Method Article

Microdisseção do Cérebro de Camundongos em Regiões Funcional e Anatomicamente Diferentes

DOI:

10.3791/61941

⸱

February 15th, 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Geneva Foundation, Medical Readiness Systems Biology, Walter Reed Army Institute of Research, 2Walter Reed Army Institute of Research, Medical Readiness Systems Biology, Center for Military Psychiatry and Neuroscience, 3ORISE Fellow, Medical Readiness Systems Biology, Walter Reed Army Institute of Research, 4Headquarter, Walter Reed Army Institute of Research

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Apresentamos um protocolo prático, passo a passo, rápido para remoção do cérebro do rato e dissecção de regiões discretas de tecido cerebral fresco. A obtenção de regiões cerebrais para análise molecular tornou-se rotina em muitos laboratórios de neurociência. Essas regiões cerebrais são imediatamente congeladas para obter dados transcriômicos de alta qualidade para análise de nível de sistema.

Abstract

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O cérebro é o centro de comando do sistema nervoso mamífero e um órgão com enorme complexidade estrutural. Protegido dentro do crânio, o cérebro consiste em uma cobertura externa de matéria cinzenta sobre os hemisférios conhecidos como córtex cerebral. Abaixo dessa camada residem muitas outras estruturas especializadas que são essenciais para múltiplos fenômenos importantes para a existência. A aquisição de amostras de regiões cerebrais brutas específicas requer passos de dissecção rápidos e precisos. Entende-se que, no nível microscópico, existem muitas sub-regiões e provavelmente cruzam as fronteiras regionais arbitrárias que impomos para efeitos desta dissecção.

Modelos de camundongos são usados rotineiramente para estudar funções e doenças cerebrais humanas. Alterações nos padrões de expressão genética podem estar confinadas a áreas cerebrais específicas visando um fenótipo específico, dependendo do estado doente. Assim, é de grande importância estudar a regulação da transcrição no que diz respeito à sua organização estrutural bem definida. Uma compreensão completa do cérebro requer estudar regiões cerebrais distintas, definir conexões e identificar diferenças fundamentais nas atividades de cada uma dessas regiões cerebrais. Uma compreensão mais abrangente de cada uma dessas regiões distintas pode abrir caminho para novos e aprimorados tratamentos no campo da neurociência. Aqui, discutimos uma metodologia passo a passo para dissecar o cérebro do rato em dezesseis regiões distintas. Neste procedimento, focamos na remoção e dissecção cerebral do camundongo C57Bl/6J (6-8 semanas) em múltiplas regiões usando marcos neuroanatomáticos para identificar e amostrar regiões cerebrais discretas e relevantes do funcionamento e comportamentalmente relevantes. Este trabalho ajudará a estabelecer uma base forte no campo da neurociência, levando a abordagens mais focadas na compreensão mais profunda da função cerebral.

Introduction

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O cérebro, juntamente com a medula espinhal e a retina, compreendem o sistema nervoso central que executa comportamentos complexos, controlados por tipos de células especializadas, precisamente posicionadas e interagindo em todo o corpo1. O cérebro é um órgão complexo com bilhões de neurônios interconectados e glia com circuitos precisos realizando inúmeras funções. É uma estrutura bilateral com dois lobos distintos e diversos componentes celulares2. A medula espinhal conecta o cérebro ao mundo exterior e é protegida por ossos, meninges e fluido cefalorraquidiano e encaminha mensagens de e para o cérebro

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Protocol

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O manejo animal e os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com as diretrizes europeias, nacionais e institucionais para o cuidado animal. Todos os experimentos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) no Centro de Pesquisa em Saúde Ambiental do Exército dos EUA, agora Walter Reed Army Institute of Research (WRAIR) e realizados em uma instalação credenciada pela Associação para a Avaliação e Acreditação do Laboratório Animal Care International (AAALAC).
NOTA: O procedimento será realizado em camundongos machos de seis a oito semanas de idade da cepa C57BL/6j eutanizada por deslocamento cervical

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Results

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Nossa compreensão da complexa estrutura e função cerebral está evoluindo rapidamente e melhorando. O cérebro contém várias regiões distintas e construir um mapa molecular pode nos ajudar a entender melhor como o cérebro funciona. Neste artigo de método, discutimos a dissecação do cérebro do camundongo em múltiplas regiões distintas (Tabela 1). Neste protocolo, as estruturas são identificadas com base nos marcos críticos e são alcançadas mantendo o tecido úmido com solução salina, mantendo sua robustez pa.......

