Modelos ortotópicos de camundongos de melanoma uveal uveal uveal do fígado foram criados usando técnicas cirúrgicas de implantação ortotópica com esquema tumoral derivado do paciente e técnicas de injeção de agulha com linhas de células de melanoma uveal humana cultivadas.
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Artigo de método
Geração de uma plataforma de xenoenxerto de melanoma uveal humano ortotópico do fígado em camundongos imunodeficientes
Neste artigo
Resumo
Resumo
Nas últimas décadas, tumores xenoenxertos subcutâneos implantados no paciente ou linhas de células humanas cultivadas têm sido cada vez mais reconhecidos como modelos mais representativos para estudar cânceres humanos em camundongos imunodeficientes do que a célula humana estabelecida tradicional linhas in vitro. Recentemente, modelos de xenoenxerto tumoral derivados do paciente (PDX) ortotópicos implantados em camundongos foram desenvolvidos para melhor replicar características dos tumores de pacientes. Espera-se que um modelo de camundongo xenoenxerto ortotópico do fígado seja uma plataforma útil de pesquisa sobre o câncer, fornecendo insights sobre biologia tumoral e terapia medicamentosa. No entanto, a implantação do tumor ortotópico do fígado é geralmente complicada. Aqui descrevemos nossos protocolos para a implantação ortotópica de tumores uveal uveal metastáticos derivados do fígado. Nós cultamos linhas de células de melanoma uveal metastático do fígado humano em camundongos imunodeficientes. Os protocolos podem resultar em taxas de sucesso técnico consistentemente altas usando uma técnica de implantação ortotópica cirúrgica com pedaços de tumor de melanoma uveal derivado do paciente ou uma técnica de injeção de agulha com linha de células humanas cultivadas. Também descrevemos protocolos de tomografia computadorizada para detectar tumores hepáticos interiores e para técnicas de reimplantação usando tumores criopreservados para alcançar o reenxerto. Juntos, esses protocolos fornecem uma plataforma melhor para modelos de camundongos tumorais ortotópicos do fígado de melanoma uveal metastático do fígado em pesquisa translacional.
Introdução
O melanoma uveal é o tumor maligno intraocular mais comum entre adultos no mundo ocidental. Nos últimos 50 anos, a incidência de melanoma uveal (5,1 casos por milhão) manteve-se estável nos Estados Unidos1,2. O melanoma uveal surge de melanócitos na íris, corpo ciliário ou choroide, e é uma doença extremamente letal quando desenvolve metástase. A taxa de mortalidade de pacientes com metástase de melanoma uveal foi de 80% aos 1 ano e 92% aos 2 anos após o diagnóstico inicial das metástases. O tempo entre o diagnóstico de metástases e morte é tipicamente curto, menos de 6 meses, sem levar em conta a terapia
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Protocolo
Os pacientes inscritos no estudo devem fornecer consentimento por escrito permitindo o uso de amostras cirúrgicas descartadas para fins de pesquisa e estudos genéticos, de acordo com um protocolo aprovado pelo Conselho de Revisão Institucional. Este protocolo foi realizado em estrita conformidade com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais Laboratoriais dos Institutos Nacionais de Saúde e aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC).
1. Coleção de tecido tumoral fresco derivado do paciente
- Obtenha o tecido tumoral derivado do paciente a partir de uma cirurgia ou uma bió....
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Resultados
A implantação ortotópica cirúrgica usando o método do bolso do fígado pode transplantar o tumor uveal metastático da melanoma do fígado humano no fígado do rato com uma taxa de sucesso elevada de 80% dentro de seis meses. O tumor xenoenxerto enenxertos no fígado como um tumor solitário sem nódulos filha (Figura 1 e Figura 3A). A técnica cirúrgica de injeção ortotópica no fígado usando microagulhas enenxertou com sucesso células d.......
