É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Protocolo de imagem e caracterização de terahertz para tumores de câncer de mama recém-excisados

10.4K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/61007

⸱

5 de abril de 2020

 ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Os tumores de câncer de mama humanos recém-excisados são caracterizados com espectroscopia terahertz e imagens seguindo protocolos de manuseio de tecidos frescos. O posicionamento tecidual é levado em consideração para permitir uma caracterização eficaz, proporcionando a análise em tempo hábil para futuras aplicações intraoperatórias.

Resumo

Este manuscrito apresenta um protocolo para lidar, caracterizar e imagem recém-excisado tumores de mama humana usando técnicas de imagem terahertz pulsada e técnicas de espectroscopia. O protocolo envolve o modo de transmissão terahertz em incidência normal e o modo de reflexão terahertz em um ângulo oblíquo de 30°. Os dados experimentais coletados representam pulsos de domínio de tempo do campo elétrico. O sinal de campo elétrico terahertz transmitido através de um ponto fixo no tecido excisado é processado, através de um modelo analítico, para extrair o índice de refração e coeficiente de absorção do tecido. Utilizando um scanner motor de passo, o pulso emitido por terahertz é refletido a partir de cada pixel no tumor, fornecendo uma imagem planar de diferentes regiões teciduais. A imagem pode ser apresentada no domínio de tempo ou frequência. Além disso, os dados extraídos do índice de refração e do coeficiente de absorção em cada pixel são utilizados para fornecer uma imagem terahertz tomográfica do tumor. O protocolo demonstra clara diferenciação entre tecidos cancerígenos e saudáveis. Por outro lado, não aderir ao protocolo pode resultar em imagens barulhentos ou imprecisas devido à presença de bolhas de ar e restos de fluidos na superfície do tumor. O protocolo fornece um método para avaliação das margens cirúrgicas dos tumores mamários.

Introdução

A imagem e a espectroscopia de Terahertz (THz) têm sido uma área de pesquisa em rápido crescimento na última década. O desenvolvimento contínuo de emissores thz mais eficientes e consistentes na faixa de 0,1-4 THz fez com que suas aplicações crescessem significativamente1. Uma área onde o THz mostrou-se promissor e crescimento significativo é o campo biomédico2. A radiação THz mostrou-se nonionizadora e biologicamente segura nos níveis de potência geralmente utilizados para analisar tecidos fixos3. Como resultado, a imagem e a espectroscopia de THz têm sido utilizadas para classificar e diferencia....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

Este protocolo segue todos os requisitos estabelecidos pelo departamento de Saúde e Segurança Ambiental da Universidade do Arkansas.

1. Configurar a área de manuseio de tecidos

  1. Pegue uma bandeja de metal de aço inoxidável e cubra-a com o saco de risco biológico, conforme mostrado na Figura 1. Qualquer manuseio dos tecidos biológicos será realizado dentro da área da bandeja (ou seja, a área de manuseio de tecidos).
  2. Prepare pinças de laboratório, lenços umedecidos, toalhas de papel, pacote de papel filtro, garrafas de tinta de tecido, garrafa de alvejante e garrafa de etanol ao redor da bandej....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Os resultados de imagem de THz18 obtidos seguindo o protocolo acima mencionado de amostra de tumor de câncer de mama humano #ND14139 recebidos do biobanco são apresentados na Figura 9. De acordo com o relatório patológico, o tumor #ND14139 foi um carcinoma ductal infiltrado de grau I/II (IDC) obtido de uma mulher de 49 anos através de um procedimento cirúrgico de lumpectomia de mama esquerda. A fotografia do tumor é mostrada na Figura 9A,.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

A imagem efetiva de reflexão thz de tecido fresco depende principalmente de dois aspectos críticos: 1) a adequada consideração do manuseio de tecidos (seções 2 e 4.15); e 2) a configuração do palco (principalmente a seção 4.11). A secagem insuficiente do tecido pode resultar em maior reflexão e incapacidade de visualizar regiões devido a altos reflexos de DMEM e outros fluidos. Enquanto isso, o baixo contato do tecido com a janela de imagem cria anéis ou pontos de baixa reflexão na imagem de reflexão thz que obscurecem o.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores declaram que não têm conflito de interesses.

Agradecimentos

Este trabalho foi financiado pelo Prêmio Institutos Nacionais de Saúde (NIH) # R15CA208798 e em parte pelo Prêmio NSF (National Science Foundation) nº 1408007. O financiamento para o sistema de THz pulsado foi obtido através do Prêmio NSF/MRI nº 1228958. Reconhecemos o uso de tecidos adquiridos pelo National Disease Research Interchange (NDRI) com apoio da bolsa NIH U42OD11158. Também reconhecemos a colaboração com o Oklahoma Animal Disease Diagnosticy Laboratory da Oklahoma State University para a realização do procedimento histopatológico em todos os tecidos manuseados neste trabalho.

