O ultrassom de alta resolução pode ajudar a agilizar experimentos que requerem camundongos com tempo cronometrado, determinando o estado da gravidez, idade gestacional e perdas de gravidez. Apresentado aqui é um protocolo para ilustrar métodos para avaliar a gravidez do rato, bem como potenciais armadilhas (artefatos de imagem) que podem imitar a gravidez.
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Artigo de método
Meu rato está grávida? Avaliação de ultrassom de alta frequência
Neste artigo
Resumo
Resumo
O camundongo é o modelo animal mamífero de escolha para muitas doenças humanas e processos biológicos. A biologia do desenvolvimento muitas vezes requer camundongos grávidas em estágio para determinar processos em evolução em vários momentos. Além disso, a melhor e eficiente criação de camundongos modelo requer uma avaliação das gestações cronometrárias. Mais comumente, os ratos são acasalados durante a noite, e a presença de um plugue vaginal é determinada; no entanto, o valor preditivo positivo dessa técnica é subótimo, e é preciso esperar para saber se o rato está realmente grávida. A biomicroscopia de ultrassom de alta resolução é uma ferramenta eficaz e eficiente para a imagem: 1) Se um rato está grávida; 2) Que estágio gestacional o mouse atingiu; e 3) Se há perdas intrauterinas. Além dos embriões e fetos, o pesquisador também deve reconhecer artefatos comuns na cavidade abdominal para não confundi-los com um útero gravido. Este artigo fornece um protocolo para imagens, juntamente com exemplos ilustrativos.
Introdução
O camundongo é o modelo mamífero preferido para muitas doenças humanas e processos biológicos1,2,3,4. Pesquisas em biologia do desenvolvimento muitas vezes exigem camundongos gestantes em estágio para determinar processos em evolução em vários momentos5,6,7,8. Além disso, a melhor e eficaz criação de camundongos modelo requer uma avaliação das gestações cronometrárias, particularmente quando os pesquisadores estão ....
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Protocolo
Todas as etapas deste protocolo seguem o Guia de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório publicado pelos Institutos Nacionais de Saúde e aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Escola de Medicina Grossman da Universidade de Nova York.
1. Acasalamento de camundongos para gestações cronometras
- Emparelhe o rato fêmea apropriado (geralmente um heterozigoto) em uma gaiola com o rato macho apropriado (geralmente um heterozigoto) para acasalamento durante a noite.
- Separe os ratos na manhã seguinte. Alternativamente, acasalam continuamente os camundongos femininos e machos, aumentando assim as chances ....
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Resultados
Este protocolo permitirá que um investigador determine com confiança se um camundongo está grávida, inclusive durante os estágios iniciais e determinar se há perdas embrionárias ou fetais óbvias sem precisar sacrificar a represa grávida. Este protocolo é especialmente útil ao criar camundongos geneticamente modificados; tipicamente, cruzes heterozigous x heterozigosas para produzir descendentes homozigos leva ao fracasso do desenvolvimento adequado, o que causa letalidade pré-natal. A Figura 1
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Discussão
O primeiro passo mais importante na imagem é identificar a vagina e, em seguida, determinar a bifurcação do chifre uterino para a esquerda e para a direita. Seguindo cada chifre uterino, o imager é menos propenso a identificar mal os laços do intestino como o útero. Além disso, compreender as variações no aparecimento do intestino (com/sem matéria fecal) é importante para distingui-las do útero; ocasionalmente, "bolas" fecais em laços intestinais podem imitar um útero gravid (grávida). Embora outros autores tenham descri.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| depilatório | |||
| Etanol, 70% | |||
| Tesoura de | |||
| Gaze ou KimWipes | |||
| Isoflurano | |||
| Oxigênio médico (opcional) | |||
| Fita | |||
| médicaSistema de imagem de mouse (incluindo configuração de anestesia e plataforma de imagem) | Fujifilm Visual Sonics | Vários | Qualquer sistema com sonda transdutor de ultrassom de frequência central de 40 MHz |
| Lâmina de barbear (não um aparelho de barbear) | |||
| Balança (para pesar o mouse) | |||
| Gel |
Referências
- Bogue, M. A., et al. Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice. Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).
- Ito, R., Takahashi, T., Ito, M.
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Reimpressões e permissões
