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Síntese de pyrazole dependente de pH, Imidazol e Isoindolone Dipyrrinone Fluorophores usando uma Abordagem de Condensação Claisen-Schmidt

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DOI:

10.3791/61944

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10 de junho de 2021

 ,  , 
1Department of Physical and Life Sciences, Nevada State College, 2Department of Humanities, Nevada State College

Neste artigo

Resumo

A reação de condensação de Claisen-Schmidt é uma metodologia importante para a geração de compostos aromáticos bicíclicos conjugados com ponte de methine. Através da utilização de uma variante mediada pela base da reação aldol, uma gama de moléculas fluorescentes e/ou biologicamente relevantes pode ser acessada através de uma abordagem sintética geralmente barata e operacionalmente simples.

Resumo

Compostos aromáticos bicíclicos conjugados com ponte de methine são constituintes comuns de uma gama de moléculas biologicamente relevantes, como porfirinas, dipírrinones e fármacos. Além disso, A rotação restrita desses sistemas muitas vezes resulta em sistemas altamente a moderadamente fluorescentes, como observado em 3H,5H-dipyrrolo[1,2-c:2',1'-f]pirimidin-3-ones, xanthoglows, análogos pirroloindolizinedionos, analógicos BODIPY, e os sistemas de anel fenólico e imidazolinone da Proteína Fluorescente Verde (GFP). Este manuscrito descreve um método barato e operacionalmente simples de realizar uma condensação claisen-Schmidt para gerar uma série de piraole/imidazol/imidazol/isoindolone dipyrrinone fluorescente. Embora a metodologia ilustre a síntese de análogos dipyrrinone, ela pode ser traduzida para produzir uma ampla gama de compostos aromáticos bicitílicos conjugados. A reação de condensação de Claisen-Schmidt utilizada neste método é limitada no escopo de nucleófilos e eletrofilos que são enolizáveis em condições básicas (componente nucleófilo) e aldeídos não enolizáveis (componente eletrophile). Além disso, tanto os reagentes nucleofílicos quanto eletrofílicos devem conter grupos funcionais que não reagirão inadvertidamente com hidróxido. Apesar dessas limitações, essa metodologia oferece acesso a sistemas completamente novos que podem ser empregados como sondas biológicas ou moleculares.

Introdução

Uma série de sistemas bicíclicos conjugados, nos quais dois anéis aromáticos são ligados por uma ponte monomethine, passam por isomerização via rotação de vínculos, quando animados com um fóton (Figura 1A)1,2,3,4,5. O isômero animado geralmente relaxará para o estado terrestre através de processos de decomposição não radiativa6. Se a barreira energética para a rotação de títulos for aumentada em grande medida, é possível restringir ou impedir a fotoisomerização. Em vez disso, a excitação fotônica resulta em um estado singlet animado que muitas vezes relaxa via fluorescência em vez de decadência não radiativa(Figura 1B). A fotoisomerização de contenção é mais comumente realizada restringindo mecanicamente a rotação de ligações através da amarração dos dois sistemas de anéis aromáticos por ligações covalentes, bloqueando assim a molécula em um estado isomerico particular. Esta abordagem tem sido utilizada para criar vários diferentes linálogos tricíclicos tricíclicos e dipyrrolemetanos como: 3H,5H-dipyrrolo[1,2-c:2',1'-f]pyrimidin-3-ones(1), xan Os análogos(2)6,7,análogos pirroloindolizinedione(3)8, e os análogos BODIPY9 (4, Figura 2) pelos quais os sistemas de anel pirrolidina e/ou pirrole estão amarrados com metileno, carbonil, ou linkers de boro difluoro. Normalmente, 1-4 possuem ΦF > 0,7 sugerindo que esses sistemas são muito eficientes como unidades fluoródricas.

