Modelo de AVC fototrombótico enriquecido com fibrina e sensível ao tPA

Resumo

Os modelos tradicionais de AVC fototrombótico (STP) induzem principalmente agregados plaquetários densos de alta resistência ao tratamento lítico com ativador do plasminogênio tecidual (tPA). Aqui um modelo de PTS murino modificado é introduzido pela co-injeção de trombina e corante fotossensível para fotoativação. O modelo de PTS com trombina produz coágulos mistos plaquetas:fibrina e é altamente sensível à trombólise tPA.

Resumo

Um modelo ideal de AVC tromboembólico requer certas propriedades, incluindo procedimentos cirúrgicos relativamente simples com baixa mortalidade, tamanho e localização consistentes do infarto, precipitação de coágulos sanguíneos mistos plaquetas:fibrina semelhantes aos dos pacientes e sensibilidade adequada ao tratamento fibrinolítico. O modelo de AVC fototrombótico baseado em corante rosa bengala (RB) atende aos dois primeiros requisitos, mas é altamente refratário ao tratamento lítico mediado por tPA, presumivelmente devido à sua composição de coágulo rica em plaquetas, mas pobre em fibrina. Argumentamos que a combinação de corante RB (50 mg/kg) e uma dose subtrombótica de trombina (80 U/kg) para fotoativação visando o ramo proximal da artéria cerebral média (ACM) pode produzir coágulos enriquecidos com fibrina e sensíveis a tPA. De fato, o modelo de fototrombose combinada com trombina e RB (T+RB) desencadeou coágulos sanguíneos mistos plaquetas:fibrina, como demonstrado por imunomarcação e imunomanchas, e manteve tamanhos e locais de infarto consistentes, além de baixa mortalidade. Além disso, a injeção intravenosa de tPA (Alteplase, 10 mg/kg) dentro de 2 h após a fotoativação diminuiu significativamente o tamanho do infarto na fototrombose T+RB. Assim, o modelo de AVC fototrombótico com trombina pode ser um modelo experimental útil para testar novas terapias trombolíticas.

Introdução

A trombectomia endovascular e a trombólise mediada por tPA são as duas únicas terapias aprovadas pela Food and Drug Administration (FDA) dos EUA para acidente vascular cerebral isquêmico agudo, que acomete ~700.000 pacientes anualmente nos Estados Unidos¹. Como a aplicação da trombectomia é limitada à oclusão de grandes vasos (LVO), enquanto a trombólise tPA pode aliviar as oclusões de pequenos vasos, ambas são terapias valiosas do acidente vascular cerebral isquêmico agudo². Além disso, a combinação de ambas as terapias (por exemplo, início de trombólise tPA-dentro de 4,5 horas do início do AVC, seguido de trombectomia)....

Protocolo

Este protocolo é aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade da Virgínia e segue a Diretriz do National Institutes of Health para Cuidados e Uso de Animais de Laboratório. A Figura 1A descreve a sequência de procedimentos cirúrgicos desse protocolo.

1. Configuração da cirurgia

1. Colocar uma almofada de aquecimento com temperatura regulada a 37 °C no adaptador de pequenos animais pelo menos 15 minutos antes da cirurgia. Prepare um rolo de clipe nasal para adaptador que permita a rotação da cabeça do animal. Preparar os anestésicos Ketamina (60 mg/kg)/ Xilazina ....

Resultados

Primeiro, comparamos o conteúdo de fibrina em coágulos sanguíneos induzidos por fototrombose RB versus T+RB. Camundongos foram sacrificados por perfusão transcárdica de fixadores 2 h após a fotoativação, e cérebros foram removidos para coloração por imunofluorescência do ramo da ACM nos planos longitudinal e transversal. Na fototrombose RB, o ramo da ACM estava densamente preenchido com plaquetas CD41⁺ e pouca fibrina (Figura 2A,C). Em contraste, o ramo da ACM na .......

Discussão

O tradicional acidente vascular cerebral fototrombótico RB, introduzido em 1985, é um modelo atraente de isquemia cerebral focal para procedimentos cirúrgicos simples, baixa mortalidade e alta reprodutibilidade do infarto cerebral. ⁵ Nesse modelo, o corante fotodinâmico RB ativa rapidamente as plaquetas à excitação luminosa, levando a agregados densos que ocluem o vaso sanguíneo ^5,8,23. No entanto, a pequ.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
2,3,5-cloreto de trifeniltetrazólio (TTC)	Sigma	T8877	infarto
4-0 Sutura de monofilamento de nylon	LOOK	766B	suprimentos cirúrgicos
5-0 sutura de seda	Harvard Apparatus	624143	suprimentos cirúrgicos
feixe de laser de 543nm	Melles Griot	25-LGP-193-249	fototrombose
camundongos machos adultos	Charles River	C57BL/6	10~14 semanas de idade (22~30 g)
Barra de anestesia para oficina mecânica adaptadora de camundongos	configuração cirúrgica	UVA
Avertin (2, 2, 2-Tribromoetanol)	Sigma	T48402	eutanásia
Broca odontológica	Dentamerica	Rotex 782	configuração cirúrgica
Microscópio digital	Dino-Lite	AM2111	imagem cerebral
Dissecação microscópio	Olympus	SZ40	configuração cirúrgica
Fórceps curva fina (serrilhada)	FST	11370-31	instrumento cirúrgico
Fórceps curva fina (lisa)	FST	11373-12	instrumento cirúrgico
cabra anti-coelho Alexa Fluro 488	Invitrogen	A11008	Imuno-histoquímica
Halsted-Mosquito hemostáticos	FST	13008-12	instrumento cirúrgico
Bomba de calor com almofada de aquecimento	Gaymar	TP700	bomba de infusão de configuração cirúrgica
	KD Scientific	200	tratamento trombolítico
Seringa de insulina com agulha 31G	BD	328291	fototrombose
Cetamina	CCM, anestesia UVA
Protetor a laser google 532nm	Thorlabs	LG3	fototrombose
Cetoprofeno	CCM, UVA		AINE analgesia
micro agulha titulares	FST	12060-01	instrumento cirúrgico
micro tesoura	FST	15000-03	instrumento cirúrgico
MoorFLPI-2 gerador de imagens de fluxo sanguíneo	Moor	780-nm fonte de laser	Laser Speckle Contrast
Imaging Adaptador de mouse	RWD	68014	configuração cirúrgica
Pomada Puralube Vet	Fisher	NC0138063	prevenção de secura ocular
Dicas afastadoras	Kent Scientific	Surgi-5014-2	configuração cirúrgica
Rose Bengal	Sigma	198250	fototrombose
Trombina	Sigma	T7513	fototrombose
Cola tecidual	Abbott Laboratories	NC9855218	suprimentos cirúrgicos
tPA	Genetech	Cathflo activase 2mg	tratamento trombolítico
Vibratome	Stoelting	51425	TTC infacrt
Xylazine	CCM, anestesia UVA

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