Artigo de método

Conectividade funcional do estado de repouso do cérebro humano por meio de espectroscopia de correlação difusa óptica

DOI:

10.3791/60765

⸱

27 de maio de 2020

 ,  ,  , 
1Department of Biomedical, Industrial and Human Factors Engineering, Wright State University, 2South China Academy of Advanced Optoelectronics, South China Normal University

Neste artigo

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este protocolo demonstra como medir a conectividade funcional do estado de repouso no córtex pré-frontal humano usando um instrumento de espectroscopia de correlação difusa feito sob medida. O relatório também discute aspectos práticos do experimento, bem como etapas detalhadas para análise dos dados.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Para obter uma compreensão abrangente do cérebro humano, a utilização do fluxo sanguíneo cerebral (CBF) como fonte de contraste é desejada porque é um parâmetro hemodinâmico chave relacionado ao suprimento de oxigênio cerebral. As flutuações de baixa freqüência do estado de repouso baseadas no contraste de oxigenação têm sido demonstradas para fornecer correlações entre regiões funcionalmente conectadas. O protocolo apresentado utiliza espectroscopia de correlação difusa óptica (DCS) para avaliar a conectividade funcional do estado de repouso baseado no fluxo sanguíneo (RSFC) no cérebro humano. Os resultados do RSFC baseado na CBF no córtex frontal humano indicam que o RSFC intra-regional é significativamente maior nos cortices esquerdo e direito em comparação com o RSFC inter-regional em ambos os cortices. Esse protocolo deve ser de interesse de pesquisadores que empregam técnicas multimodais de imagem para estudar a função cerebral humana, especialmente na população pediátrica.

Introdução

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Quando o cérebro está em estado de repouso, demonstra uma alta sincronização da atividade espontânea em regiões funcionalmente relacionadas, que podem ser localizadas próximas à proximidade ou à distância. Estas regiões em sincronia são conhecidas como redes funcionais1,,22,3,,4,,5,,66,77,8,,9. Este fenômeno foi descoberto pela primeira vez por um estudo de ressonância magnética funcional (fMRI) utilizando sinais dependentes do nível de oxigênio no sangue sanguíneo (BOLD) que indicam níveis de oxigenação do sangue cerebral5,10, também conhecido como conectividade funcional do estado de repouso (RSFC). Anormalidades na RSFC têm sido associadas a distúrbios cerebrais como autismo11, Alzheimer12e depressão13. Assim, o RSFC é uma ferramenta valiosa para estudar pacientes com transtornos que têm dificuldade em realizar avaliações baseadas em tarefas. No entanto, muitos pacientes, como crianças autistas jovens, são candidatos pobres para avaliação pela RMF, pois requer permanecer ainda dentro de um espaço confinado por longos períodos de tempo14,15. A imagem óptica é rápida e vestível; assim, é adequado para a maioria dos pacientes, particularmente a população pediátrica16,17,18,19,20,21,22,23,24. Utilizando-se dessas vantagens, a espectroscopia funcional de infravermelho (fNIRS), que pode quantificar a concentração de hemoglobina e os parâmetros de saturação de oxigênio no cérebro, é usada para medir o RSFC em humanos (incluindo a população pediátrica4,8,25 e pacientes com autismo11).

A espectroscopia de correlação difusa óptica (DCS), uma técnica óptica relativamente nova, pode quantificar o fluxo sanguíneo cerebral, que é um parâmetro importante que associa o fornecimento de oxigênio ao metabolismo6,,17,26,27,28,29. O contraste óptico de fluxo quantificado pelo DCS mostrou-se ter maior sensibilidade no cérebro em comparação com o contraste de oxigenação30. Assim, utilizar parâmetros da CBF derivados do DCS para avaliar o RSFC é vantajoso.