Também é possível restringir a fotoisomerização através de meios que não a ligação covalente dos sistemas de anéis. Por exemplo, os anéis fenólicos e imidazolinona(Figura 2)da Proteína Fluorescente Verde (GFP) estão restritos à rotação pelo ambiente proteico; a configuração restritiva aumenta o rendimento quântico em três ordens de magnitude em comparação com a mesma unidade cromófora na solução livre10. Acredita-se que o andaime proteico de GFP fornece uma barreira rotacional através dos efeitos estericos e eletrostáticos11. Recentemente, nosso grupo em colaboração com o grupo Odoh na Universidade de Nevada, Reno descobriu outro sistema fluoróforo que tem semelhança estrutural com os sistemas xanthoglow baseados em dipyrrinone(Figura 2)12. Estes análogos de dipyrrinone, no entanto, diferem do sistema xanthoglow naquela ligação de hidrogênio intramolecular, em vez de ligações covalentes, deter a fotoisomerização e resultar em um sistema motocíclico fluorescente. Além disso, os análogos pirázio, imidazol e dipyrrinone isoindolone podem se ligar hidrogênio em estados protoados e desprotosados; a desprotonação resulta na mudança vermelha tanto dos comprimentos de onda de excitação quanto das emissões, provavelmente devido a uma mudança na natureza eletrônica do sistema. Embora a ligação de hidrogênio tenha sido relatada para aumentar os rendimentos quânticos embora a rotação restrita13,14,15,16, não estamos cientes de qualquer outro sistema fluoroforeiro no qual a isomerização restrita serve como um modo de fluorescência em ambos os estados protonsados e desprotosados da molécula. Portanto, esses fluoroforos de dipyrrinone dependentes de pH são únicos a esse respeito.

Neste vídeo, focamos na síntese e caracterização química da série analógica fluorescente dipyrrinone. Em particular, há uma ênfase na metodologia de condensação Claisen-Schmidt que foi usada para construir a série completa de análogos fluorescentes. Essa reação se baseia na geração de um íon enolate de enolate mediado pela base que ataca um grupo de aldeído, para produzir um álcool que posteriormente passa por eliminação. Para a série analógica dipirorinona, uma pirrolinona/isoindolone é convertida em um enolato para facilitar um ataque a um grupo de aldeído ligado a um anel pirazol ou imidazol(Figura 3); após a eliminação, forma-se um sistema bicíclico totalmente conjugado, ligado por uma ponte methine. Vale ressaltar que toda a série de análogos dipyrrinone pode ser construída a partir de materiais comerciais prontamente disponíveis e pode ser produzida em uma única sequência de reação de um pote tipicamente em rendimentos moderados a altos (os rendimentos variam de aproximadamente 50-95%). Uma vez que a maioria dos análogos de dipirorinono são de natureza altamente cristalina, muito pouca purificação fora das condições padrão de trabalho é necessária para produzir amostras analiticamente puras. Consequentemente, este sistema fluorforeiro requer apenas alguns passos para acessar a partir de materiais comerciais prontamente disponíveis e pode ser sintetizado, purificado e preparado para estudos analíticos ou biológicos em um período de tempo relativamente curto.

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Protocolo

1. Procedimento Geral para Síntese de Analogias Dipyrrinone 16-25

  1. Dissolver pirrolinona/isoindolone (1,00 mmol) e o aldeído pirarole/imidazol correspondente (1,00 mmol) em 5,0 mL de etanol em um frasco de fundo redondo.
  2. Adicione KOH aquoso (24,0 mmol, 10 M, 2,40 mL) ao frasco em uma porção.
  3. Mexa e refluxee a mistura até que a conclusão da reação seja confirmada pelo TLC (Veja a Tabela 1 para uma lista de tempos de reação). Utilizou-se um eluente TLC de 10% de metanol em diclorometano e os análogos possuem valores Rf na faixa de 0,62 a 0,86. Aplique uma quantidade suficiente de graxa de vácuo ou use uma manga PTFE na interfase das articulações de vidro para evitar que o vidro do condensador e o frasco de fundo redondo se adouquem sob altas temperaturas e condições básicas.
  4. Deixe a mistura de reação esfriar à temperatura ambiente e evaporar voláteis sob pressão reduzida usando um evaporador rotativo.
  5. Esfrie a mistura de reação a 0 °C usando um banho de gelo.
  6. Neutralize a mistura oleosa restante adicionando ácido acético (30,0 mmol, 1,70 mL) em uma porção.
  7. Purifique o material resultante do produto utilizando filtragem a vácuo (ver Etapa 2a, para compostos: 17, 18, 20-22, 24 e 25) ou use extração líquido/cromatografia de coluna (ver Passo 2b, para compostos: 16, 19e 23).

