervenções cardioprotetores novas para diminuir lesão de isquemia-reperfusão.
Neste modelo, o protocolo de DCD é iniciado em ratos de Lewis anestesiados parando a ventilação para induzir a morte circulatória. Quando a pressão arterial sistólica cai abaixo de 30 mmHg, o tempo de isquemia quente é iniciado. Após um período isquêmico morno pré-ajustado, os corações são liberados com uma solução cardioplégica normotérmica, adquiridos, e montados em um sistema ex vivo da perfusão do coração de Langendorff. Após 10 min de reperfusão inicial e estabilização, o condicionamento cardíaco é continuamente avaliado por 60 min usando a monitorização da pressão intraventricular. Um ferimento de coração é avaliado medindo o troponina cardíaco T e o tamanho do enfarte é quantificado pela mancha histológica. O tempo de isquemia quente pode ser modulado e adaptado para desenvolver a quantidade desejada de danos estruturais e funcionais. Este protocolo simples permite a avaliação de diferentes estratégias de condicionamento cardioprotetor introduzidas no momento da cardioplegia, reperfusão inicial e/ou durante a perfusão ex vivo. Os achados obtidos nesse protocolo podem ser reproduzidos em grandes modelos, facilitando a tradução clínica.
Introdução
A transplantação contínua do órgão no transplante geral e cardíaco, em particular, está na ascensão Worldwide1,2. O método padrão de suprimento de órgãos é a doação após a morte encefálica (DBD). Dado os critérios estritos da inclusão de DBD, menos de 40% dos corações oferecidos são aceitados3, limitando desse modo a oferta frente à demanda crescente e estendendo a lista de espera do órgão. Para abordar esse problema, o uso de órgãos doados após a morte circulatória (DCD) é considerado uma solução potencial4.
No entanto, em doadores de....
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Protocolo
Todos os cuidados com os animais e protocolos experimentais conformados com o guia para o cuidado e uso de animais de laboratório e foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidado e uso de animais do centro de pesquisa centro hospitalier de l' Université de Montréal.
1. preparações preliminares
- Ligar o banho de água para aquecer o sistema de parto cardioplegia (Figura 1a) e o sistema de perfusão de Langendorff ex vivo (Figura 1b). Ajuste a temperatura da água a 38,5 ° c para uma temperatura da solução de 37 ° c. As fotografias da instalação podem ser vistas na
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Resultados
Após a extubação, a pressão arterial cai rapidamente em um padrão previsível (Figura 3). O tempo esperado até a morte é inferior a 5 min.
A Figura 4 mostra uma curva média de pressão/tempo no início do recondicionamento após 0, 10 e 15 min de Wit. Contractile função irá melhorar ao longo do tempo. O uso de curtos períodos de sagacidade permitirá a contratilidade voltar ao normal, e os danos morfológicos não serão detectáveis (
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Discussão
O protocolo apresentado aqui apresenta um modelo simples, conveniente e versátil de DCD cardíaco, oferecendo a oportunidade de avaliar a recuperação funcional cardíaca, dano tecidual e o uso de agentes cardioprotetores pós-condicionamento para melhorar a recuperação do doador os corações rejeitados de outra forma para transplante. Sistemas de perfusão cardíaca ex vivo (EVHP) foram otimizados para fornecer uma plataforma para avaliar a função cardíaca e oferecer uma oportunidade única de entregar e testar soluções modific.......
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Divulgações
Os autores relatam nenhum interesse proprietário ou comercial em nenhum produto mencionado ou conceito discutido neste artigo.
Agradecimentos
Partes deste trabalho foram apoiadas por uma generosa contribuição da Fondation Marcel et Rolande Gosselin e Fondation Sr. stefane Foumy. Nicolas Noiseux é estudioso do FRQ-S.
