O modelo de bexiga livre de detrusor permite o acesso direto ao suburotelio para estudar os mecanismos locais de regulação da disponibilidade de mediadores biologicamente ativos na propria suburotelio/laminado durante o armazenamento e a anulação da urina. A preparação assemelha-se pròxima ao enchimento de uma bexiga intata e permite que os estudos do pressão-volume sejam executados sem influências sistemáticas.
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Artigo de método
Modelo de bexiga de urina de urina descentralizada (Ex Vivo) com o músculo destrusor removido para acesso direto ao suburotelio durante o enchimento da bexiga
Neste artigo
Resumo
Resumo
Estudos anteriores estabeleceram a liberação de substâncias químicas de folhas de mucosa de bexiga plana afixadas nas câmaras de Ussing e expostas a mudanças na pressão hidrostática ou alongamento mecânico e de células urotelia cultivadas após alterações de pressão hidrostática, alongamento, inchaço celular ou forças de arrasto, e em lúmen da bexiga no final do enchimento. Tais achados levaram à suposição de que esses mediadores também são liberados em suburotelio (SubU)/lamina propria (LP) durante o enchimento da bexiga, onde afetam as células profundas na parede da bexiga para, em última análise, regular a excitabilidade da bexiga. Há pelo menos duas limitações óbvias em tais estudos: 1) nenhuma dessas abordagens fornece informações diretas sobre a presença de mediadores em SubU/LP, e 2) os estímulos utilizados não são fisiológicos e não recapitulam o preenchimento autêntico da bexiga. Aqui, discutimos um procedimento que permite o acesso direto à superfície suburotelial da mucosa da bexiga no decorrer do enchimento da bexiga. A preparação livre de intrusão de urina que criamos se assemelha ao enchimento da bexiga intacta e permite que estudos de volume de pressão sejam realizados na bexiga na ausência de sinalização confusa de reflexos espinhais e músculos suaves destruor. Usando o modelo de bexiga livre de detrusor, demonstramos recentemente que medições intravesivas de mediadores não podem ser usadas como um proxy para o que foi lançado ou presente no SubU/LP durante o enchimento da bexiga. O modelo permite o exame de moléculas de sinalização derivadas de urotelium que são liberadas, geradas pelo metabolismo e/ou transportadas para o SubU/LP durante o recheio da bexiga para transmitir informações aos neurônios e músculos lisos da bexiga e regular sua excitabilidade durante continência e micturição.
Introdução
O objetivo deste modelo é permitir o acesso direto ao lado submucosato da mucosa da bexiga durante diferentes fases do enchimento da bexiga.
A bexiga deve abster-se de contração prematura durante o enchimento e vazio quando o volume crítico e a pressão são alcançados. Continência anormal ou voiding da urina são freqüentemente associados com excitabilidade anormal do músculo liso detrusor (DSM) no curso do enchimento da bexiga. Excitabilidade do DSM é determinada por fatores intrínsecos às células musculares lisas e por influências geradas por diferentes tipos de células dentro da parede da bexiga. A parede da bexiga urinária consiste em uro....
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Protocolo
Todos os procedimentos envolvendo animais descritos neste manuscrito foram realizados de acordo com o National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals e o Institutional Animal Use and Care Committee da Universidade de Nevada.
NOTA:O modelo aqui apresentado consiste na remoção do músculo detrusor, enquanto o urotelio e SubU/LP permanecem intactos(Figura 1B)para permitir aos investigadores o acesso direto ao SubU/LP no decorrer do enchimento da bexiga.
1. Dissecação da Preparação da Bexiga Livre de Detrusor
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Resultados
A parede da preparação da bexiga livre de detritos e urina está intacta e contém todas as camadas, exceto o DSM e a serosa. Estudos de prova de princípio demonstraram que a parede da bexiga livre de DSM inclui urotelium e SubU/LP, enquanto a tunica muscular e a serosa estão ausentes (Figura 2)13.
O enchimento da bexiga livre de detrusor aproxima-se do enchimento norm.......
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Discussão
A bexiga tem duas funções: armazenamento e voiding da urina. O funcionamento normal dessas funções requer sensoriamento mecânico adequado de volume e pressão intralumínio e transdução de sinais através de células na parede da bexiga para regular a excitabilidade muscular detrusora. Acredita-se que a mucosa da bexiga (urotelio) regule a excitabilidade da bexiga, liberando uma variedade de moléculas de sinalização no SubU/LP que afetam vários tipos de células na parede da bexiga. Atualmente, a maioria das tentativas de car.......
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Divulgações
Partes deste trabalho foram publicadas anteriormente no Journal of Physiology (PMCID: PMC6418748; DOI:10.1113/JP27692413). A permissão foi concedida pela Wiley and Sons, Inc. para o uso de materiais desta publicação. Os autores não têm conflitos financeiros ou outros para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e Renais Grant DK41315.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| CaCl2 | Fisher | C79 | Fonte flexível |
| Dextrose | Fisher | D16 | Fonte flexível |
| Pinos de dissecação | Fine Science Tools | 26002-20 | Fonte flexível |
| Kent Scientific | GenieTouch | Fonte flexível | |
| KCl | Fisher | P217 | Fonte flexível |
| KH2PO4 | Fisher | P284 | Fonte flexível |
| Fonte de luz | SCHOTT ACEI | Fonte flexível | |
| Microscópio | Olympus SZX7 | Flexível para usar qualquer escopo | |
| MgCl2 | Fisher | M33 | Fonte flexível |
| NaCl | Fisher | S671 | Fonte flexível |
| NaHCO3 | Fisher | S233 | Fonte flexível |
| Agulhas 25G | Becton Dickinson | 305122 | Fonte flexível |
| Banho de órgão | Feito sob medida | Fonte flexível; Nós o fizemos a partir de Radnoti prato de dissecação | |
| PE-20 tubulação | Intramedic | 427405 | Fonte flexível |
| Transdutor de pressão | AD instrumento | Fonte flexível | |
| S & T Fórceps | Fine Science Tools | 00632-11 | Fonte flexível |
| Software pressão-volume | AD Instruments | Power lab | |
| Sutura Nylon, 6-0 | AD cirúrgico | S-N618R13 | Source flexível |
| Sutura Seda, 6-0 | Deknatel via Braintree Scientific, Inc. | 07J1500190 | Fonte seringas flexíveis |
| 1 mL | Becton Dickinson | 309602 | Fonte flexível |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | Fonte flexível |
| Circulador de água | Baxter | K-MOD 100 | Fonte flexível |
Referências
- Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. The uroepithelial-associated sensory web. Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).
- Fry, C. H., Vahabi, B. The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function. Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology
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Reimpressões e permissões
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