DcS é sensível a mover células sanguíneas. Ao difundir fótons espalhados por células sanguíneas em movimento, isso faz com que a intensidade da luz detectada flutue ao longo do tempo. O DCS mede uma função de autocorrelação de intensidade baseada no tempo e sua taxa de decaimento depende dos parâmetros ópticos e do fluxo sanguíneo. Esses valores são, em última análise, utilizados para obter o índice de fluxo sanguíneo cerebral (CBFi). Com células sanguíneas em movimento mais rápido, a função de autocorrelação de intensidade decai mais rápido. Portanto, informações sobre o movimento nas profundezas da superfície do tecido podem ser derivadas (por exemplo, no cérebro) a partir de medidas de flutuações de luz difusas ao longo do tempo27,,31,,32,,33,,34,35. DcS é uma técnica complementar ao fNIRS amplamente conhecido que mede a oxigenação sanguínea17,36. Como tanto fNIRS quanto DCS são técnicas ópticas de imagem cerebral com alta resolução temporal na faixa de milissegundos, as configurações ópticas de imagem são muito menos sensíveis a artefatos de movimento do que a ressonância magnética. Eles também têm sido usados com sucesso para imagens cerebrais funcionais em populações pediátricas, incluindo bebês muito jovens16. Anteriormente, medidas superficiais de fluxo sanguíneo foram utilizadas para avaliar o RSFC em estudos pré-clínicos em camundongos37. Aqui, os parâmetros de fluxo sanguíneo são usados para quantificar o RSFC em nove adultos saudáveis como um estudo de prova de conceito38,39.

Neste estudo, é utilizado um sistema Comercial FD-fNIRS e um sistema DCS personalizado(ver Tabela de Materiais). O DCS que foi construído internamente é composto por dois lasers de ondas contínuas de 785 nm, 100 mW, de longo comprimento de coerência que são acoplados a um conector FC e oito máquinas de contagem de fótons únicos (SPCM) conectadas a um auto-correlator. Uma interface gráfica de usuário (GUI) de software personalizado também foi feita especificamente para que este sistema exiba e salve as contagens de fótons, curvas de autocorrelação e fluxo sanguíneo semi-quantitativo de cada canal SPCM em tempo real. As peças deste sistema são comumente utilizadas para DCS16,17,31,32,40,42,43,44, e os resultados obtidos também foram verificados internamente e utilizados em um estudo recente39.

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Protocolo

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O protocolo foi aprovado pelo Conselho de Revisão Institucional da Wright State University, e o consentimento informado foi obtido de cada participante antes do experimento.

1. Preparação do assunto

  1. Energize o sistema FD-fNIRS e DCS para aquecer por pelo menos 10 min (ver as seções 2 e 3 para obter mais detalhes) antes de iniciar quaisquer medições do assunto. Um exemplo de medição do assunto com o instrumento compacto DCS é mostrado na Figura 1.
  2. Primeiro, use uma medida de fita para medir a distância entre o nasion e a inion na cabeça de cada sujeito(Figura 2A).
  3. Com o nasion como ponto de partida, marque o local que é 10% da distância até a inion com um marcador de tinta. Isso denota o ponto entre Fp1 e Fp2 da montagem EEG 10/20(Figura 2A).
  4. Utilizando uma tampa EEG 10/20 (ver Tabela de Materiais),ajuste a tampa para que o ponto marcado esteja entre Fp1 e Fp2.
  5. Marque o ponto entre Fp1 e F7 (córtex esquerdo) e o ponto entre Fp2 e F8 (córtex direito). Isso representa as fronteiras entre o córtex pré-frontal superior e o córtex pré-frontal dorsolateral (DLFC) e entre o Córtex Pré-Frontal DLFC e o córtex pré-frontal inferior (IFC), respectivamente, para os hemisférios esquerdo e direito(Figura 2A).
  6. Usando uma sonda impressa em 3D, coloque as fibras de vários modos (MMF) nos pontos recém-marcados (pontos "S" na Figura 2C) e conecte cada uma à fonte de luz laser de 785 nm(Figura 2B,C).
  7. Coloque as fibras de modo único (SMFs) a 2,75 cm de distância do MMF. Duas fibras devem ser colocadas no DLFC (locais "DLFC,1" e "DLFC,2") e uma no IFC (local "IFC"). A colocação do SMF é replicada em cada lado do córtex para um total de seis SMFs(Figura 2c).
  8. Coloque outro SMF 1 cm abaixo do MMF no local "Ds"em ambos os lados do córtex (para a detecção do fluxo sanguíneo no couro cabeludo) e conecte cada um dos SMFs a máquinas individuais de contagem de fótons individuais(Figura 2C).