2. Purificação do procedimento

  1. via Filtragem de vácuo
    1. Coloque um funil Hirsch em um frasco de braço lateral usando um adaptador de borracha instalado.
    2. Aplique um pedaço de papel filtro redondo no funil Hirsch e levemente molhado usando água deionizada para permitir a adesão ao funil.
    3. Conecte uma fonte de vácuo ao braço lateral do frasco e certifique-se de que há uma vedação de vácuo suficiente, certificando-se de que nenhum dos vidros pode ser separado enquanto estiver sob vácuo.
    4. Despeje o frasco contendo o produto cristalizado sobre o filtro de vácuo e deixe filtrar. Enxágüe os cristais com 10 mL de água deionizada gelada.
    5. Deixe que os cristais filtrados continuem a secar em cima do papel filtro, enquanto ainda estão conectados à fonte de vácuo, após a filtragem de todos os líquidos.
    6. Colete os cristais filtrados e coloque em um frasco de fundo redondo de 25 mL.
    7. Conecte o frasco de fundo redondo a um adaptador de vidro moído fritado/adaptador de linha de vácuo. Segure a união conjunta de vidro com um clipe keck.
    8. Para a extremidade costelada do adaptador de linha de vácuo alto de vidro, conecte uma linha de vácuo que é roteada para uma bomba de vácuo alta e esfrie adequadamente uma armadilha de vácuo (usando refrigerante como nitrogênio líquido ou gelo seco/acetona) para condensar quaisquer materiais voláteis que possam evaporar do material cristalino. Ligue a bomba de vácuo alta para garantir a evaporação completa de quaisquer vestígios de solvente restante dos cristais.
    9. Deixe os cristais secarem sob alto vácuo por um mínimo de 1h. Remova o frasco de fundo redondo da linha/adaptador de vácuo, desligue a bomba de vácuo alta e limpe a armadilha de vácuo.
  2. Purificação do procedimento via Cromatografia de Coluna
    1. Diluir o conteúdo da mistura de reação tratada por ácido acético (a partir da etapa 1.6) com 10 mL de água desionizada e transferir para um funil separador. Adicione 10 mL de diclorometano ao funil separador. Agite suavemente e desfoque o funil separador para separar as duas camadas.
    2. Extrair a camada aquosa utilizando porções subsequentes de diclorometano (3 x 5 mL). Combine as frações orgânicas e seque usando anidro Na2SO4. Decantar e remover todos os voláteis sob pressão reduzida usando um evaporador rotativo.
    3. Diluir o resíduo obtido a partir da etapa 2.2.2. com 5 mL de CH2Cl2. Realize cromatografia de coluna flash usando aproximadamente 75 g de gel de sílica. Elute a amostra com uma solução de 10% de metanol em diclorometano.
    4. Remova as frações coletadas de solvente sob pressão reduzida usando um evaporador rotativo. Transfira o resíduo sólido para um frasco de fundo redondo de 25 mL usando aproximadamente 10 mL de CH2Cl2. Remova o solvente sob pressão reduzida usando um evaporador rotativo.
    5. Seque o resíduo sólido restante sob alto vácuo, como descrito anteriormente nas etapas 2.1.7 - 2.1.9.

