Um método revisado para induzir o linfedema secundário no hindlimb dos ratos

Resumo

Este modelo animal permite que os investigadores induzam o linfedema secundário estatìstica significativo no retrospecto dos ratos, durando pelo menos 8 semanas. O modelo pode ser usado para estudar a fisiopatologia do linfedema e para investigar novas opções de tratamento.

Resumo

Os modelos animais são de suma importância na pesquisa do linfedema, a fim de compreender a fisiopatologia da doença, mas também para explorar potenciais opções de tratamento. Este modelo do rato permite que os investigadores induzam o linfedema significativo que dura pelo menos 8 semanas. O linfedema é induzido usando uma combinação de radioterapia fracionada e ablação cirúrgica de linfáticos. Este modelo exige que os ratos recebem uma dose de 10 cinza (Gy) radiação antes e depois da cirurgia. A parte cirúrgica do modelo envolve a ligadura de três vasos linfáticos e extração de dois gânglios linfáticos do membro posterior do rato. Ter acesso a ferramentas microcirúrgicas e um microscópio é essencial, devido às pequenas estruturas anatômicas dos camundongos. A vantagem deste modelo é que ele resulta em linfedema estatisticamente significativo, o que fornece uma boa base para avaliar diferentes opções de tratamento. É também uma opção grande e facilmente disponível para o treinamento microcirúrgico. A limitação deste modelo é que o procedimento pode ser demorado, especialmente se não for praticado com antecedência. O modelo resulta em linfedema objetivamente quantificável em camundongos, sem causar morbidade grave e foi testado em três projetos separados.

Introdução

O linfedema é caracterizado por um acúmulo de líquido linfático que leva ao inchaço do tecido localizado, que ocorre principalmente devido ao fluxo prejudicado ou interrompido de fluido linfático nos vasos linfáticos¹. O fluxo linfático pode ser prejudicado ou interrompido por infecção, obstrução, lesão ou defeitos congênitos no sistema linfático^2. Essas etiologias resultam em acúmulo de líquido linfático, o que leva a um estado crônico de inflamação, resultando em fibrose subseqüente, bem como a deposição do tecido adiposo³. O linfedema pode ser categorizado como linfedema primário ou secundário.....

Protocolo

Os animais foram alojados na Universidade do Sul da Dinamarca Animal Care Facility de acordo com as orientações institucionais. Todos os procedimentos que envolvem indivíduos animais foram aprovados pela Inspecção de Experiências Animais, Ministério do Ambiente e Alimentação da Dinamarca.

1. Irradiação pré-cirurgia

NOTA: A irradiação pré-cirurgia ocorre 7 dias antes da cirurgia.

1. Induzir anestesia.
   1. Coloque o mouse em uma caixa de indução e coloque o vaporizador para 3% isoflurano com uma taxa de fluxo de oxigênio de 0,8 a 1,2 L/min para induzir anestesia de inalação.
      NOTA: Alternativamente, an....

Resultados

Este procedimento foi usado previamente em três experiências separadas. Todos os experimentos foram feitos por diferentes investigadores principais que todos são co-autores deste artigo. Em todos os três experimentos, foi tomado grande cuidado para aderir ao mesmo procedimento descrito neste protocolo. Em todos os três experimentos, o linfedema secundário foi induzido em um membro posterior, enquanto o outro membro posterior serviu como controle. Os volumes dos membros posteriores foram o.......

Discussão

Há alguns passos críticos neste protocolo. Em primeiro lugar, é importante que os pesquisadores tomem precauções de segurança ao trabalhar com radioatividade. Em segundo lugar, durante a parte cirúrgica deste protocolo, é importante iniciar o procedimento uma vez que o rato tenha sido anestesiado e terminá-lo sem pausas desnecessárias. Isso é importante para evitar um período cirúrgico excessivamente longo para o animal e evitar que a anestesia perca efeito durante a cirurgia. Recomenda-se administrar apenas uma injeção .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
10-0 Sutura de nylon	S& T	12051-10
6-0 Sutura de nylon - Dafilon	B Braun	C0933112
Coagulador - ICC 50	ERBE
Aplicadores com ponta de algodão	Yibon medical co
Pinça de dissecação	Lawton	09-0190
Retractores elásticos Hospital	Universitário
Elétrica clipper	Aesculap	GT420
Fentanil 0,315 mg/ml	de matriz
- PhysioSuite	Kent Scientific Corp.
Vaporizador de isoflurano 1000mg Attane	Scan Vet
Isoflurano - PPV	Penlon
Micro pinça de jewler	Lawton	1405-05
Micro porta-agulha	Lawton	25679-14
Micro tesoura	Lawton	10128-15
Micro pinça de amarração	Lawton	43953-10
Seringa Microfine U-40 0,5ml	BD	328821
Seringa Microlance 25g	BD
Seringa Microlance 27g	BD
Midazolam 5 mg/ml (hameln)	Matriz
Porta-agulhas - Circle wood	Lawton	08-0065
Cotonetes não tecidos	Selefa
Microscópio pico Opmi F170	Zeiss
Azul patenteado V - 25 mg/ml	Tesoura de Guerbet
- Joseph	BD	RH1630
Siemens INVEON scanner pré-clínico multimodal	Soluções pré-clínicas Siemens Fonte
de radiação - D3100	Gulmay
Stata Software Estatístico: Release 15	StataCorp LLC
Temgesic - 0,2 mg	Indivior
Vet - viscotears	Bausch & Lomb

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