p class="jove_title">2. Configurações e calibração do FD-fNIRS

  1. Desligue as luzes e ligue o sistema FD-fNIRS para se preparar para a calibração.
    ATENÇÃO: Como precaução geral, não olhe diretamente para as fontes de luz e saídas de fibra, pois isso pode causar danos oculares. Use um cartão de sensor IR(Tabela de Materiais).
  2. Evite a exposição desnecessária dos detectores aos níveis de luz da sala para manter o funcionamento livre de ruídos e evitar danos aos detectores.
  3. Aqueça as fontes de luz e os detectores, alimentando o sistema e deixando-o funcionar por pelo menos 10 min (de preferência, mínimo de 20 min e máximo de 1 h para a precisão e estabilidade ideal) com a luz acesa, modulação ligada e tensão do detector ligada.
  4. Execute o software de aquisição de dados baseado em GUI. Ajuste o ganho do detector para obter um sinal ideal com o sensor conectado e preso a um fantasma de calibração (fantasma polidimetilsiloxano de propriedades ópticas conhecidas, consulte Tabela de Materiais)pressionando o botão "viés automático". Se o aviso de sobretensão piscar, diminua o ganho.
  5. Após ajustar o ganho do detector para obter o sinal máximo, desconecte uma das fibras de origem do detector e verifique se a corrente direta (DC) é inferior a 20 contagens por período de medição para a fibra de origem correspondente. Se for maior que esse valor, pode haver excesso de luz da sala vazando para o detector45. Se este for o caso, o sistema deve ser desligado, então qualquer excesso de luz na sala deve ser bloqueado/removido e as etapas 2.4-2.5 repetidas.
  6. Verifique o nível de sinal adequado de todas as fontes e detectores. O sistema define isso como acima de 100 e abaixo de 1.500 contagens por ciclo de medição.
  7. Realize a calibração pressionando o botão "Calibrar" na GUI. O sistema fará medições e aplicará fatores de calibração para medir corretamente as propriedades ópticas do fantasma conhecido. Esses fatores de calibração são salvos e aplicados automaticamente nas medições in vivo.
  8. Registre os dados de calibração, que fornecerão um registro do desempenho do sistema em um fantasma padrão.

3. Configurações dcs

ATENÇÃO: Como precaução geral, não olhe diretamente para as fontes de luz e as saídas de fibra para evitar danos oculares potenciais. Use o cartão do sensor IR (ver Tabela de Materiais).

  1. Evite a exposição desnecessária dos detectores (ou seja, luz ambiente) para obter dados brutos precisos para as curvas de autocorrelação e evitar danos aos detectores.
  2. Aqueça as fontes de luz laser DCS e o SPCM (ver Tabela de Materiais)alternando-os para a posição "on" e permitindo que eles atuem por pelo menos 10 min (de preferência, 20 min mínimo e máximo de 1 h para a precisão e estabilidade ideal).
  3. Execute o software de aquisição de dados DCS baseado em GUI, que exibe a contagem de fótons para cada detector e valores de fluxo sanguíneo semi-quantitativo em tempo real. Ajuste a posição da fibra, o ângulo (a face da fibra deve ser perpendicular à superfície da pele) e o tempo de aquisição de dados para obter um sinal de pelo menos 5.000 contagens/s (para uma relação de sinal adequado para ruído) e abaixo de 1.000.000 contagens/s (para evitar detectores prejudiciais)(Figura 3A).
  4. Verifique os níveis suficientes de contagem de fótons (a partir do passo 3.3) de cada detector verificando o nível de contagem de fótons e curvas de autocorrelação em tempo real mostradas no monitor.
  5. Verifique o contato de fibra suficiente sem qualquer vazamento de luz ambiente verificando a interceptação y da curva de autocorrelação exibida no monitor. O valor ideal é ~1.5 sem o uso de polarizadores(Figura 3B).
  6. Verifique se a sonda e as medidas não são propensas a artefatos de movimento apertando a faixa elástica de modo que esteja apertada o suficiente para resistir ao movimento, mas solta o suficiente para evitar qualquer desconforto ao sujeito. O usuário também deve verificar as curvas de autocorrelação no monitor simultaneamente, de modo que a curva de autocorrelação decai para 1 por tempo de correlação mais longo (τ > 10 ms) (Figura 3C).

