Este protocolo usa peptídeos mistos G6PI para construir modelos de artrite reumatoide que estão mais próximos do da artrite reumatoide humana em células CD4+ T e citocinas. Células T assassinas naturais invariantes de alta pureza (principalmente iNKT2) com fenótipos e funções específicas foram obtidas por indução in vivo e purificação in vitro para imunoterapia adotiva.
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Artigo de método
Imunoterapia adotiva de células iNKT em Isomerase Isomerase Induzida de Glicose-6-Fosfato (G6PI)-Induzido RaMice
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Artrite reumatoide (RA) é uma doença inflamatória crônica autoimune complexa. A patogênese da doença está relacionada com células invariantes assassinas naturais T (iNKT). Pacientes com RA ativa apresentam menos células iNKT, função celular defeituosa e polarização excessiva de Th1. Neste estudo, foi estabelecido um modelo animal RA utilizando uma mistura de hGPI325-339 e hGPI469-483 peptídeos. As células iNKT foram obtidas por indução in vivo e purificação in vitro, seguidas de infusão em camundongos RA para imunoterapia adotiva. O rastreamento do sistema de imagem in vivo (IVIS) revelou que as células iNKT foram distribuídas principalmente no baço e fígado. No dia 12 após a terapia celular, a progressão da doença desacelerou significativamente, os sintomas clínicos foram aliviados, a abundância de células iNKT no timo aumentou, a proporção de iNKT1 no timo diminuiu, e os níveis de TNF-α, IFN-γ, e IL-6 em o soro diminuiu. A imunoterapia adotiva das células iNKT restaurou o equilíbrio das células imunes e corrigiu a inflamação excessiva do corpo.
Introdução
A artrite reumatoide (RA) é uma doença autoimune caracterizada por incomodade crônica e progressiva com incidência de 0,5 a 1%1,2. A patogênese subjacente é atribuída à proliferação anormal das células CD4+ e CD8+ T, manifestadas por um aumento na proporção de células CD4+IFN-γ+ e CD4+IL-17A+ T, e o número reduzido de células CD4+IL-4+ e CD4+CD25+FoxP3+ T. Portanto, a secreção de citocinas inflamatórias é aumentada, e uma reação inflamatória excessiva destrói o equilíbrio nativo e a função d....
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Protocolo
Todos os camundongos experimentais (150 no total) eram camundongos saudáveis de DBA/1 masculino, 6-8 semanas de idade (20,0 ± 1,5 g), criados em um ambiente específico sem patógenos (FPS). Não há tratamento especial antes de ser modelo. O experimento foi dividido em um grupo de controle saudável (15 camundongos), um grupo de controle de modelos (15 camundongos) e um grupo de terapia celular (55 camundongos). Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Bem-Estar Animal e Ética da Universidade hebei.
1. Construindo o Modelo da Doença
- Duplicando o modelo animal RA
- Pesar 1,75 mg de hG6PI 325-339 e hG6PI 469-483 fragmentos e dissol....
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Resultados
A pontuação do índice de artrite e a espessura da pata aumentaram após a modelagem. Em comparação com o grupo controle, os dedos do grupo modelo RA começaram a mostrar inchaço vermelho em 6 dias após a modelagem, com agravamento gradual. Aos 14 dias, o inchaço vermelho na articulação do tornozelo atingiu o pico, seguido de alívio gradual. A espessura da pata mudou de forma semelhante (P < 0,05) (Figura 1).
A infiltração celular inflamatória aumentou si.......
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Discussão
As células iNKT são células T especiais que fazem a ponte imunidade inata e adaptativa e são desenvolvidas principalmente a partir de CD4++/CD8+ thymocytes. As células iNKT têm funções imunoregulatórias diversas e interagem com outras células imunes por contato direto e secreção de diferentes citocinas23, afetando células dendríticas (DCs), macrófagos, nêutrons, células B, células T e diferenciação e desenvolvimento celular NK2<.......
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Divulgações
Os autores declaram que não há financiamento ou conflitos de interesse.
Agradecimentos
Nosso estudo foi apoiado pela Fundação Nacional de CiênciaNatural da China (NSFC) (81771755), Colleges and university's key research project of Hebei province (ZD2017009) e o Animal Lab of Medical Experiment Center, Hebei University. Somos gratos pelo apoio deles.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF | BD | 563490 | |
| América Anti-PE MicroBeads | Miltenyi | 130-048-801 | Alemanha |
| Colunas | Miltenyi | MS | Alemanha |
| Centrífuga Criogênica | Beckman | Allegra® X-15R | América |
| DiR | Thermo Fisher Scientific | D12731 | América |
| Centro de Incorporação | Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd. | BMJ-1 | China |
| FITC Hamster Anti-Mouse TCR β Cadeia | BD | 553170 | América |
| Citômetro de fluxo | BD | Accuri C6 | América |
| Freund adjuvante completo | Sigma | F5881 | América |
| hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML) | Karebay Biochem | 18062202 | China |
| hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT) | Karebay Biochem | 18062203 | China |
| Sistema de imagem in vivo | Paquímetro PerkinElmer | IVIS lumina II | América |
| Ionomicina Cálcio | Cayman | 10004974 | América |
| KRN7000 | AdipoGen | AG-CN2-0013 | América |
| Mouse CD1d Tetrâmero-PE | MBL | TS-MCD-1 | Japão |
| Mouse Percoll | Solarbio | P8620 | China |
| Microscópio Óptico | Olympus | Olympus-II | Japão |
| PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-ϒ t | BD | 562683 | América |
| PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet | BD | 561316 | América |
| Toxina da coqueluche | Sigma | P7208 | América |
| ésteres de forbol | Cayman | 10008014 | América |
| Tampão de lise de glóbulos vermelhos | BD | 555899 | América |
| RPMI-1640 | Indústrias Biológicas | 01-100-1ACS | Israel |
| Kit de citocinas Th1/Th2/Th17 | BD | 560485 | América |
| Ultramicrótomo | Leica Leica | EM UC6 | Alemanha |
Referências
- Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).
- Cross, M., et al. The global burde....
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Reimpressões e permissões
