Artigo de método

Estudando efeitos neurocomportamentais de poluentes ambientais em larvas de zebrafish

DOI:

10.3791/60818

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5 de fevereiro de 2020

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1State Key Laboratory of Marine Geology, Tongji University, 2Key Laboratory of Yangtze River Water Environment, Ministry of Education, College of Environmental Science and Engineering, Tongji University, 3Shanghai Collaborative Innovation Centre for WEEE Recycling, WEEE Research Center of 10 Shanghai Polytechnic University, 4Shanghai Institute of Pollution Control and Ecological Security

Neste artigo

Resumo

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Um protocolo experimental detalhado é apresentado neste artigo para avaliação da toxicidade neurocomportamental de poluentes ambientais utilizando um modelo de larvas de zebrafish, incluindo o processo de exposição e testes para indicadores neurocomportamentais.

Resumo

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Nos últimos anos, mais e mais poluentes ambientais têm se mostrado neurotóxicos, especialmente nos estágios iniciais de desenvolvimento dos organismos. Larvas de zebrafish são um modelo preeminente para o estudo neurocomportamental de poluentes ambientais. Aqui, prevê-se um protocolo experimental detalhado para a avaliação da neurotoxicidade dos poluentes ambientais utilizando larvas de zebrafish, incluindo a coleta dos embriões, o processo de exposição, indicadores neurocomportamentais, o processo de teste e análise de dados. Além disso, o ambiente cultural, o processo de exposição e as condições experimentais são discutidos para garantir o sucesso do ensaio. O protocolo tem sido usado no desenvolvimento de drogas psicopáticas, pesquisas sobre poluentes neurotóxicos ambientais, e pode ser otimizado para fazer estudos correspondentes ou ser útil para estudos mecanicistas. O protocolo demonstra um processo de operação claro para estudar efeitos neurocomportamentais em larvas de zebrafish e pode revelar os efeitos de várias substâncias neurotóxicas ou poluentes.

Introdução

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Nos últimos anos, mais e mais poluentes ambientais têm sido comprovados neurotóxicos1,2,3,4. No entanto, a avaliação da neurotoxicidade in vivo após a exposição a poluentes ambientais não é tão fácil quanto a da perturbação endócrina ou toxicidade do desenvolvimento. Além disso, a exposição precoce a poluentes, especialmente em doses ambientalmente relevantes, tem atraído cada vez mais atenção nos estudos de toxicidade5,6,7,

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Protocolo

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O protocolo está de acordo com as diretrizes aprovadas pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Tongji.

1. Coleção de embriões de zebrafish

  1. Coloque dois pares de zebrafish Tubingen adulto saudável na caixa de desova na noite anterior à exposição, mantendo a relação sexual em 1:1.
  2. Remova o peixe adulto de volta ao sistema 30-60 min após o amanhecer na manhã seguinte.
  3. Remova os embriões para fora da caixa de desova.
  4. Enxágüe os embriões com água do sistema.
  5. Transfira os embriões para uma placa de petri de vidro (9 cm de diâmetro) com água suficiente do sistema.
  6. Observe os embriõ....

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Resultados

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Aqui, descrevemos um protocolo para estudar os efeitos neurocomportamentais de poluentes ambientais usando larvas de zebrafish estímulos leves. A locomoção, o ângulo de caminho e os testes de atividade social são definidos na introdução. A configuração das microplacas nos testes de locomoção e ângulo de caminho e as imagens do software são mostradas abaixo. Além disso, nossos próprios resultados de pesquisa são apresentados como exemplos. Dois estudos apresentam os efeitos da locomoção e .......

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Discussão

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Este trabalho fornece um protocolo experimental detalhado para avaliar a neurotoxicidade dos poluentes ambientais usando larvas de zebrafish. Os zebrafish passam pelo processo de embriões a larvas durante o período de exposição, o que significa que o bom cuidado dos embriões e larvas é essencial. Qualquer coisa que afete o desenvolvimento dos embriões e larvas pode influenciar o resultado final. Aqui, o ambiente cultural, o processo de exposição e as condições experimentais são discutidos para garantir o sucesso de todo .......

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Divulgações

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Os autores não têm nada para divulgar.

Agradecimentos

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Os autores são gratos pelo apoio financeiro da Fundação Nacional de Ciência Natural da China (21876135 e 21876136), pelo Projeto Nacional de Ciência e Tecnologia da China (2017ZX07502003-03, 2018ZX07701001-22), fundação do MOE-Xangai Laboratório-Chave de Saúde Ambiental da Criança (CEH201807-5) e Conselho sueco de Pesquisa (nº 639-2013-6913).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Microplaca de 48 poçosCorning3548Carcaça de Embyros
Microplaca de 6 poçosCorning3471Caixa de Embyros
BDE-47AccuStandard5436-43-1Poluente
DMSOSigma67-68-5de cossolvente
OlympusSZX 16Pipeta de instrumento de observação
Eppendorf3120000267Solução de transferência
ZebraboxViewpointZebraBoxInstrumento de comportamento
ZebrafishShanghai FishBio Co., Ltd.TubingenFornecedor de peixe-zebra
ZebraLabViewpointZebraLabSoftware de comportamento
Microscópio

Referências

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  1. Sun, L., et al. Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes). Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).
  2. Tian, L., et al.

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