4. Coleta de dados

  1. Instrua o sujeito para minimizar quaisquer movimentos durante a medição de 8 min.
  2. Apagar as luzes e certifique-se de que o sujeito está sentado em uma posição confortável com os olhos fechados.
  3. Execute uma linha de base de medidas FD-fNIRS usando colocando a sonda óptica do sistema FD-fNIRS na testa adjacente à sonda DCS. Em seguida, pressione o botão "Adquirir" na GUI de aquisição FD-fNIRS. Esses dados fornecerão propriedades ópticas estáticas, parâmetros de absorção e parâmetros de dispersão (μa, μ's) que serão utilizados para quantificação do parâmetro óptico dinâmico, CBFi17,20.
  4. Após a conclusão das medições FD-fNIRS, inicie a aquisição de dados nas medições ópticas de DCS pressionando o botão "Executar" na GUI de aquisição de dados DCS. Coletar dados para um total de 8 min com um tempo máximo de integração de 2 s (menos é preferível, dependendo da relação sinal-ruído para cada assunto).
  5. Se necessário, repita o experimento dentro de 1h do experimento inicial ou repita o experimento durante uma hora semelhante do dia para reduzir variações externas como fadiga, estimulantes ou temperatura.

5. Análise de dados

  1. Para os dados fd-fNIRS, extraia as propriedades ópticas de absorção e dispersão(μa, μ's)que são processadas pelo método de inclinação46,,47,,48,,49,,50,,51,,52,53.
  2. Para o DCS, uma vez que o pós-processamento é necessário, importe os dados brutos de correlação automática de cada um dos oito canais para o software de análise de dados.
  3. A quantificação dos parâmetros relacionados à CBF é detalhada em revisões recentes6,,27,54. Resumidamente, a partir da função de autocorrelação de intensidade normalizada (g2 [r,τ]), extrair a função de autocorrelação temporal do campo elétrico difuso normalizado (g1 [r,τ]) utilizando a relação Siegert: g2 (r,τ) = 1 + β | g 1 (r,τ)| 2.
    NOTA: β é uma constante, proporcional ao número de modos espaciais detectados6,17,27,55,56, varia de 0 a 1, e obtido por ajuste da função de autocorrelação de campo elétrico (normalizada) g1.
  4. Para obter um parâmetro relacionado ao fluxo sanguíneo (αDB) do ajuste, utilize a solução analítica para g16,27,54 e encaixe os dados na taxa de decaida do modelo ou do fluxo:
    EQUAÇÃO UM
    NOTA: Na equação acima, ko é o número de ondas de luz no meio, α é um fator proporcional à fração do volume sanguíneo do tecido, e DB é o coeficiente browniano eficaz. αDB pode ser definido como o índice de fluxo sanguíneo (ICB)6,54 ou CBFi17. Aqui, cbfi é usado.
  5. Ajuste o modelo utilizando os parâmetros ópticos obtidos a partir de FD-fNIRS. Os principais parâmetros a serem adequados são CBFi e β.
    NOTA: A Figura 3A apresenta dados representativos suficientes para análise. Os dados do DCS são descartados se (1) a função de autocorrelação for significativamente menor que 1,5 (β < 0.5) (ou seja, no caso da Figura 3B, onde a função é ~1.2, β < 0.2, devido ao vazamento de luz do quarto) ou se (2) a curva de autocorrelação não se deteriorar para 1 por tempo de correlação mais longo (τ > 10 ms) (ou seja, no caso da Figura 3C, onde o artefato de movimento, tal movimento de cabeça ou sonda, leva a dados inutilizáveis).
  6. Detendência aos resultados quantificados usando um ajuste polinômio de segunda ordem para remover a deriva lenta(Figura 4A).
  7. Use um filtro Butterworth de segunda ordem de fase zero com uma faixa de 0,009-0,080 Hz para remover quaisquer freqüências cerebrais indesejadas, como ondas mayer(Figura 4A).
  8. Use a regressão linear para obter os resíduos de cada canal em relação à medição de curta distância para remover os sinais superficiais do couro cabeludo em cada lado do córtex(Figura 4B).
  9. Calcular o coeficiente de correlação de Pearson entre cada par de canais para identificar a conectividade funcional do estado de repouso entre as regiões cerebrais (Figura 5).
  10. Transforme o valor de correlação em um valor z usando uma transformação de Fisher Z e realize um teste tpara obter o valor p (Figura 5). Use a taxa de descoberta falsa (FDR) para correção de múltiplas comparações.