Os autores desejam agradecer a Josh Zhuo Le Huang, Gabrielle Gascon, Sophia Ghiassi, e Catherine Scalabrini por seu apoio na coleta de dados.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,9% de cloreto de sódio. Saco de 1 L | Baxter | para lavagem no sistema Langendorff modificado. | |
| 14 G 2" Cateter IV | Jelco | 4098 | Para atuar como tubo endotraqueal. |
| Cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio | Milipore-Sigma | T8877 | Coloração vital |
| 22 G 1" Cateter IV | BD | 383532 | cateter IV com tubo de extensão que facilita a manipulação para cateterismo carotídeo |
| Adson Dressing Fcp, 4 3/4", Serr | Skalar | 50-3147 | Pinça adicional para manipulação de tecidos |
| Afastador auto-retentor Alm 4x4 Dentes sem corte 2-3/4" | Skalar | 22-9027 | Afastador de tecido usado para manter o tórax aberto. |
| Bridge amp | ADinstruments | FE221 | Bridge amp para medição de pressão arterial intracarotídea |
| Cloreto de cálcio | Milipore-Sigma | C1016 | CaCl2 anidro, granular, ≤ 7,0 mm, ≥ 93,0% Parte da solução de Krebs |
| D-(+)-Glicose | Milipore-Sigma | G8270 | D-Glicose ≥ 99,5% Parte da solução de Krebs |
| DIN(8) para Transdutor BP Descartável | ADinstruments | MLAC06 | Cabo adaptador para ligação entre o amplificador da ponte e o transdutor de pressão |
| Transdutor BP descartável (torneira) | ADinstruments | MLT0670 | Transdutor de pressão para medição da pressão arterial intracarotídea |
| dPBS | Gibco | 14190-144 | Solução eletrolítica sem cálcio ou magnésio. |
| Curativo para os olhos Fcp, Str, Serr, 4" | Skalar | 66-2740 | Pinça adicional para manipulação de tecidos |
| Solução de formalina, tamponada neutra, 10% | Milipore-Sigma | HT501128 | Solução fixadora |
| Almofada de aquecimento | Sunbean | 756-CN | |
| Heparina sódica 1.000 UI/mL | Sandoz | Para anticoagulação sistêmica | |
| Ácido clorídrico 36,5 a 38,0% | Fisher scientific | A144-500 | Diluído 1:1 para correção de pH |
| Anestésico Cetamina | Bimeda | . 100 mg/mL | |
| LabChart | ADinstruments | Software de controle para o polígrafo Powerlab, permitindo análises off-line. Versão 7, com módulos de pressão arterial e loop fotovoltaico habilitados | |
| Balão de pressão do ventrículo esquerdo | Radnoti | 170404 | Em látex. Tamanho 4. |
| Solução de lidocaína HCl a 2% | AstraZeneca | Antiarrítmico para a solução cardioplégica | |
| Cloreto de magnésio ACS | ACP Chemicals | M-0460 | MgCl2+6H2O ≥ 99,0% Parte da solução Krebs |
| Micro sensor de pressão | Radnoti | 159905 | Micro sensor de pressão e amplificador conectado ao balão intraventricular |
| Marcapasso | Biotronik | Reliaty | Set para gerar um pulso a cada 200 ms para uma frequência cardíaca de 300 bpm. |
| Medidor de bancada de pH | Fisher scientific | AE150 | |
| Monitor fisiológico | Kent Scientific | Physiosuite | Para monitoramento contínuo da temperatura e saturação de roedores durante o procedimento |
| Plasma-Lyte Uma | Baxter | usada como base para preparar cardioplegia | |
| Cloreto de potássio | Milipore-Sigma | P4504 | KCl ≥ 99,0% Parte da solução de Krebs |
| Cloreto de potássio 2 meq/ml | Hospira | Parte da solução cardioplégica | |
| PowerLab 8/30 Polígrafo | ADinstruments | Polígrafo eletrônico | |
| Silk 2-0 | Ethicon | A305H | Material de sutura para aparelho Langendorff |
| Silk 5-0 | Ethicon | A302H | Material de sutura para carótida |
| Pequeno animal aparelho de anestesia | Hallowell EMC | 000A2770 | Ventilador para pequenos animais |
| Bicarbonato de sódio | Milipore-Sigma | S5761 | NaHCO3 ≥ 99,5% Parte da solução de Krebs |
| Cloreto de Sódio | Milipore-Sigma | S7653 | NaCl ≥ 99,5% Parte da solução de Krebs |
| Pellets de hidróxido de sódio | Produtos químicos ACP | S3700 | Diluído a 5 N (10 g em 50 mL) para correção de pH |
| Fosfato de sódio monobásico | Milipore-Sigma | S0751 | NaH2PO4 ≥ 99,0% Parte da solução de Krebs |
| Stevens Tenotomia Sciss, Str, Delicado, SH/SH, 4 1/2" | Skalar | 22-1240 | Pequenos scisors para abertura de átrios e veias cavas |
| Lâminas de corte de tecido | Thomas scientific | 6727C18 | Lâminas retas de aço carbono para fatiamento de tecido no final do protocolo |
| Seringa de segurança tuberculina com agulha 25 G 5/8" | CardinalHealth | 8881511235 | Para heparina injeção |
| Conjunto de Cirurgia Geral Veterinária | Skalar | 98-1275 | Instrumentos de cirurgia, incluindo scisors de dissecação e grampos de mosquito |
| Micro Set Veterinário | Skalar | 98-1311 | Instrumentos de cirurgia com microscisors usados para abertura da artéria carótida |
| Sistema de trabalho Heart Rat/Guinea Pig/Rabbit | Radnoti | 120101BEZ | Sistema cardíaco de trabalho modular modificado para as necessidades do protocolo. Inclui todos os tubos necessários, reservatórios e válvulas com camisa de água, incluindo torneira de parada de 2 e 3 vias |
| Xylazine | Bayer | Sedative. 20 mg/mL |
Referências
- Gass, A. L., et al. Cardiac Transplantation in the New Era. Cardiology in Review. 23 (4), 182-188 (2015).
- von Dossow, V., Costa, J., D'Ovidio, F., Marczin, N. Worldwide trends in heart and lung transplantation: Guarding the most pre....
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Reimpressões e permissões
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