Um modelo de furão de inflamação sensibilizada tardia preterm-isquêmica lesão cerebral

Resumo

O método descreve inflamação sensibilizada hicóxico-isquêmica e lesão cerebral hiperoxica no furão P17 para modelar a interação complexa entre inflamação prolongada e lesão cerebral oxidativa experimentada em um número de bebês prematuros tardios.

Resumo

Há uma necessidade contínua de modelos clinicamente relevantes de infecção perinatal e hipóxia-isquemia (EI), nos quais testar intervenções terapêuticas para bebês com as sequelas neurológicas da prematuridade. Furões são candidatos ideais para modelar o cérebro humano prematuro, como eles nascem lissencefálicos e desenvolver cérebros gironcfálicos pós-natal. Ao nascer, o desenvolvimento do cérebro de furão é semelhante a um feto humano de 13 semanas, com kits pós-natais (P) 17 considerados equivalentes a uma criança de 32 a 36 semanas de gestação. Descrevemos um modelo de lesão no furão P17, onde a administração de lipopolissacarídeos é seguida por isquemia cerebral bilateral, hipóxia e hiperoxia. Isso simula a interação complexa de inflamação prolongada, isquemia, hipóxia e estresse oxidativo experimentado em vários neonatos que desenvolvem lesão cerebral. Os animais feridos exibem uma série de gravidade da lesão bruta, com alterações morfológicas no cérebro, incluindo o estreitamento de vários giros corticais e sulci associados. Animais feridos também mostram desenvolvimento reflexo retardado, velocidade mais lenta e variável de locomoção em uma passarela automatizada, e diminuição da exploração em um campo aberto. Este modelo fornece uma plataforma para testar terapias putativas para lactentes com encefalopatia neonatal associada à inflamação e Hi, mecanismos de estudo de lesões que afetam o desenvolvimento cortical e investigar caminhos que fornecem resiliência animais não afetados.

Introdução

Há uma necessidade contínua de grandes modelos animais que reflitam a fisiopatologia da prematuridade e da hipóxia-isquemia perinatal em que intervenções terapêuticas para bebês podem ser testadas. Em 2017, 9,93% dos 382.726 lactentes nascidos nos Estados Unidos nasceram prematuros e 84% desses bebês nasceram entre 32 e 36 semanas de gestação^1. Em prematuros, a exposição perinnatal à infecção ou inflamação é comum, onde a ativação imune materna devido a patógenos virais ou bacterianos pode iniciar o trabalho prematuro. Postnatalmente, os bebês prematuros estão em alto risco de sepse precoce ou de início tardio^2. Os bebês....

Protocolo

Os procedimentos foram realizados de acordo com o Guia nih para o cuidado e uso de animais de laboratório e como parte de um protocolo aprovado pela Universidade de Washington Institutional Animal Care and Use Committee.

1. Administração de preparação e LPS

Nota: Consulte a Figura 1 para uma linha do tempo dos procedimentos.

1. Antes de iniciar o procedimento, selar, esterilizar e autoclave todos os instrumentos cirúrgicos e cortinas cirúrgicas. Prepare medicamentos pré-operatórios em frascos estéreis. Calcule a taxa de fluxo necessária para substituir o ar na....

Resultados

Dos 34 (n = 18 machos, n = 16 fêmeas) animais de seis ninhadas expostas ao insulto, oito animais (24%; n = 4 machos, n = 4 fêmeas) no grupo lesionado morreram durante o segundo período de hipóxia (n = 5), durante o manejo da temperatura (n = 2), ou durante a noite após o insulto (n = 1). No grupo ferido, nove dos 26 sobreviventes (35%) teve ferimento bruto visível. Cinco animais (n = 5 machos) tiveram lesão moderada, e quatro animais (n = 2 machos, n = 2 fêmeas) tiveram lesão grave, definida como escores de patologia bru.......

Discussão

Devido às semelhanças físicas e de desenvolvimento compartilhadas entre o cérebro furão e o cérebro humano, o furão está sendo cada vez mais usado para modelar lesões cerebrais adultas e de desenvolvimento. ^{8,9,10,11,12.} No entanto, a pesquisa até o momento sugere que o cérebro furão é resistente à lesão inicial, bem como altamente plástico, com déficits compo.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
80% Oxigênio	Praxair
9% Oxigênio	Praxair
Protetor de bancada absorvente	Kimtech	7546
Passarela automatizada	Noldus
Betadine esfoliante
Bupivacaína	Patterson Veterinária	07-888-9382
Pinças de buprenorfina
	Produtos de medição	SRA ME-CAL-FP-200	Faixa de 200 mm, resolução de 0,01 mm
Esponja de gaze de algodão	Fisher Scientific	22028556
Hemostático fino curvo	Roboz	RS-7101
Pinça curva	World Precision Instruments	501215
Hemostático curvo de amarração de sutura	Roboz	RS-7111
Ethovision	Noldus
Lubrificante para os olhos	Rugby	NDC 0536-1970-72
Furões (Mustela putorius furo)	Marshall Biosciences		Outbred (sem cepa específica)
Formalina	Fisher Scientific	SF100-4	10% (Tampão de fosfato / certificado)
Máquinas de cortar cabelo	Seringas	Conair GMT175N
	BD	329461	0,3 cc 3 mm 31 G
Isoflurano	Piramal	66794-017-25
Lidocaína	Patterson Veterinária	07-808-8202
LPS	Biological	LPS Ultrapure #423
Sensor de oxigênio	BW Alerta de gás	GAXT-X-DL-2
Pentobarbital
Câmara de plástico	Tellfresh	1960	10 L; 373 x 270 x 135 mm3
Solução salina, 0,9%	Hospira	RL-4492
Lâmina de bisturi	Integra Miltex	297
Cabo de bisturi	World Precision Instruments	500236	#3, 13 cm
Sutura estéril	Fina Science Tools	18020-50	Seda Trançada, 5/0
Aplicador de clipe cirúrgico	Fine Science Tools	12020-09
Removedor de clipe cirúrgico	Fine Science Tools	12023-00
Campos cirúrgicos	Medline Unidrape	VET3000
Luvas cirúrgicas	Ansell Perry Inc	5785004
Clipes surigicais	Fine Science Tools	12022-09
Termômetro (retal)	YSI	Precision 4000A
Termômetro (água)	Fisher Scientific	14-648-26
Fita umbilical	Grafco	3031	Banho-maria estéril
	Thermo Scientific	TSCOL19	19 L

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