É apresentado aqui um protocolo usando um estágio temperatura-controlado do microscópio que permita que um recipiente da amostra seja montado em um microscópio vertical.
Artigo de método
É apresentado aqui um protocolo usando um estágio temperatura-controlado do microscópio que permita que um recipiente da amostra seja montado em um microscópio vertical.
As amostras são coloc geralmente em um estágio horizontal do microscópio para a observação microscópica. No entanto, para observar a influência da gravidade em uma amostra ou no comportamento do estudo à tona, é necessário fazer o estágio do microscópio vertical. Para fazer isso, um microscópio invertido lateralmente inclinado por 90 ° foi planejado. Para observar amostras com este microscópio, os recipientes da amostra tais como placas de Petri ou as corrediças de vidro devem ser fixados ao estágio verticalmente. Um dispositivo que possa fixar recipientes da amostra no lugar em um estágio vertical do microscópio foi desenvolvido e é descrito aqui. O acessório deste dispositivo ao estágio permite a observação da dinâmica da amostra no plano vertical. A capacidade de regular a temperatura usando um aquecedor de borracha de silicone também permite a observação de comportamentos de amostra dependentes da temperatura. Além disso, os dados de temperatura são transferidos para um servidor de Internet. As configurações de temperatura e o monitoramento de logs podem ser controlados remotamente a partir de um PC ou smartphone.
A microscopia óptica é uma técnica empregada para aumentar os detalhes observáveis através da ampliação de uma amostra com lentes e luz visível. Na microscopia óptica, a luz é direcionada para uma amostra, então transmitida, refletida, ou a luz fluorescente é capturada por lentes de ampliação para observação. Vários tipos de microscópio estão disponíveis que diferem no projeto para acomodar diferentes usos e métodos de observação. Os projetos diferentes incluem um microscópio ereto, que seja estruturado para iluminar uma amostra de abaixo para a observação de acima, e um microscópio invertido, que ilumine a amostra de acima para a observação de abaixo. Os microscópios eretos são o projeto o mais comum e o mais amplamente utilizado. Microscópios invertidos são freqüentemente usados para observar as amostras que não podem permitir uma lente perto da distância de cima, tais como células cultivadas aderente à parte inferior de um recipiente. Muitos grupos de pesquisa relataram observações em uma ampla gama de campos usando microscópios invertidos1,2,3,4,5,6,7. Muitos dispositivos adicionais também foram desenvolvidos que aproveitam as características dos microscópios invertidos8,9,10,11,12,13 .
Atualmente, em todos os projetos convencionais do microscópio, o estágio do microscópio é horizontal e é conseqüentemente inadequado para a observação das amostras produzindo o movimento no plano vertical, (devido à gravidade, à flutuabilidade, ao movimento, etc.). Para fazer estas observações possíveis, o estágio do microscópio e o trajeto claro devem ser girados para vertical. O estágio vertical é exigido para montar verticalmente corrediças de vidro ou recipientes da amostra tais como pratos de Petri ao estágio. Para abordar isso, um microscópio invertido lateralmente inclinado por 90 ° já foi planejado. No entanto, a fixação de amostras com fita adesiva ou outros adesivos não produz a imobilidade de longo prazo necessária. Descrito aqui é um dispositivo que pode alcançar a estabilidade necessária. Este dispositivo permite a observação sobre o tempo do movimento da amostra no plano vertical. A montagem de um calefator de borracha do silicone igualmente fêz possível observar a influência da variação da temperatura no comportamento da amostra. Os dados de temperatura são transferidos para um servidor de Internet por Wi-Fi, e as configurações de temperatura e monitoramento de log podem ser controlados remotamente a partir de um PC ou smartphone. A nosso conhecimento, o estágio Unido a um microscópio inclinado lateralmente inclinado por 90 ° não foi relatado ainda em estudos precedentes.
O estágio do microscópio é compor de três placas de alumínio. A placa de alumínio médio é montada à placa de alumínio mais baixa que atribui ao estágio. A borracha de silicone que contem o sensor de temperatura é unida entre as placas de alumínio médias e superiores. As bandas de borracha são usadas para afixar a amostra. As garras são anexadas na esquerda e direita quatro pontos da placa de alumínio superior para fixar as bandas de borracha. O circuito de controle do regulador de temperatura recebe um sinal do sensor de temperatura incorporado na borracha de silicone e modula a energia elétrica pelo método da modulação da largura de pulso (PWM). A temperatura pode gradualmente ser aumentada a 50 ° c em incrementos de 1 ° c. Este dispositivo é útil para as aplicações em que os movimentos verticais da amostra podem ser temperatura-dependentes.
Este relatório fornece exemplos de efeitos de temperatura sobre o fenômeno flutuante de diatomáceas. Como exemplos de estudos de observação de diatomáceas, medidas de velocidade de sedimentação de aglomerados celulares, análises de movimento, estudos de estrutura Ultrafina, etc. foram relatados14,15,16,17 , 18 anos de , 19 anos de , 20 anos de , 21 anos de , 22 anos de , a gravidade 23. The específica dos diatomáceas que flutuam na água com organismos fotossintética é ligeiramente mais elevada do que aquela da água, assim que tendem a afundar-se; Entretanto, levantarão se mesmo a convecção ligeira está ocorrendo. Para estudar este fenômeno, uma corrediça de vidro é afixada verticalmente a um estágio do microscópio, e os efeitos da temperatura crescente no movimento vertical do diatomáceas são observados.
