Artigo de método

Eletroencefalograma de vídeo contínuo durante hipoxia-isquemia em camundongos neonatais

DOI:

10.3791/61346

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11 de junho de 2020

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1Department of Pediatrics, University of Virginia, 2Department of Neurology, University of Virginia, 3Neuroscience Graduate Program, University of Virginia, 4Brain Institute, University of Virginia, 5Department of Neuroscience, University of Virginia

Neste artigo

Resumo

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Este manuscrito descreve um método para gravações contínuas de EEG de vídeo usando eletrodos de profundidade múltiplos em camundongos neonatais submetidos à hipoxia-isquemia.

Resumo

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A isquemia de hipóxia é a causa mais comum de convulsões neonatais. Modelos animais são cruciais para a compreensão dos mecanismos e fisiologia subjacentes às convulsões neonatais e à isquemia de hipóxia. Este manuscrito descreve um método de monitoramento contínuo de eletroencefalograma de vídeo (EEG) em camundongos neonatais para detectar convulsões e analisar o fundo do EEG durante a isquemia de hipóxia. O uso de vídeo e EEG em conjunto permite a descrição da semiologia da convulsão e a confirmação de convulsões. Este método também permite a análise de espectrogramas de energia e tendências de padrão de fundo EEG durante o período de tempo experimental. Neste modelo de isquemia de hipóxia, o método permite o registro de EEG antes da lesão para obter uma linha de base normativa e durante a lesão e recuperação. O tempo total de monitoramento é limitado pela incapacidade de separar filhotes da mãe por mais de quatro horas. Embora tenhamos utilizado um modelo de convulsões hipoxica-isquêmicas neste manuscrito, este método para monitoramento de vídeo neonatais poderia ser aplicado a diversos modelos de doenças e convulsões em roedores.

Introdução

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A encefalopatia isquêmica hipóxica (HIE) é uma condição que afeta 1,5 em 1000 recém-nascidos anualmente e é a causa mais comum de convulsões neonatais1,2. Os bebês que sobrevivem correm risco para várias deficiências neurológicas, como paralisia cerebral, deficiência intelectual e epilepsia3,4,5.

Os modelos animais desempenham um papel fundamental na compreensão e investigação da fisiopatologia da isquemia de hipóxia e convulsões neonatais6,7

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Protocolo

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Todos os estudos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade da Virgínia.

1. Construção de eletrodo/cabo

  1. Use um fio de aço inoxidável isolado unipolar (0,005" de diâmetro nu, 0,008" revestido) para fazer um eletrodo conectado com um conector de soquete feminino (conector de recipiente feminino 0,079).
  2. Use um cabo feito sob medida para conectar os animais ao amplificador.
    1. Conecte um conector masculino de 4 pinos (conector masculino de 0,079") à unidade de 4 canais ganha impedância correspondente ao amplificador operacional (op-amp). Conecte um resistor ....

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Resultados

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Semiologia convulsiva

A exposição à hipóxia neonatal resulta em convulsões generalizadas e focais em camundongos (Figura 1A-C). Gravações de EEG de vídeo permitem que achados eletrográficos sejam correlacionados ao comportamento em vídeo. Esses comportamentos foram pontuados utilizando-se um escore de apreensão comportamental de roedores neonatais (BSS)16. Além da BSS, categorizamos eventos com base em se o comport.......

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Discussão

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Apresentamos um modelo para monitoramento contínuo de vídeo-EEG em camundongos neonatais durante convulsões hipoximic-isquêmicas. A análise de vídeo em conjunto com o EEG permite a caracterização da semiologia convulsiva. A análise do EEG permite a extração de espectrogramas de energia e análise de amplitude de fundo.

A colocação correta e cuidadosa de eletrodos é crucial neste protocolo, pois lesões durante a colocação de eletrodos ou colocação imprecisa podem afetar significativamente os res.......

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Agradecimentos

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Reconhecemos as seguintes fontes de financiamento: NIH NINDS – K08NS101122 (JB), R01NS040337 (JK), R01NS044370 (JK), University of Virginia School of Medicine (JB).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
SURGERY
Aplicador de Ponta EsferográficaMetrex Research8300-Faplicador i-bond
Cranioplast (Pó/Resina)ColteneH00383Perm Reline/Power
I-BondKulzer GmbH, Alemanha
LOOK Silk SutureEspecialidades Cirúrgicas CorporationSP115LOOK SP115 Seda Trançada Preta Sutura cirúrgica não absorvível
RS-5168 Pinça Botvin RobozInstrumento CirúrgicoRS5168Pinça para cirurgia/ligadura
RS-5138 Pinça GraefeRoboz Instrumento CirúrgicoRS5138Pinça para cirurgia/ligadura
Luz UV para I-BondBlast Lite By First MediaBL778Luz UV para I-bond
Vannas Microdissecting ScissorTesoura de instrumento cirúrgicoRS5618de Roboz para ligação
Vet Bond3M Vetbond1469SBVet Glue
HYPOXIA
HypoxidialStarr Life Science
Sensorde oxigênio Produtos médicosMiniOxI- analisador de oxigênio/sensor para plataforma de hipóxia
EEG RECORDING
Conector de receptáculo fêmea 0.079"Mill-Max Manufacturing Corp832-10-024-10-001000Encomendado da Digikey
Amplificador de GramaNatus Neurology IncorporatedProduto
de Grama LabChart ProADI InstrumentsSoftware para executar o sistema
Conector de Soquete Macho 0.079"Mill-Max Manufacturing Corp833-43-024-20-001000Encomendado da Digikey
Operational AmplifierTexas Instruments, Dallas, TX, USATLC2274CDTLC2274 Quad Low-Noise Rail-to Rail Operational
AmplifierTexas Instruments, Dallas, TX, USATLC2272ACDRTLC2274 Quad Low-Noise Rail-to Rail Amplificador Operacional
Fio de Aço InoxidávelA-M Systems7914000.005" Bare/0.008" Revestido 100 ft
Fio Ultra-FlexívelMcMaster-Carr9564T136 Fio de gaze de várias cores

Referências

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vasudevan, C., Levene, M. Epidemiology and aetiology of neonatal seizures. Seminars in Fetal & Neonatal Medicine. , (2013).
  2. Volpe, J., et al. Neonatal Seizures. Volpe's Neurology of the Newborn. , Elsevier. 275-321 (2018).
  3. Shankaran, S., et al.

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