Quantificação da Função e Morfologia Biventricular por Ressonância Magnética Cardíaca em Camundongos com Bandagem da Artéria Pulmonar

Summary

Para entender a fisiopatologia da adaptação do ventrículo direito (VD) à carga anormal, modelos experimentais são cruciais. No entanto, a avaliação das dimensões e função do VD é complexa e desafiadora. Este protocolo fornece um método para realizar ressonância magnética cardíaca (RMC) como um procedimento de referência não invasivo em camundongos submetidos à carga de pressão do VD.

Abstract

A função e a insuficiência do ventrículo direito (VD) são os principais determinantes do desfecho em cardiopatias adquiridas e congênitas, incluindo hipertensão pulmonar. A avaliação da função e morfologia do VD é complexa, em parte devido à forma complexa do VD. Atualmente, a ressonância magnética cardíaca (RMC) é o padrão-ouro para avaliação não invasiva da função e morfologia do VD. O protocolo atual descreve a imagem de RMC em um modelo de camundongo de carga de pressão do VD induzida por bandagem da artéria pulmonar (PAB). A PAB é realizada colocando-se uma sutura 6-0 ao redor da artéria pulmonar sobre uma agulha 23 G. O gradiente de PAB é determinado por ecocardiografia em 2 e 6 semanas. Com 6 semanas, a morfologia e a função dos ventrículos direito e esquerdo são avaliadas medindo os volumes e a massa sistólica e diastólica final em dez a onze cortes de cine de 1 mm de espessura usando um scanner de ressonância magnética de 9,4 T equipado com um gradiente de 1.500 mT / m. Os resultados representativos mostram que a PAB induz um aumento significativo na carga pressórica do VD, com efeitos significativos na morfologia biventricular e na função do VD. Também é demonstrado que, em 6 semanas de carga pressórica do VD, o débito cardíaco é mantido. Apresenta-se aqui um protocolo reprodutível para a quantificação da morfologia e função biventricular em um modelo de camundongo de carga de pressão do VD e pode servir como método para experimentos que exploram determinantes do remodelamento e disfunção do VD.

Introduction

Pacientes com doenças cardiovasculares adquiridas e congênitas, incluindo hipertensão pulmonar (HP), apresentam risco de disfunção e insuficiência ventricular direita (VD)¹. A adaptação do VD como resultado do aumento da carga pressórica é caracterizada por hipertrofia concêntrica nos estágios iniciais e dilatação progressiva na doença em estágio terminal. Além disso, está associada a distúrbios no metabolismo e na matriz extracelular, processos inflamatórios e, eventualmente, falha do VD 2,3,4,5,6.

Protocol

Todos os experimentos e cuidados com os animais são conduzidos de acordo com a Lei Experimental Animal Holandesa e estão em conformidade com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório publicado pelos Institutos Nacionais de Saúde dos EUA. O Comitê de Experimentos com Animais da Universidade de Groningen, Holanda, aprovou o protocolo experimental atual (número da licença: 2014-041/3005).

1. Alojamento e aclimatação

1. Use 20-30 g de camundongos selvagens tipo C57 preto 6 (C57BL / 6) (linha de reprodução institucional descrita anteriormente⁴⁷), machos e fêmeas, todos com mais de 8 semanas de idade. ....

Results

A taxa de mortalidade do procedimento cirúrgico PAB é de cerca de 10%. Os resultados apresentados mostram características de camundongos nos grupos sham (n = 5) e PAB (n = 8). Conforme mostrado na Figura 3, os valores de gradiente de PAB aumentaram significativamente em comparação com animais simulados em 2 e 6 semanas após PAB. Esse aumento da carga causou dilatação do VD expressa como aumento do VD, EDV e VD ESV (Figura 4A, B). A disfunção do .......

Discussion

Este protocolo fornece um método reprodutível para PAB em camundongos e a subsequente avaliação da remodelação cardíaca e adaptação funcional usando RMC.

O PAB difere de outros modelos de aumento da carga pressórica do VD porque envolve aumento absoluto e estático da pós-carga sem a presença de outros gatilhos. A carga pressórica do VD em modelos de hipóxia, monocrotalina, shunt ou uma combinação desses indutores é baseada no remodelamento da vasculatura pulmo.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Transdutor de ecocardiografia i13L de 14,0 MHz	GE Healthcare, Waukesha, WI, EUA
Cânula
Agulha 23G Scanner
de ressonância magnética 9.4T com gradiente de 1.500 mT/m Bruker	BioSpin, Ellingen, Alemanha
Câmara
Blunt 25G
Buprenorfina
Cloreto-hexidina
Software de pós-processamento CMR	Medis Medical Imaging Systems, Leiden, Holanda		Qmass versão 7.6
Software de visualização de dados e estatística	GraphPad Prism Inc, La Jolla, CA, EUA		software versão 7.02
Máquina de ecocardiografia	GE Healthcare, Waukesha, WI, USA
Pomada
Incubadora de tapete
(37° C)
Isoflurano
			isoflurano
Miniventilador para roedores	Hugo Sachs	modelo 687
polipropileno monofilamento 5-0 suturas
			monofilamento polipropileno 6-0
Agulha e seringa para subcutâneo
Eletrocardiograma pediátrico adesivos ácido
Instrumentos
Máscara