Este manuscrito descreve um método para gravações contínuas de EEG de vídeo usando eletrodos de profundidade múltiplos em camundongos neonatais submetidos à hipoxia-isquemia.
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Artigo de método
Eletroencefalograma de vídeo contínuo durante hipoxia-isquemia em camundongos neonatais
Neste artigo
Resumo
Resumo
A isquemia de hipóxia é a causa mais comum de convulsões neonatais. Modelos animais são cruciais para a compreensão dos mecanismos e fisiologia subjacentes às convulsões neonatais e à isquemia de hipóxia. Este manuscrito descreve um método de monitoramento contínuo de eletroencefalograma de vídeo (EEG) em camundongos neonatais para detectar convulsões e analisar o fundo do EEG durante a isquemia de hipóxia. O uso de vídeo e EEG em conjunto permite a descrição da semiologia da convulsão e a confirmação de convulsões. Este método também permite a análise de espectrogramas de energia e tendências de padrão de fundo EEG durante o período de tempo experimental. Neste modelo de isquemia de hipóxia, o método permite o registro de EEG antes da lesão para obter uma linha de base normativa e durante a lesão e recuperação. O tempo total de monitoramento é limitado pela incapacidade de separar filhotes da mãe por mais de quatro horas. Embora tenhamos utilizado um modelo de convulsões hipoxica-isquêmicas neste manuscrito, este método para monitoramento de vídeo neonatais poderia ser aplicado a diversos modelos de doenças e convulsões em roedores.
Introdução
A encefalopatia isquêmica hipóxica (HIE) é uma condição que afeta 1,5 em 1000 recém-nascidos anualmente e é a causa mais comum de convulsões neonatais1,2. Os bebês que sobrevivem correm risco para várias deficiências neurológicas, como paralisia cerebral, deficiência intelectual e epilepsia3,4,5.
Os modelos animais desempenham um papel fundamental na compreensão e investigação da fisiopatologia da isquemia de hipóxia e convulsões neonatais6,7
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Protocolo
Todos os estudos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade da Virgínia.
1. Construção de eletrodo/cabo
- Use um fio de aço inoxidável isolado unipolar (0,005" de diâmetro nu, 0,008" revestido) para fazer um eletrodo conectado com um conector de soquete feminino (conector de recipiente feminino 0,079).
- Use um cabo feito sob medida para conectar os animais ao amplificador.
- Conecte um conector masculino de 4 pinos (conector masculino de 0,079") à unidade de 4 canais ganha impedância correspondente ao amplificador operacional (op-amp). Conecte um resistor ....
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Resultados
Semiologia convulsiva
A exposição à hipóxia neonatal resulta em convulsões generalizadas e focais em camundongos (Figura 1A-C). Gravações de EEG de vídeo permitem que achados eletrográficos sejam correlacionados ao comportamento em vídeo. Esses comportamentos foram pontuados utilizando-se um escore de apreensão comportamental de roedores neonatais (BSS)16. Além da BSS, categorizamos eventos com base em se o comport.......
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Discussão
Apresentamos um modelo para monitoramento contínuo de vídeo-EEG em camundongos neonatais durante convulsões hipoximic-isquêmicas. A análise de vídeo em conjunto com o EEG permite a caracterização da semiologia convulsiva. A análise do EEG permite a extração de espectrogramas de energia e análise de amplitude de fundo.
A colocação correta e cuidadosa de eletrodos é crucial neste protocolo, pois lesões durante a colocação de eletrodos ou colocação imprecisa podem afetar significativamente os res.......
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Agradecimentos
Reconhecemos as seguintes fontes de financiamento: NIH NINDS – K08NS101122 (JB), R01NS040337 (JK), R01NS044370 (JK), University of Virginia School of Medicine (JB).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| SURGERY | |||
| Aplicador de Ponta Esferográfica | Metrex Research | 8300-F | aplicador i-bond |
| Cranioplast (Pó/Resina) | Coltene | H00383 | Perm Reline/Power |
| I-Bond | Kulzer GmbH, Alemanha | ||
| LOOK Silk Suture | Especialidades Cirúrgicas Corporation | SP115 | LOOK SP115 Seda Trançada Preta Sutura cirúrgica não absorvível |
| RS-5168 Pinça Botvin Roboz | Instrumento Cirúrgico | RS5168 | Pinça para cirurgia/ligadura |
| RS-5138 Pinça Graefe | Roboz Instrumento Cirúrgico | RS5138 | Pinça para cirurgia/ligadura |
| Luz UV para I-Bond | Blast Lite By First Media | BL778 | Luz UV para I-bond |
| Vannas Microdissecting Scissor | Tesoura de instrumento cirúrgico | RS5618 | de Roboz para ligação |
| Vet Bond | 3M Vetbond | 1469SB | Vet Glue |
| HYPOXIA | |||
| Hypoxidial | Starr Life Science | ||
| Sensor | de oxigênio Produtos médicos | MiniOxI- analisador de oxigênio/sensor para plataforma de hipóxia | |
| EEG RECORDING | |||
| Conector de receptáculo fêmea 0.079" | Mill-Max Manufacturing Corp | 832-10-024-10-001000 | Encomendado da Digikey |
| Amplificador de Grama | Natus Neurology Incorporated | Produto | |
| de Grama LabChart Pro | ADI Instruments | Software para executar o sistema | |
| Conector de Soquete Macho 0.079" | Mill-Max Manufacturing Corp | 833-43-024-20-001000 | Encomendado da Digikey |
| Operational Amplifier | Texas Instruments, Dallas, TX, USA | TLC2274CD | TLC2274 Quad Low-Noise Rail-to Rail Operational |
| Amplifier | Texas Instruments, Dallas, TX, USA | TLC2272ACDR | TLC2274 Quad Low-Noise Rail-to Rail Amplificador Operacional |
| Fio de Aço Inoxidável | A-M Systems | 791400 | 0.005" Bare/0.008" Revestido 100 ft |
| Fio Ultra-Flexível | McMaster-Carr | 9564T1 | 36 Fio de gaze de várias cores |
Referências
- Vasudevan, C., Levene, M. Epidemiology and aetiology of neonatal seizures. Seminars in Fetal & Neonatal Medicine. , (2013).
- Volpe, J., et al. Neonatal Seizures. Volpe's Neurology of the Newborn. , Elsevier. 275-321 (2018).
- Shankaran, S., et al.
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Reimpressões e permissões