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Discussão
Os modelos ortotópicos atuais do xenograft são labor-intensive, demorados, e caros criar. Modelos de camundongos xenoenxerto de tumor ortotópico para câncer de fígado foram estabelecidos há mais de duas décadas há19,20,21. No entanto, esta técnica é complicada e requer o uso de equipamentos especiais, como um suporte de microagulha e 6-0 a 8-0 suturas finas um microscópio. Tumor e tecido hepático normal devem ser costurados cuid.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Somos gratos a M. Ohara, K. Saito e M. Terai, por revisaro manuscrito. Os autores reconhecem a revisão crítica para o auxílio editorial e inglês deste manuscrito pelo Dr. R. Sato no centro do cancer da perseguição da raposa. O trabalho aqui descrito foi apoiado pelo Bonnie Kroll Research Fund, o Mark Weinzierl Research Fund, o Eye Melanoma Research Fund da Thomas Jefferson University, the Osaka Community Foundation e JSPS KAKENHI Grant Number JP 18K15596 em Osaka City Universidade. Estudos no laboratório do Dr. A. Aplin foram apoiados pela concessão do NIH R01 GM067893. Este projeto também foi financiado pelo Prêmio de Ciência Transformadora do Reitor, um Prêmio de In....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Materiais, tecidos e animais | |||
| Buprenorfina | |||
| CO2 tanque | |||
| Criomedium | |||
| Exitron nano 12000 (agente de contraste de nanopartículas à base de metal alcalino-terroso) | Miltenyl Biotec | 130-095-700 | |
| HBSS 1x, com cálcio e magnésio | Corning | 21-020-CM | |
| celular de melanoma uveal metastático de fígado | |||
| humano Tecido de melanoma uveal humano no fígado | Todo o manuseio de tecidos deve ser feito em um capuz de nível 2 de biossegurança. Tenha cuidado ao trabalhar com tecido humano; Sempre use luvas e evite o contato direto com a pele. Suponha que os pacientes possam ter sido infectados com HIV ou outros organismos altamente transmissíveis. Não processe amostras conhecidas por serem portadoras de infecções. | ||
| Produtos | |||
| 67618-150-17 | |||
| Isopropanol | Fisher científico | A416-1 | isoflurano Purdue do iodo Evite o contato direto à pele e aos olhos e a inalação do agente anestésico. |
| Nitrogênio | |||
| Matrigel HC | BD 354248 | ||
| NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) camundongos | Jackson Lab | 5557 | 4 a 8 semanas de idade |
| PBS 1x, sem cálcio e magnésio | Corning | 21-031-CM | |
| RPMI 1640 | Corning | 10-013-CV | |
| Almofada de preparação de álcool estéril (álcool isopropílico 70%) | Produtos Nice-Pak | B603 | |
| Solução tampão de fosfato de paraformaldeído a 4% | Wako | 163-20145 | |
| Solução de álcool etílico a 70% | Fisher Scientific | 04-355-122 | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| >Equipamentos | |||
| Hemostático absorvível | Johnson and Johnson | 63713-0019-61 | |
| Autoclave | |||
| Medida | |||
| Cautery | Bovie Medical | MC-23009 | |
| Contador de células | |||
| Centrifuzer | |||
| Cotonete | |||
| Recipiente de congelamento criogênico | NALGENE | 5100-0001 | |
| Cryotube | SARSTEDT | 72.379 | |
| Tesoura curva | World Precision Instruments | 503247 | |
| Pinça ultrafina curva | World Precision Instruments | 501302 | |
| Freezer | |||
| de folha de tecido | |||
| Filtro F / AIR Canister | Harvard Apparatus | 600979 | |
| Almofada | |||
| Vaporizador de isoflurano | Artisan Scientific | 66317-1 | |
| Nitrogênio | |||
| Frasco de nitrogênio líquido | Thermo Fisher Scientific | 2123 | |
| Micro-CT scan | Siemens | ||
| Porta-agulhas | World Precision Instruments | 501246 | |
| placas de Petri | Fisher Scientific | FB0875713 | |
| Pipeta | |||
| Frasco | |||
| Capuz | Armário de nível 2 de biossegurança | ||
| Bisturi estéril nº 11 | AD Surgical | A300-11-0 | |
| Pinça reta | World Precision Instruments | 14226 | |
| Campo | |||
| Limitador de veias da cauda | Braintree Scientific | TV-150-STD | |
| Banho-maria | |||
| Seringa de 1 mL TB com agulha de 27 G | BD | 309623 | |
| tubo de 1,7 mL | Bioexpress | C-3260-1 | |
| 5-0 PDO Sutura | AD Surgical | S-D518R13 | |
| tubos cônicos de 15 mL | AZER SCIENTIFIC | ES-9152N | |
| agulha de 27 G | BD | 780301 | |
| agulha de 27 G | Hamilton | 7803-01 | |
| tubos cônicos de 50 mL | AZER SCIENTIFIC | ES-9502N | |
| 50 µ L micro seringa | BD | 80630 | |
| 50 µ L micro seringa | Hamilton | 7655-01 | |
| recipiente de 100 mL | Fisher Scientific | 12594997 | |
| 200μ Ponta |
Referências
- Aronow, M. E., Topham, A. K., Singh, A. D. Uveal Melanoma: 5-Year Update on Incidence, Treatment, and Survival (SEER 1973-2013). Ocular Oncology and Pathology. 4 (3), 145-151 (2018).
- Krantz, B. A., Dave, N., Komatsubara, K. M., Marr, B. P., Carvajal, R. D.
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Reimpressões e permissões
