Apresentado aqui é um protocolo para a determinação do estado oligomerico de proteínas de membrana que utiliza um sistema de nanopartículas de membrana celular nativa em conjunto com microscopia eletrônica.
Artigo de método
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Produtos Químicos | |||
| 30% Acrilamida/BIS SOL (37.5:1) | Bio-Rad | 161-0158 | |
| 4x Tampão de Amostra Laemmli (Tampão de Carregamento) | Bio-Rad | 1610747 | |
| Ácido Acético Glacial | ThermoFisher Scientific | A38S-212 | |
| Persulfato de Amônio (APS) | Bio-Rad | 161-0700 | |
| Cloranfenicol | Goldbio | C-105-5 | |
| Coomassie Brilliant Blue R-250 proteína mancha em pó | Bio-Rad | 161-0400 | |
| DTT (Ditiotreitol) (> 99% puro) Livre de protease | Goldbio | DTT10 | |
| Glicerol | ThermoFisher Scientific | G33-4 | |
| HEPES | ThermoFisher Scientific | BP310-1 | |
| Imidazol | Affymetrix | 17525 1 KG | |
| IPTG | Goldbio | I2481C100 | |
| Canamicina | Goldbio | K-120-25 | |
| Cloreto de magnésio hexahidratado | ThermoFisher Scientific | AA3622636 | |
| Metanol | ThermoFisher Scientific | A412-4 | |
| N,N-dimetiletilenodiamina (EDTA) | Merck | 8.03779.0100 | |
| NCMNS-P5-2 | Ainda não disponível comercialmente | Enviar solicitação de obtenção ao autor | |
| Precision Plus Protein Dual Color Standard | Bio-Rad | 161-0374 | |
| SDS (Dodecil Sulfato de Sódio) | Bio-Rad | 161-0301 | |
| SMA2000 | Cray Valley | Enviar solicitação de obtenção ao autor | |
| Cloreto de sódio | ThermoFisher Scientific | S271-10 | |
| TCEP-HCl | Goldbio | TCEP25 | |
| TEMED | Bio-Rad | 161-0800 | |
| Ótimo caldo Meio | Affymetrix | 75856 1 KG | |
| Tris Base | Bio-Rad | 161-0719 | |
| Acetato de Uranila | Ambinter | Amb22348393 | |
| Equipment | |||
| Avanti J-26S XPI | Beckman Coulter | B14538 | |
| Avanti JXN-30 | Beckman Coulter | B34193 | |
| Grades de Microscópio Eletrônico de Carbono (10 nm) | Homogeneizador | Sciences CF300--TH | |
| Eberbach | E7265 | ||
| Mini Microcentrífuga Corning LSE | ThermoFisher Scientific | 07-203-954 | |
| Avestina | EmulsiFlex-C3 | ||
| F9-R | GE Healthcare Life Sciences | 29003875 | |
| Mini-PROTEAN Tetra Célula de Eletroforese Vertical | Bio-Rad | 165-8004 | |
| NanoDrop 2000 Espectrofotômetro | ThermoFisher Scientific | ND-2000 | |
| Ultracentrífuga Optima L-90K | Beckman Coulter | PN LL-IM-12AB | |
| PELCO easiGlow Sistema de Limpeza de Descarga de Brilho | Ted Pella | 91000S-230 | |
| Potter-Elvehjem Safe Grind Tissue Grinder | Básica PowerPac Wheaton | 358013 | |
| 164-5050 | |||
| Razel Scientific Instruments | |||
| Superdex 200 Increase 10/300 GL | GE Healthcare Life Sciences | 28990944 | |
| Tecnai F20 200kV | FEI | ||
| Tipo 70 Ti Rotor de ângulo fixo | Beckman Coulter | ||
| General Materials | |||
| 1.5 ml Tubos de microcentrífuga | ThermoFisher Scientific | 05-408-129 | |
| 4 ml Amicon Ultra-4 30 kDa | Millipore Sigma | UFC803024 | |
| AKTA pure 25 L1 FPLC | GE Healthcare Life Sciences | 29018225 | |
| BL21(DE3)pLysS Cells | ThermoFisher Scientific | C606003 | |
| Falcon 50 ml Tubo de Centrífuga Cônico | ThermoFisher Scientific | 14-959-49A | |
| HisTrap HP 5 Coluna de ml | GE Healthcare Life Sciences | 17524802 | |
| pET-24a | EMD Biosciences | 69749-3 |
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Solicitar permissão para reutilizar o texto ou as figuras deste artigo JoVE
Solicitar permissão