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1. projeto
e
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seguida
, e com parafusos. Fixar
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com parafusos. Fix
e
, e
, e, e e com adesivo.

2. Design de hardware contornos
3. esboço do projeto de software
4. configuração do sistema
5. projeto do microscópio invertido lateralmente
6. método de operação
Nota: aqui, a amostra utilizada é uma mistura de Bold modificado basal de água doce solução nutriente líquido meio de cultura, metasilicato de sódio, vitaminas, e água estéril. 800 μL desta amostra é diluído em 10 mL de meio de água fresca.
7. medida da distribuição de temperatura de superfície do calefator de borracha
8. teste da resposta da temperatura
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A Figura 2 mostra a distribuição da temperatura do aquecedor de borracha. A temperatura de superfície do calefator de borracha era uniforme em cada temperatura. A Figura 3 mostra a capacidade de resposta da temperatura medida para ajustar as mudanças de temperatura. A linha laranja mostra a temperatura definida e a linha azul mostra a mudança da temperatura da amostra. O overshoot do valor medido à mudança da configuração é peque...
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A análise da trajetória de células de diatomáceas móveis é uma abordagem útil para avaliar a motilidade da diatomácea. Entretanto, quando um microscópio invertido normal observar amostras horizontalmente, não é apropriado para observações da influência da gravidade ou do movimento de flutuação na direção vertical. Desenvolvido e descrito aqui é um estágio de microscópio vertical com controle de temperatura e anexado a um microscópio invertido, que foi girado por 90 °. Este estágio do microscópio com controle de temperatu...
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Os autores não têm conflitos para divulgar.
Os autores não têm agradecimentos.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Adaptador CA 12V2A | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | AD-D120P200 | Tóquio, Japão |
| ADS1015 Substrato | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | adafruit ID DO PRODUTO: 1083 | Tóquio, Japão |
| Placa de Alminium (Placa Traseira) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm× L 200?&vezes; T 1.5mm | Gifu, Japão |
| Alminium Plate (Placa de Frente) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm× L 200?&vezes; T 2mm | Gifu, Japão |
| Alminium Plate (Placa Inferior Média) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm× L 200?&vezes; T 4mm | Gifu, Japão |
| Placa de Alminium (Placa Superior Média) | Inoval Co., Ltd. | W 150mm× L 200?&vezes; T 5mm | Gifu, |
| Japão Pedestal de Alumínio (Placa Inferior) | Inoval Co., Ltd. | D 100mm&vezes; T 3mm (30Φ) | Gifu, Japão |
| Pedestal de alumínio (placa superior) | Inoval Co., Ltd. | D 100mm&vezes; T 3mm (30Φ) | Gifu, Japão |
| Solução Nutritiva Basal Basal Modificada em Negrito | Sigma-Aldrich Co. LLC | B5282-500ML | St. Louis, EUA |
| Caixa do Controlador | Marutsu Elec Co., Ltd. | pff-13-3-9 | Tóquio, Japão |
| CPU | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | ESP-WROOM-02D | Tóquio, Japão |
| Microscópio invertido | Olympus Corporation | CKX 53 | Tóquio, Japão |
| Adesivo de resina epóxi de endurecimento a baixa temperatura | ThreeBond Co., Ltd. | TB2086M | Tóquio, Japão |
| Volume semi-fixo multi-voltas Tipo vertical 500 e Omega; | Fornecedor verificado - Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | 3296W-1-501LF | Tóquio, Japão |
| Módulo OLED | Akihabara Inc. | M096P4W | Tóquio, Japão |
| Cortiça prensada (para eletrodo de suporte) | Tera Co., Ltd. | W 42mm&vezes; L 30? | Ishikawa, Japão |
| Cortiça pressionada (disco inferior) | Tera Co., Ltd. | D 100mm&vezes; T 0.5mm (20Φ) | Ishikawa, Japão |
| Cortiça pressionada (disco superior) | Tera Co., Ltd. | D 100mm&vezes; T 2,5 mm (20Φ) | Ishikawa, Japão |
| Codificador rotativo com interruptor com LED de 2 cores | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | P-05772 | Tóquio, Japão |
| Aquecedor de borracha de silicone | Three High Co., Ltd. | D 100mm&vezes; T 2,5 mm (20Φ) | Kanagawa, Japão |
| Substrato | Seeed Technology Co., Ltd. | mh5.0 | Shenzhen, China |
| Sensor de temperatura | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | NXFT15XH103FA2B050 | Tóquio, Japão |
| Regulador DC / DC de três terminais 3,3 V | Marutsu Elec Co., Ltd. | BR301 | Tóquio, Japão |
| Braço Flexível Universal | Banggood Technology Co., Ltd. | YP-003-2 | Hong Kong, China |
| Cabo USB USB-A - MicroUSB | Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd. | CABO USB A-MICROB | Tóquio, Japão |
| Vídeo Canera | Sony Corporation | HDR-CX590 | Tóquio, Japão |
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