Neste estudo, foi desenvolvido um sistema de alimentação para estágios ninfais e larvais de carrapato duro utilizando-se uma cápsula ligada ao rato de laboratório. A cápsula de alimentação é feita de materiais flexíveis e permanece firmemente presa ao mouse por pelo menos uma semana e permite um monitoramento confortável da alimentação do carrapato.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Um modelo baseado em cápsulas para infestação de estágios de carrapato duro imaturo em ratos de laboratório
Neste artigo
Resumo
Resumo
Carrapatos são parasitas obrigatórios de alimentação sanguínea em todos os estágios de desenvolvimento (exceto ovos) e são reconhecidos como vetores de vários patógenos. O uso de modelos de camundongos na pesquisa de carrapatos é fundamental para entender suas interações biologia e carrapato-hogeno-patógeno. Aqui demonstramos uma técnica não laboriosa para a alimentação de estágios imaturos de carrapatos duros em ratos de laboratório. O benefício do método é sua simplicidade, curta duração e a capacidade de monitorar ou coletar carrapatos em diferentes pontos de tempo de um experimento. Além disso, a técnica permite o apego de duas cápsulas individuais no mesmo rato, o que é benéfico para uma variedade de experimentos onde dois grupos diferentes de carrapatos são necessários para se alimentar do mesmo animal. A cápsula não irritante e flexível é feita a partir de materiais de fácil acesso e minimiza o desconforto dos animais experimentais. Além disso, a eutanásia não é necessária, os camundongos se recuperam completamente após o experimento e estão disponíveis para reutilização.
Introdução
Carrapatos são vetores importantes de vários patógenos e representam um sério risco para a saúde animal e humana1. A criação de um sistema de alimentação eficaz é crucial ao estudar sua biologia, interações carrapato-hospedeiro-patógeno ou estabelecer medidas eficazes de controle. Atualmente, diversos sistemas de alimentação artificial, que evitam o uso de animais vivos, estão disponíveis para carrapatos2,,3,4 e estes devem ser utilizados sempre que as condições experimentais permitirem. No entanto, em várias configurações experimentais esses sistemas ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Observe que este protocolo só pode ser aplicado quando todas as medidas de bem-estar e segurança forem atendidas em laboratório. Este protocolo recebeu permissão para usar camundongos para alimentação de carrapatos pelo Comitê de Ética para Experimentos AnimaisComEth Anses/ENVA/UPEC, Números de Permissão E 94 046 08. Para o ponto final, os animais foram expostos ao CO2 por 9 minutos em duas fases de 4 e 5 min cada.
1. Preparação da cápsula
- Coloque 2 mm de espessura eva-espuma e a espuma adesiva dupla pegajosa(Figura 1A).
- Usando um furo de couro de 20 mm de diâmetro, corte um círcu....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Propomos o método passo a passo detalhado para alimentar estágios imaturos de carrapato duro em cápsulas de espuma EVA aplicadas nas costas de um rato(Figura 2). Este protocolo não trabalhoso é adequado para vários tipos de experimentos quando é necessário um monitoramento e coleta precisa de carrapatos. As principais vantagens deste método são sua simplicidade, materiais econômicos de fácil acesso e curta duração. Além disso, conseguimos anexar duas cápsulas a um indivíduo de camundongos (<.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
O passo mais crítico no protocolo é a colagem firme da cápsula na pele do rato. Portanto, a cola de látex deve ser aplicada de forma homogênea em toda a superfície de espuma EVA da cápsula e deve ser aplicada pressão constante por 3 minutos, especialmente no lado esquerdo e direito da cápsula. Também recomendamos a colocação da cápsula o mais longe possível na parte traseira para evitar sua remoção pelo mouse usando suas patas traseiras. Em nossos experimentos, apenas a adesão da cola eva-espuma e látex à pele do rato fo.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Reconhecemos a assistência técnica do Instituto Nacional de Pesquisas Agrícolas Da França Alain Bernier (INRAE) e da Océane Le Bidel (ANSES). O estudo foi apoiado pelo DIM One Health - Région Île-de-France (Acrônimo do projeto: NeuroPaTick). Os ratos foram comprados pela ANSES. Dr. Jeffrey L. Blair é reconhecido por revisar a versão anterior do manuscrito.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Espuma EVA com 2 mm de espessura, (baixa densidade) | Cosplay Shop | EVA-45kg (950/450/2 mm) | Pode ser encomendado também via Amazon (ref. no. B07BLMJDXD) |
| Tubo Termoencolhível Manga de Envoltório de Fio Elétrico 31mm/1.22 polegadas | Amazon | B0848S3S6T | Diferentes diâmetros de Tubo Termoencolhível estão disponíveis via Amazon. |
| Ratos BALB/cByJ | Charles River | Código de estirpe 627 | |
| Ratos C57BL/6 | Charles River | Código de estirpe 664 | |
| Cola de látex não tóxica | Rasgar remender | Tecido & Adesivo de couro | Também disponível também via Amazon (ref. no. B001RQCTUU) |
| Ferramenta de perfuração Ferramenta de arte manual | Amazon | B07QPWNGBF | Saled by amazon como ferramentas de trabalho de couro 1-25mm Round Steel Leather Craft Cutter trabalhando para cinto |
| Belt Strap PVC Binding Covers Transparent | Amazon | B078BNLSNP | Qualquer folha de PVC transparente de ticknes entre 0,150 mm a 0,180 mm é adequada |
| Esponja de almofada autoadesiva Fita de espuma dupla revestida | Amazon | B07RHDZ35J | Saled by amazon como 2 rolos de fita de espuma dupla face, fita de montagem branca super forte adesivos |
| de vedação transparente de espuma (círculos de 20 mm de diâmetro) | Amazon | B01DAA6X66 |
Referências
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Biology of Ticks. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., et al.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