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Resultados

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A viabilidade do uso do DCS para medir a conectividade funcional foi desmostrada com sucesso39. Foi medida a conectividade funcional do estado de repouso nos cortices pré-frontais de nove sujeitos. Os resultados (média ± DP) indicaram maior correlação na região intra-regional da esquerda (0,64 ± 0,25) e direita (0,62 ± 0,23), em comparação com a região inter-regional da esquerda (0,32 ± 0,32), (0,34 ± 0,27) e direita (0,34 ± 0,29), (0,34 ± 0,26) cortices. (Figura 5). ...

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Discussão

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Para determinar se a CBF medida pelo DcS detectou com precisão o RSFC, duas áreas do cérebro com propriedades RSFC conhecidas foram examinadas. Acredita-se que a conectividade funcional entre as regiões DLFC e entre DLFC e IFC exista57,,58,,59. A conectividade entre dois locais dentro do DLFC esquerdo e direito foi escolhida, porque a conectividade intra-regional é geralmente maior. Além disso, a conectividade entre o IFC e o DL...

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Divulgações

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Os autores não declaram interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

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Os autores gostariam de reconhecer o apoio financeiro da Terceira Fronteira de Ohio à Rede de Pesquisa e Inovação em Imagem de Ohio (OIRAIN, 667750), e à Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (nº 81771876).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Sonda impressa em 3DInternoN/ASonda PLA impressa em 3D (Craftbot, Craft unique)
785nm, 100mW, CW, FC acoplado a laserCrystaLaserDL785-100-SComponente DCS (fonte de luz)
ComponenteCorrelator.comFlex05-8ch(curva g2 de saída para o PC)
GUI de aquisição de dados GUIinterna/Acodificada no LabVIEW para executar o Sistema DCS
Software de análise de dados/Ainterno Código Matlab utilizado para obter resultados RSFC
Tampa de eléctrodo EEGOpenBCIN/ATampa de malha EEG com padrão 10/20 posições
Fibra multimodoOZ ÓpticaQMMJ-3,2.5-IRVIS-600/630-3PCBK-3Componente DCS (fibra de origem)
Fantasma de calibração OxiplexISS75019, 75020Conjunto de 2 PDMS Sonda
muscular Phantom Oxiplexde calibração ISS86010Sonda muscular de 4 canais
Oxiplex OxímetroISS95205FD-fNIRS (690nm, 830nm)
Medidorde potência ThorlabsPM100DAjustador de potência de luz laser
Cartão sensorThorlabsF-IRC1-Slaser IR visualizador de feixe
Fibra monomodoOZ ÓpticaComponente da DCS SMJ-3S2.5-780-5/125-3PCBK-3(fibra do detector)
Componente da DCSde ExcelitasSPMC-NIR-1x2-FCmáquina de contagem do Único-Fóton
DCS N N da (detector)

Referências

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