3. Aquisição de Absortividade Molar e UV/Vis pKa Studies for Analogs 16-25

  1. Crie soluções de estoque composto para espectrofotometria UV/Vis para análogos 16 - 25.
    1. Pesar 10 μmol do análogo dipyrrinone selecionado(16 - 25) e adicioná-lo a um frasco volumétrica de 10 mL.
    2. Adicione DMSO à marca de 10,0 mL no frasco volumoso.
      NOTA: Se o composto não se dissolver completamente, aqueça o frasco usando uma arma de calor e agitar o frasco conforme necessário para dissolver completamente o composto.
  2. Faça soluções salina tamponadas de fosfato (PBS) em vários níveis de pH. Os análogos foram caracterizados em buffers PBS variando em pH de aproximadamente 4 a 15.
    1. Utilizando um cilindro volumoso de 1 L, crie 1 L de solução de estoque PBS diluindo 100 mL de PBS (x100) em 900 mL de água desionizada.
    2. Transfira 50 mL da solução de estoque PBS preparada (passo 3.2.1) para um béquer de 100 mL e adicione uma barra de agitação magnética. Em seguida, usando um medidor de pH calibrado para monitorar as alterações no pH, titula o buffer PBS com um Aquos 1.0 M NaOH (para obter buffers com pH > 7,0) ou 1,0 M HCl (para obter buffers com pH < 7,0).
      NOTA: Para obter dados que resultem em uma curva de titulação bem definida, recomendamos a geração de buffers de pH em incrementos de 0,1 pH unidades dentro de ± 0,5 do ponto de inflexão antecipado e incrementos de 0,5 fora do ponto de inflexão previsto.
  3. Adquira espectros de absortividade molar para soluções analógicas 16 - 25 em PBS (pH 7.0) e 1.0 M NaOH (pH 14.0).
    1. Prepare um "branco" usando um cuvette de quartzo limpo e seco e adicione 2,0 mL de solução de estoque PBS (pH 7.0) ou aquoso 1.0 M NaOH ao cuvette usando uma micropipette de 100 - 1000 μL.
      NOTA: É importante para a integridade do processo de aquisição de dados de solução em branco para garantir que não haja bolhas de ar na solução cuvette e limpar completamente os lados do cuvette com uma limpeza Kim para evitar dispersão de luz resultante de poeira ou detritos na parte externa da cuvette. Se as bolhas persistirem, bata suavemente e repetidamente a cuvette em uma toalha de papel colocada sobre uma superfície dura.
    2. Usando um espectrofotômetro UV/Vis, em branco a solução selecionada para uma faixa de 200 a 800 nm.
    3. Em um segundo cuvette de quartzo limpo e seco adicione 2,00 mL de PBS (pH 7.0) ou 1,0 M NaOH (pH 14) seguido por 10 μL da solução de estoque dipirona(16 - 25) solução de estoque (ver passo 3.1) com um micropiette de 5-50 μL. Coloque uma tampa na cuvette e agite bem, além de inverter a cuvette.
      NOTA: É importante para a integridade do processo de aquisição de dados de solução de amostra para garantir que não haja bolhas de ar na solução cuvette e limpar completamente os lados do cuvette com uma limpeza Kim para evitar dispersão de luz resultante de poeira ou detritos na parte externa da cuvette. Se as bolhas persistirem, bata suavemente e repetidamente a cuvette em uma toalha de papel colocada sobre uma superfície dura.
    4. Utilizando o espectrofotômetro UV/Vis, adquira um espectro de absorção para a solução analógica dipyrrinone para uma faixa de 200 - 800 nm.
