Dupla injeção direta de sangue na Cisterna Magna como modelo de hemorragia subaracnóide

Summary

Descrevemos neste protocolo um modelo de rato de hemorragia subaracnóide padronizada (SAH) por uma dupla injeção de sangue total autólogo na cisterna magna. O alto grau de padronização do procedimento de dupla injeção representa um modelo médio-agudo de HAS com relativa segurança em relação à mortalidade.

Abstract

Entre os derrames, a hemorragia subaracnóide (HAS) consecutiva à ruptura de um aneurisma arterial cerebral representa de 5 a 9%, mas é responsável por cerca de 30% da mortalidade total relacionada ao acidente vascular cerebral com uma morbidade importante em termos de desfecho neurológico. Um vasospasmo cerebral atrasado (CVS) pode ocorrer na maioria das vezes em associação com uma isquemia cerebral retardada. Diferentes modelos animais de HAS estão sendo usados agora, incluindo perfuração endovascular e injeção direta de sangue na cisterna magna ou mesmo na cisterna pré-técnica, cada uma apresentando vantagens e desvantagens distintas. Neste artigo, é apresentado um modelo de rato padronizado de SAH por dupla injeção direta de volumes determinados de sangue total autólogo na cisterna magna. Resumidamente, os camundongos foram pesados e, em seguida, anestesiados pela inalação de isoflurano. Em seguida, o animal foi colocado em posição reclinável em um cobertor aquecido mantendo uma temperatura retal de 37 °C e posicionado em uma estrutura estereotática com uma curva cervical de cerca de 30°. Uma vez no lugar, a ponta de uma micropipette de vidro alongada preenchida com o sangue arterial homólogo retirado da artéria carótida de outro rato da mesma idade e gênero (C57Bl/6J) foi posicionada em um ângulo reto em contato com a membrana atlanto-occipital por meio de um micromanipulador. Em seguida, 60 μL de sangue foi injetado na cisterna magna seguido por uma inclinação de 30° para baixo do animal por 2 minutos. A segunda infusão de 30 μL de sangue na cisterna magna foi realizada 24 h após a primeira. O acompanhamento individual de cada animal é realizado diariamente (avaliação cuidadosa do peso e bem-estar). Este procedimento permite uma distribuição previsível e altamente reprodutível do sangue, provavelmente acompanhada de elevação da pressão intracraniana que pode ser imitada por uma injeção equivalente de um fluido cerebral cerebral artificial (CSF), e representa um modelo agudo a leve de HAS induzindo baixa mortalidade.

Introduction

A hemorragia subaracnóide (HAS) é responsável por até 5% de todos os casos de AVC e constitui uma patologia relativamente comum com incidência de 7,2 a 9 pacientes por 100.000 por ano, com uma taxa de mortalidade de 20%-60% dependendo do estudo^1,,2,,3. Na fase aguda, a mortalidade é atribuível à gravidade do sangramento, reejamento, vasospasmo cerebral (CVS) e/ou complicações médicas⁴. Nos sobreviventes, a lesão cerebral precoce (EBI) está associada à extensão parêncima da hemorragia e aumento abrupto da pressão intracraniana, o que pode resultar em is....

Protocol

Todos os procedimentos foram realizados sob a supervisão de H. Castel, de acordo com o Comitê de Ética francês e as diretrizes da Diretiva do Parlamento Europeu 2010/63/UE e do Conselho para a Proteção dos Animais Utilizados para Fins Científicos. Este projeto foi aprovado pelo CENOMEXA local e pelos comitês nacionais de ética em pesquisa e testes em animais. Os camundongos C57Bl/6J Rj masculinos (Janvier), com idade entre 8 e 12 semanas, foram alojados sob condições ambientais padrão controladas: 22 °C ± 1 °C, 12 horas/12 horas de ciclo claro/escuro e água e alimentos disponíveis ad libitum.

1. Configuração da cirurgia SAH e preparaç....

Results

Cronograma experimental, procedimento, acompanhamento e mortalidade
Figura 1A e Figura 1B resumem o protocolo modelo SAH por dupla injeção intracisternal de sangue. Resumidamente, no primeiro dia de indução sah (D-1), 60 μL de sangue retirado de um rato homólogo ou 60 μL de fluido cerebrospinal artificial (aCSF) foram injetados na cisterna magna em condições SAH ou falsas, respectivamente. No dia seguinte (D0), 30 μL de sangue retirado de um .......

Discussion

Apesar da intensidade da pesquisa no campo da HAS e do desenvolvimento de estratégias terapêuticas como opções de tratamento endovascular e farmacológico aumentando nos últimos vinte anos, a mortalidade permanece elevada na primeira semana de internação hospitalar e atinge cerca de 50% nos 6 meses^{seguintes 24,25}. Este modelo pré-clínico atual por injeção dupla diária de sangue arterial homólogo na cisterna magna tem sido reconhecido por sua valid.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
hemostático absorvível	Ethicon	Surgicel
fio de sutura absorvível	Ethicon	Vicryl 5.0
manta elétrica auto-regulada	Harvard Apparatus	50-7087-F
bluetack para fixação capilar	UHU	Patafix
balança eletrônica	Denver Instrument	MXX-2001
capilares de vidro	Harvard Apparatus	GC150F-15	diâmetro interno 0,86 mm diâmetro externo 1,5 mm
vaporizador de isoflurano Extrator	Phymep	V100
Sutter	Instrument Company	P-97
agulha 26 G	BD microbalança	300300
fio de sutura não absorvível	Peters cirúrgico	Filapeau 4.0
quadro estereotáxico	instrumentos David Kopf	Modelo 902
equipamento cirúrgico	Kent braçadeira científica	, microtesoura, tesoura
seringa 20 mL TERUMO	Thermofisher	11866071