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Discussion

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O cérebro mamífero é um órgão complexo composto por uma matriz de células morfologicamente distintas e funcionalmente únicas com diversas assinaturas moleculares e múltiplas regiões que realizam funções especializadas e discretas. O procedimento de dissecção aqui relatado pode ter múltiplas metas dependendo dos requisitos do laboratório. Em nosso laboratório avaliamos a transcrição em várias regiões cerebrais coletadas de camundongos expostos ao TEPT como o estresse16 . Gostaríamos de estudar mais.......

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Disclosures

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Os autores não têm nada a revelar.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Agradecemos à Sra. Seshmalini Srinivasan, ao Sr. Stephen Butler e à Sra. Pamela Spellman por assistência experimental e à Sra. Dana Youssef por editar o manuscrito. O apoio ao financiamento da USAMRDC é reconhecido com gratidão. A Fundação Genebra contribuiu para este trabalho e foi apoiada por fundos da Área de Pesquisa de Medicina Militar e Operacional III através do Escritório de Pesquisa do Exército dos EUA.

Disclaimer:

O material foi revisado pelo Instituto de Pesquisa do Exército Walter Reed. Não há objeção à sua apresentação e/ou publicação. As opiniões ou afirmações aqui contidas são as o....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Remoção de cérebro
Tesoura DeaverRoboz Surgical StoreRS-67625.5" reta afiada/afiada
Tesoura DeaverRoboz Surgical StoreRS-67635.5" curva afiada/afiada
Tesoura de operação delicadaRoboz Surgical StoreRS-67034.75" curva afiada/afiada
Tesoura de operação delicadaRoboz Surgical StoreRS-67024.75" reta afiada/afiada
Tesoura de operação leveRoboz Surgical StoreRS-67535" curvado Sharp/Sharp
Micro espátula, raio e extremidadesacabamento espelhado em aço inoxidável
Tesoura de operação 6.5"Roboz Surgical StoreRS-6846curvado afiado/afiado
Pinça de tecidoRoboz Surgical StoreRS-81604.5" 1X2 dentes 2mm largura da ponta
Rongeur (opcional)Roboz Surgical StoreRS-8321 muitos estilos para escolherLempert Rongeur 6.5" 2X8mm
Dissecção da hipófise
Cabo de bisturiRoboz Surgical StoreRS-9843Cabo de bisturi #3 Solid 4"
e lâminasRoboz Surgical StoreRS-9801-11Lâminas de bisturi estéreis: # 11 Caixa 100 40mm
Pinças super finas InoxRoboz Surgical StoreRS-4955tamanho da ponta 0,025 X 0,005 mm
Dissecção cerebral< / forte>
A viseira de ampliaçãoPenn Tool Col40-178-62,2x Ampliação da lente externa e 3,3x interna, Placa fria de dissecção de lupa retangular
Cellpath.comJRI-0100-00AIceberg placa fria e base
Graefe fórceps, curva completa extra delicadaRoboz Surgical StoreRS-51380,5 mm Ponta 4" (10 cm) de comprimento
Tesoura de operação leveRoboz Surgical StoreRS-67535 "curvo afiado / afiado
Cabo de bisturiRoboz Surgical StoreRS-9843 (repetido acima)Cabo de bisturi # 3 sólido 4 "
e lâminas (especialmente # 11)Roboz Surgical StoreRS-9801-11 (repetido acima)Lâminas de bisturi estéreis: # 11 Caixa 100 40mm
EspátulaAmazonMS-SQRD9-4Espátula de Extremidade Dupla Quadrada E Redonda
Pinça de TecidoRoboz Surgical StoreRS-8160 (repetido acima)4,5 "1X2 dentes
planas cônicas

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zeisel, A., et al. Molecular Architecture of the Mouse Nervous System. Cell. 174 (4), 999-1014 (2018).
  2. Ackerman, S. Major Structures and Functions of the Brain. 2, National Academies Press. US. (1992).
  3. P, T. L. S.

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Mouse Brain DissectionBrain Region IsolationNeuroanatomical LandmarksCerebral Cortex RemovalCerebellum DissectionHypothalamus SeparationThalamus IsolationAmygdala ExtractionHippocampus DissectionSeptal Nuclei Identification

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