    5. Ao mesmo cuvette, adicione mais 10 μL da solução de estoque analógico dipyrrinone e repita as etapas 3.3.3 e 3.3.4.
    6. Repetir o passo 3.3.5 até um total de 50 μL de solução de ações analógicas de dipyrrinone foi adicionado ao cuvette, a fim de adquirir pelo menos cinco pontos de dados de comprimento de onda de excitação. Repetição passos 3.3.1 - 3.3.6 até que todas as soluções de estoque de 16 - 25 foram obtidas tanto em PBS (pH 7.0) quanto em 1.0 M NaOH.
  4. Obtenha valores de absortividade molar para 16 - 25 em PBS (pH 7.0) e 1,0 M NaOH utilizando a melhor análise de regressão linear.
    1. Usando um programa de grafagem como o GraphPad Prism 7, plote a absorvância medida (eixo y) contra a concentração analógica dipirana (x-eixo). Crie uma análise de regressão linear mais adequada para os cinco pontos plotados. Deve-se observar uma relação linear e a análise estatística deve mostrar um valor de R2 ≥ 0,98.
    2. Repita o passo 3.4.1 para os analógicos 16 - 25 em PBS (pH 7.0) e 1.0 M NaOH.
    3. Calcule a absortividade molar para 16 - 25 em PBS (pH 7.0) e 1.0 M NaOH usando o valor de inclinação extrapolado da curva linear mais adequada.
  5. Determine o pKa valores de 16 - 25 estudos usando espectrofotometria UV/Vis
    1. Em uma cuvette de quartzo limpo e seco, transfira 1.900 μL do buffer PBS no nível de pH selecionado (preparado na Etapa 3.2) usando uma micropipette de 100 - 1000 μL.
      NOTA: Notamos no armazenamento que um precipitado branco pode se formar em alguns dos buffers. Para garantir que o buffer seja completamente homogêneo e se algum precipitado for visível, use filtragem de gravidade para remover qualquer precipitado imediatamente antes de ser usado. Veja a nota após o passo 3.3.1.
    2. Usando o espectrofotômetro UV/Vis, em branco a solução de buffer PBS selecionada para uma faixa de 200 a 800 nm.
    3. Em uma segunda cuvette de quartzo limpo e seco, transfira 1.900 μL do buffer PBS selecionado e adicione 100 μL da solução de estoque analógico selecionada usando uma micropipette de 5-50 μL. Coloque uma tampa na cuvette e agite bem, além de inverter a cuvette.
      NOTA: Veja a nota anterior após a etapa 3.3.3.
    4. Utilizando o espectrofotômetro UV/Vis, adquira o espectro de absorção para o analógico dipyrrinone para uma faixa de 200 a 800 nm.
    5. Repetição de passos 3.5.1 - 3.5.4 para 16 - 25 em cada um dos buffers PBS gerados na etapa 3.2.
  6. Determine os valores pKpara 16 - 25 usando uma função de montagem de curva sigmoidal de melhor ajuste.
    1. Usando um programa de grafagem, gráfico a absorvância medida vs. comprimento de onda (nm) para 16 - 25 nos vários níveis de pH.
    2. Escolha um comprimento de onda entre 380-415 nm onde em níveis mais baixos de pH (< 7,0) a absorção é pequena (0-0,1 unidades) e em pH maior (> 12,0) a absorção é consideravelmente maior (0,8-1,0 unidades). Plote a absorvência no comprimento de onda escolhido vs. o pH.
    3. Usando uma função curva sigmoidal, gere uma curva de ajuste melhor para cada um dos análogos 16 - 25. Informe o pH extrapolado na meia altura da curva. Este é o valor relatadopK.