....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Álcool isopropílico 70%VWR89108-162Contém 70% de isopropanol de grau USP e 30% de água deionizada de grau USP Detergente
em pó AlconoxVWR21835-032Detergente concentrado para remover contaminantes orgânicos de vidro, metal, aço inoxidável, porcelana, cerâmica, plástico, borracha e fibra de vidro
Sacos de Risco BioFisher Scientific19-033-712Sacos de Substituição de Recipientes de Resíduos de Risco Biológico Aprovados pela Justrite
de cartãoN/AN/ASucata de cartão para manter a face de imagem de tecido intacta quando imerso em formalina
Tubos de CentrífugaVWR10026-078Tubos de Centrífuga com Tampas Planas, Fundo Cónico, Polipropileno, Estéril, Linha Padrão
CotonetesWalmart551398298Q-tips Cotonetes de Algodão Originais usados para tingir o tecido
Álcool etílicoVWR71002-426KOPTECH Álcool etílico puro (não desnaturado) anidro (200 provas/100%) Óculos
proteção ocularVWR89130-918Óculos de segurança profissional Kimberly-clark
Máscara facialVWR95041-774DUKAL Corporation máscaras cirúrgicas
Papel de filtroSigma AldrichZ240087Whatman
Solução de formalinaSigma AldrichHT501128-4Lformalina tamponada neutra a 10%
Tumores humanos recém-excisados (Carcinoma ductal infiltrante (IDC))National Disease Research Interchange (NDRI biobankN/AUm protocolo é assinado com o NDRI para o tipo de tumores necessários
IRADECON Solução de alvejanteVWR89234-816Solução de alvejante de hipoclorito de sódio pré-diluído
Toalhetes KIMTECH SCIENCEVWR21905-026Toalhetes profissionais Kim Kimberly-clark
Jaleco de laboratórioVWR10141-342Este número de catálogo é para pinças
/pinças de laboratórioVWR82027-388Qualquer pinça de laboratório pode ser usada desde que não danifique o tecido
Suporte de amostra líquida (duas janelas de quartzo com um espaçador de teflon de 0,1 mm)TeraView, LtdN/AJanelas de quartzo de 1" de diâmetro, e 0.1452" de espessura
Luvas de mão de nitriloVWR82026-426Este número de catálogo é para luvas de tamanho médio
Cilindro de nitrogênioAirgasNI UHP300NITROGÊNIO UHP GR 5.0 TAMANHO 300 Toalha
papelVWR14222-32111" x 8.78" Folhas, 1 Ply
ParafilmVWR52858-076Termoplástico flexível. Folha enrolada e à prova d'água enrolada com papel para evitar a autoaderência.
Placa de PetriVWR470210-568Placa de Petri VWR, Deslizável, Placa Mono (fundo indivisível)
Placa de poliestirenoHome Depot1S11143A~ Peça quadrada de 10 cm x 10 cm cortada de uma folha de estireno antirreflexo de 11" x 14" x 0.05"
Software ScanAcquireTeraView, LtdN/ASoftware de sistema para medições de imagem de reflexão THz
Lâmina de baixo perfil de aço inoxidável (#4689)VWR25608-964Lâminas de micrótomo descartáveis Tissue-Tek Accu-Edge
Bandeja de metal de aço inoxidávelQuick Medical10FPolar Ware Bandejas de instrumentos médicos de aço inoxidável
Corantes de marcação de tecidoTed Pella, IncCorante amarelo #27213-1
Corante vermelho #27213-2
Corante azul #27213-4
Usado para orientar amostras de tecido excisadas
enviadas para o laboratório de histopatologia
TPS Spectra 3000TeraView, LtdN/ASistema de imagem e espectroscopia THz
TPS Spectra SoftwareTeraView, LtdN/ASoftware de sistema para medições de espectroscopia de transmissão THz
FM Suporte de Filtros de celulose de grau 1 de tamanho médio de

Referências

  1. Burford, N. M., El-Shenawee, M. O. Review of terahertz photoconductive antenna technology. Optical Engineering. 56 (1), 010901(2017).
  2. Sun, Q., et al. Recent advances in terahertz technology for biomedical applications. Quantitative Imaging ....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Explorar mais artigos

Avaliação de Margens CirúrgicasEspectroscopia de TerahertzCaracterização de TecidosImagem em Modo de ReflexãoAnálise de Espectroscopia de TransmissãoNivelamento da Plataforma da AmostraMontagem em Placa de PoliestirenoManuseio de Tecido Tumoral