Extração de cortisol de matrizes de Sturgeon Fin e Jawbone

Jalil Ghassemi Nejad; Mohammad Ataallahi; Mohammad H. Salmanzadeh; Kyung T. Park; Hong G. Lee; Alireza Shoae; Atieh Rahimi; Kyung I. Sung; Kyu H. Park

doi:10.3791/59961

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Artigo de método

Extração de cortisol de matrizes de Sturgeon Fin e Jawbone

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DOI:

10.3791/59961

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10 de setembro de 2019

Jalil Ghassemi Nejad¹^,² , Mohammad Ataallahi¹ , Mohammad H. Salmanzadeh³ , Kyung T. Park³ , Hong G. Lee²^,⁴ , Alireza Shoae⁵ , Atieh Rahimi⁶ , Kyung I. Sung¹ , Kyu H. Park¹

¹College of Animal Life Sciences, Kangwon National University, ²Team of An Educational Program for Specialists in Global Animal Science, Brain Korea 21 Plus Project, Konkuk University, ³Persian Gesture, ⁴Department of Animal Science and Technology, College of Animal Bioscience and Technology, Konkuk University, ⁵Department of Animal Science, Animal Physiology, AgResearch, ⁶Faculty of Agriculture, Animal Science Department, Ferdowsi University of Mashhad

Neste artigo

Resumo

Neste estudo, apresentamos um protocolo de extração de cortisol da barbatana e mandíbula de espécies de esturjão. Os níveis do cortisol da aleta e do Jawbone foram examinados mais adicional comparando dois solventes de lavagem seguidos por ensaios de ELISA. Este estudo pilotou a viabilidade do cortisol do Jawbone como um indicador novo do esforço.

Resumo

Os objetivos deste estudo foram desenvolver uma técnica para a extração de cortisol a partir de barbatanas de esturjão utilizando dois solventes de lavagem (água e isopropanol) e quantificar quaisquer diferenças nos níveis de cortisol Fin entre três espécies principais de esturjão. As barbatanas foram colhidas de 19 esturjão sacrificados, incluindo sete beluga (Huso Huso), sete siberianos (Acipenser baerii), e cinco Sevruga (A. stellatus). Os esturjão foram levantados em fazendas iranianas por 2 anos (2017-2018), e a análise da extração do cortisol foi conduzida em Coreia sul (janeiro-fevereiro 2019). Os Jawbones de cinco H. Huso foram usados igualmente para a extração do cortisol. Os dados foram analisados utilizando-se o procedimento de modelo linear geral (GLM) no ambiente SAS. Os coeficientes de variação intra e inter-ensaio foram de 14,15 e 7,70, respectivamente. Resumidamente, a técnica de extração de cortisol envolveu a lavagem das amostras (300 ± 10 mg) com 3 mL de solvente (água ultrapura e isopropanol) duas vezes, rotação a 80 rpm por 2,5 min, secagem de ar as amostras lavadas à temperatura ambiente (22-28 ° c) por 7 dias, secagem adicional as amostras usando um batedor de talão em 50 Hz para 32 min e moagem-los em pó, aplicando 1,5 mL de metanol para o pó seco (75 ± 5 mg), e rotação lenta (40 rpm) para 18 h em temperatura ambiente com mistura contínua. Após a extração, as amostras foram centrifugadas (9.500 x g por 10 min), e 1 ml de sobrenadante foi transferido para um novo tubo de microcentrífuga (1,5 ml), incubados a 38 ° c para evaporar o metanol e analisados via ensaio IMUNOENZIMÁTICO (ELISA) . Não foram observadas diferenças nos níveis de cortisol Fin entre as espécies ou nos níveis de cortisol de barbatana e mandíbula entre solventes de lavagem. Os resultados deste estudo demonstram que a matriz do Jawbone do esturjão é um indicador alternativo prometedor do esforço às matrizes contínuas.

Introdução

O cortisol é um indicador fiável do stress animal. Extração de cortisol fornece um quadro válido para os pesquisadores para monitorar os níveis de estresse e padrões gerais em estressores. Por exemplo, estudos prévios realizaram validação metodológica de medições de cortisol capilar utilizando vários métodos em humanos^1,2^{, macacos}^3,4^{, bovinos}⁵, ovinos⁶e Goldfish⁷^,⁸. Em espécies de peixes, as medições de cortisol em matrizes como escalas, muco cutâ....