Linfedema é inchaço na extremidade causado por disfunção linfática. Descrevemos um modelo crônico de cauda murina de linfedema e o novo uso da tecnologia de nanotransfescção de tecido (TNT) para entrega genética de carga na cauda.
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Artigo de método
Um modelo de linfedema de cauda murina
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Linfedema é inchaço na extremidade causado por disfunção linfática. O membro afetado aumenta devido ao acúmulo de fluido, adiposo e fibrose. Não há cura para esta doença. Um modelo de cauda de rato que usa uma excisão focal de pele de espessura total perto da base da cauda, resultando em inchaço na cauda, tem sido usado para estudar linfedema. No entanto, este modelo pode resultar em compor vascular e consequente necrose da cauda e resolução precoce do inchaço da cauda, limitando sua tradução clínica. O modelo de linfedema crônico da cauda murina induz linfedema sustentado ao longo de 15 semanas e uma perfusão confiável à cauda. Os aprimoramentos do modelo tradicional de linfedema da cauda murina incluem 1) excisão de espessura total precisa e recorte linfático usando um microscópio cirúrgico, 2) confirmação de perfusão arterial pós-operatória e venosa usando mancha laser de alta resolução, e 3) avaliação funcional usando lymphangiography laser indocyanine perto de infravermelho. Também usamos a tecnologia de nanotransfesão de tecido (TNT) para a nova entrega não viral, transcutânea e focal de carga genética para a vasculatura da cauda do rato.
Introdução
Linfedema é inchaço na extremidade causado por disfunção linfática. O membro afetado aumenta devido ao acúmulo de fluido, adiposo e fibrose1. Linfedema afeta 250 milhões de pessoas em todo o mundo2,3,4. Estima-se que 20-40% das pacientes que se submetem ao tratamento de malignidades sólidas, como câncer de mama, melanoma, tumores ginecológicos/urológicos, ou sarcomas, desenvolvem linfedema2,4,5. A morbidade do linfedema inclui infecções recorrentes, dor e defo....
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Protocolo
O protocolo segue as diretrizes do comitê de ética em pesquisa animal da instituição. Todos os experimentos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Escola de Medicina da Universidade de Indiana. Os animais foram alojados sob um ciclo claro-escuro de 12 horas com comida e água ad libitum.
1. Interrupção cirúrgica de linfáticos da cauda do rato
- Use camundongos C57BL/6 de oito semanas de idade de distribuição igualitária de gênero.
- Coloque um rato sob anestesia geral em uma câmara de indução com isoflurane de 3-4% em 100% de oxigênio seguido de sedação de manutenção em 1-3% duran....
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Resultados
A técnica para o modelo de cauda do rato para linfedema sustentado é mostrada na Figura 1. A figura exibe a anatomia relevante do modelo de cauda do rato. A Figura 2 demonstra o inchaço progressivo e o linfedema persistente sustentado na cauda do rato após a indução de linfedema. O volume da cauda do rato, calculado pela equação do cone truncado, atinge picos na semana 4 e planaltos para a semana 6 seguido de melhora gradual que .......
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Discussão
Linfedema é categorizado como lesão primária (congênita) ou secundária (linfática iatrogênica)38,39. O linfedema secundário compreende 99% dos casos39. Linfedema secundário é mais comumente causado por infecção (filariase) ou tratamento pós-oncológico com linfodenectomia ou radiação4,39. Um modelo animal translacional é desafiador para o linfedema secundário, pois 70% dos animais t.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse concorrentes.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo financiamento de subvenções fornecidos pela Associação Americana de Cirurgiões Plásticos Bolsista Acadêmico e pelo Departamento de Defesa W81XWH2110135 para AHH. A Fundação de Educação e Pesquisa em Cirurgia Estética concede ao MS. NIH U01DK19099, R01NS042617 e R01DK125835 à CKS.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tegaderm | 1626W | ||
| Microscópio Cirúrgico | Leica, Wetzlar, Alemanha | Curativo Aderente MSV266 | |
| (Tegaderm) | 3M, St. Paul, Minn. | Speckle de laser de 1626 W | |
| (Pericam PSI System | ) Perimed AB, Estocolmo, Suécia) | Laser | |
| (LUNA) | Stryker (anteriormente Novadaq Technologies, Toronto, Canadá) Camundongos | LU3000 | |
| C57BL / 6 | Jackson Laboratories | 000664 | |
| Micro-Adson Forceps - 1x2 Dentes | Fine Science Tools (USA) Inc. | 11019-12 | |
| V-Hook | Fine Science Tools (EUA) Inc. | 18052-12 | |
| Bisturi SS NO15 | Fischer Scientific | 29556 | |
| Agulha Descartável 30GX1 | Tesoura Fischer Scientific | 305128 | |
| Cirúrgica | Fischer Scientific | 12-460-796 | |
| Pinça Surgi-Or Joalheiro, Sklar 4-1/2 in | Fischer Scientific | 50-118-4255 | |
| - Reta/Afiada-Afiada/ 8mm Cutting Edge | Fine Science Tools (EUA) Inc. | 15024-10 | |
| Cardiogreen | Sigma | I2633-25MG | |
| IsosulfanBlue (Lymphazurin) 50 mg/5ml | Mylan | 67457-220-05 |
Referências
- Kataru, R. P., et al. Fibrosis and secondary lymphedema: chicken or egg. Translation Research. 209, 68-76 (2019).
- Brayton, K. M., et al. Lymphedema prevalence and treatment benefits in cancer: impact of a therapeutic inte....
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Reimpressões e permissões
