Medição máxima da Força Tetanica Isométrica do Músculo Tibialis Anterior no Rato

Resumo

A avaliação da recuperação motora continua sendo a medida de desfecho de referência em estudos experimentais de nervos periféricos. A medição da força tetanica isométrica do músculo tibialis anterior no rato é uma ferramenta inestimável para avaliar os resultados funcionais após a reconstrução de defeitos do nervo ciático. Os métodos e nuances estão detalhados neste artigo.

Resumo

Lesões nervosas traumáticas resultam em perda funcional substancial e defeitos nervosos segmentais muitas vezes exigem o uso de enxertos nervosos de interposição autólogos. Devido à sua disponibilidade limitada e morbidade lateral associada, muitos estudos no campo da regeneração nervosa focam em técnicas alternativas para preencher uma lacuna nervosa segmental. A fim de investigar os resultados das opções de tratamento experimental cirúrgico ou farmacológico, o modelo de nervo ciático de ratos é frequentemente usado como um bioensaio. Há uma variedade de medidas de desfecho usadas em modelos de ratos para determinar a extensão da regeneração nervosa. A força máxima de saída do músculo alvo continua sendo o resultado mais relevante para a tradução clínica de terapias experimentais. A medição da força isométrica da contração muscular tetanica foi descrita anteriormente como uma técnica reprodutível e válida para avaliar a recuperação motora após lesão nervosa ou reparo em modelos de ratos e coelhos. Neste vídeo, forneceremos uma instrução passo-a-passo deste procedimento inestimável para avaliação da recuperação funcional do músculo tibialis anterior em um modelo de defeito no nervo ciático de rato usando parâmetros otimizados. Descreveremos as preparações pré-cirúrgicas necessárias, além da abordagem cirúrgica e dissecção do nervo peronal comum e do tendão muscular anterior tíibal. A técnica de medição da força tetanica isométrica será detalhada. A determinação do comprimento muscular ideal e da frequência de pulso de estímulo é explicada e a medição da contração muscular tetanica máxima é demonstrada.

Introdução

A perda da função motora após lesão nervosa periférica traumática tem impacto significativo na qualidade de vida e no status socioeconômico dos pacientes^1,2,3. O prognóstico dessa população de pacientes permanece ruim devido a melhorias mínimas nas técnicas cirúrgicas ao longo dos anos⁴. O reparo peridural direto sem tensão forma a reconstrução cirúrgica padrão-ouro. No entanto, nos casos com lacunas nervosas prolongadas, a interposição de um enxerto nervoso autólogo provou ser superior a^5,6. A....

Protocolo

Todos os procedimentos animais foram realizados com aprovação do Comitê Institucional de Atenção e Uso de Animais (IACUC A334818).

1. Calibração do transdutor de força

1. Certifique-se de que o computador está devidamente conectado ao dispositivo de aquisição de dados de I/O multifuncional USB-6009 (DAQ), que por sua vez deve ser conectado ao transdutor de força.
   NOTA: Outras cepas de ratos e espécies podem exigir um transdutor de força de célula de carga diferente, pois forças mais altas devem ser esperadas ⁴⁴.
2. Conecte um grampo personalizado feito a partir de um hemostato cirúrgico modificado ao....

Resultados

Cinco parâmetros são usados para medir a medição itf. Estes incluem tensão muscular (força de pré-carga), intensidade de estímulo (tensão), frequência de pulso de estímulo, duração de estímulo de 0,4 ms e um atraso de 2 ms. Antes de medir o ITF, a tensão muscular ideal deve ser determinada usando duas contrações musculares de contração única a uma intensidade de 2 V durante o teste do parâmetro. Esses estímulos causam dorsiflexão da pata e produzem um sinal de saída no gráfico no VI (Figura 5

Discussão

Este protocolo descreve um método previamente validado para a aquisição de medições máximas de ITF precisas do músculo TA no modelo de rato³². A recuperação da força máxima após tratamentos experimentais de reconstrução nervosa é de interesse primário no cenário clínico, pois prova que o nervo não só se regenerou, mas também fez conexões de trabalho com o músculo alvo. O ITF pode ser usado em um pequeno modelo de lacuna nervosa, como o modelo de nervo ciático de rato³², e c.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cloreto de sódio a 0,9%	Baxter Healthcare Corporation, Deerfield, IL, EUA	G130203
1 mm	Pfizer Howmedica, Rutherford, NJ	N / A
Adson Tissue Forceps	ASSI, Westbury, NY, USA	MTK-6801226
Cabos de eletrodo bipolar	Grass Instrument, Quincy, MA	N / A
Dispositivo	estimulador bipolarGrass SD9, Grass Instrument, Quincy, MA	N/A
Aplicadores de ponta de algodão	Cardinal Health, Waukegan, IL, USA	C15055-006
Pinça de mosquito curva	ASSI, Westbury, NY, USA	MTK-1201112
Transdutor de força MDB-2.5	Transdutor Técnicas, Temecula, CA	N/A
Esponjas de gaze 4x4	Covidien, Mansfield, MA, USA	2733
Cabo de aterramento	Grass Instrument, Quincy, MA	N/A
Câmara de isoflurano	N/A	N/A	Cetamina Ketalar feito sob medida
	, Par Pharmaceutical, Chestnut, NJ	42023-115-10
LabView Software	National Instruments, Austin, TX
Loop	N/A	N/A	Feito sob medida
Pinça microcirúrgica curva	ASSI, Westbury, NY, EUA	JFA-5B
Tesoura microcirúrgica	ASSI, Westbury, NY, EUA	SAS-15R-8-18
Pinça microcirúrgica reta	ASSI, Westbury, NY, EUA	JF-3
Afastador	ASSI, Westbury, NY, EUA	AG-124426
Lâmina de bisturi nº 15	Bard-Parker, Aspen Surgical, Caledonia, MI, EUA
Grampeador de Pele de Corpo Fino	Covidien, Mansfield, MA, EUA	8886803512
Eletrodo subminiatura	Aparelho Harvard, Holliston, MA	N/A
Estimulador de Nervo Cirúrgico	Checkpoint Surgical LCC, Cleveland, OH, EUA	9094
Terrell Isoflurane	Piramal Critical Care Inc., Bethlehem, PA, USA	H961J19A
Plataforma de teste	N/A	N/A	Tesoura de
tetontomia	ASSI, Westbury, NY, EUA	ASIM-187
Temporizador/cronômetro rastreável de dígitos grandes	Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA	S407992
Dispositivo de aquisição de dados de E/S multifuncional (DAQ) USB-6009	National Instruments, Austin, TX	779026-01
Suporte	de base de vácuoNoga Engenharia & Technology Ltd., Shlomi, Isreal	N/A	A braçadeira anexada é feita sob medida
Peso (10 g)	Denver Instruments, Denver, CO, EUA	820010.4
Peso (20 g)	Denver Instruments, Denver, CO, EUA	820020.4
Peso (50 g)	Denver Instruments, Denver, CO, EUA	820050.4
Xilazina	Xylamed, Bimeda MTC Animal Health, Cambridge, Canadá	1XYL002

fios de Kirshner de 371115 feita sob medida