4. Estudos de Aquisição de Rendimentos Quânticos e Fluorescência

  1. Crie soluções de estoque de estudo de fluorescência para análogos de dipyrrinone 16 - 18 e 20 - 25.
    1. Utilizando uma solução de estoque analógico dipyrrinone criada na etapa 3.1, realize uma diluição da solução de estoque adicionando 10 μL da solução de estoque a um frasco volumoso de 1 mL usando uma micropipette de 2 - 20 μL e, em seguida, adicione o buffer PBS (pH 7.0) à marca de 1 mL. Coloque uma tampa no frasco volumoso e misture bem invertendo e sacudindo o frasco. Esta solução de estoque diluída será usada para gerar o espectro da fluorescência e será referida como a solução de estoque de fluorescência.
    2. Repita o passo 4.1.1 para os analógicos 16 - 18 e 20 - 25.
  2. Adquira espectros de emissão de fluorescência em concentrações variadas, para os análogos 16 - 18 e 20 - 25. Para todos os análogos que não 18,adquira cinco espectros para cada analógico em soluções de pH 7 e 14 em concentrações de: 19,96, 39,84, 59,64, 79,37 e 99,01 nM. Para o analógico 18, adquira cinco espectros em uma solução de pH 7 nas concentrações de: 49,75, 99,01, 147,8, 196,1 e 243,9 nM. Em uma solução de pH 14, adquira cinco espectros para analógico 18 em concentrações de: 99.01, 196.1, 291.3, 384.6, 476,2 nM.
    1. Em um cuvette de quartzo transparente de quatro lados, adicione 3,00 mL de PBS (pH 7.0) ou 1.0 NaOH usando uma micropipette de 100 -1.000 μL em três incrementos de 1.000 μL.
      NOTA: Veja nota após a etapa 3.3.1.
    2. Usando o fluorômetro e o programa de software fluorômetro FluorEssence, adquira um espectro de emissão para a solução selecionada e rotule-a como a solução "em branco".
    3. Ao mesmo cuvette, adicione 6 μL de solução de estoque de fluorescência para o analógico dipyrrinone selecionado (Parte 4.1) usando uma micropipette de 0,5-10 μL. Coloque a tampa sobre a cuvette e misture bem invertendo e sacudindo suavemente a cuvette.
      NOTA: Veja nota após a etapa 3.3.3.
    4. Usando o fluorômetro, adquira um espectro de emissão para a solução composta selecionada usando λmax abs como o comprimento de onda de excitação. A intensidade de excitação foi medida ao longo de uma faixa de 200 nm a partir de 15 nm além do comprimento de onda de excitação (tipicamente uma faixa de 200 nm é necessária para que a intensidade da fluorescência retorne à linha de base).
    5. Repetição passos 4.2.3 - 4.2.4 até um total de 30 μL de solução de estoque de fluorescência foi adicionado ao cuvette.
    6. Repetição de passos 4.2.1 - 4.2.5 para análogos 16 - 25 em PBS (pH 7.0) e 1.0 M NaOH.
      NOTA: As concentrações de cuvette foram alteradas para o analógico 18 e os dados foram adquiridos utilizando-se: 2,0 mL de PBS com cinco incrementos consecutivos de 10 μL de solução de estoque de fluorescência para um neutro (pro 18) solução e 2,0 mL de 1,0 M NaOH com cinco incrementos de 20 μL de solução de estoque composto adicionado para uma solução básica (desprotosada de 18).
  3. Determine o rendimento quântico usando o método de Williams, A. T. et al.17
    1. Usando um programa de software de planilha (ou seja, Microsoft Excel), importe os dados (pontos de dados de intensidade de emissão) para o espectro de emissões para um único analógico dipyrrinone (tomado em PBS [pH 7.0] ou 1,0 M NaOH) nos vários níveis de concentração.
    2. Importar os pontos de dados dos espectros de emissões para a solução "em branco" (etapas 4.2.1 - 4.2.2) e subtrair os pontos de dados de intensidade de emissão "em branco" dos pontos de dados de intensidade de emissão, nos comprimentos de onda correspondentes, adquiridos em vários níveis de concentração.
    3. Transfira os pontos de dados de intensidade de emissão corrigidos "em branco" para um programa de grafia, como o GraphPad Prism 7, e a emissão de gráficos vs. comprimento de onda. Calcule a área sob a curva para cada uma das curvas obtidas nos vários níveis de concentração do analógico dipyrrinone.
    4. Seguindo a técnica delineada por Williams, A. T. et al, calcule um valor de absorção extrapolado para cada um dos diferentes níveis de concentração do analógico dipirorinone. Isso é feito multiplicando o valor calculado de absortividade molar (da análise de regressão linear mais adequada, ver o passo 3.4) por cada concentração de dipyrrinono analógico utilizado nas etapas 4.2.3-4.2.5.
    5. Usando um programa de grafagem como o GraphPad Prism 7, crie um gráfico da absorvância extrapolada (x-eixo) do analógico contra a área calculada sob cada curva de concentração (passo 4.3.4) para o comprimento de onda de emissão correspondente ao maior valor de emissão. Deve-se observar uma relação linear com r2 ≥ 0,96.
    6. Realizar etapas análogas a 3.1-3.4 e 4.1-4.3.5 para quinina em 0,5 M H2SO4 (ΦF = 0,55)18 e anticraceno no etanol (ΦF = 0,27)18,19 para obter dados para as normas.
    7. Obtenha os valores de rendimento quântico para 16 - 25 em PBS (pH 7.0) e 1.0 M NaOH usando as encostas extrapoladas obtidas das etapas 4.3.5 e 4.3.6 na seguinte equação:
      Φx =Φst(Gradx/Gradst)(η2x/η2st)
      onde Φst representa o rendimento quântico do padrão, Φx representa o rendimento quântico do desconhecido, Grad é a inclinação do melhor ajuste linear, e η é o índice refrativo do solvente utilizado (a razão de índice de refração foi calculada usando η = 1,36 para etanol e η = 1,35 para 0,5 M H2SO4).
    8. Reporte os rendimentos quânticos para 16 - 18 e 20 - 25 em PBS (pH 7.0) e 1,0 M NaOH como uma média do Φx obtido para quinina e anticraceno.

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Resultados

A reação de condensação de Claisen-Schmidt proporcionou acesso a análogos de dipiranos(16-25, Figura 4) utilizando o procedimento de um pote descrito na seção de protocolo (ver etapa 1). Os análogos 16-25 foram todos gerados por pirólinona condensadora 9, bromoisoindolone 10, ou isoindolone 11 com 1H-imidazol-2-carboxaldeído(12), 1H-imidazo...

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Discussão

A abordagem de condensação claisen-Schmidt fornece um meio bastante robusto de gerar pirazole, imidazol e fluorophores de dipyrrinone isoindolone através de um protocolo relativamente simplista operacionalmente. Embora a síntese dos análogos fluorescentes dipyrrinone tenha sido o foco deste estudo, deve-se notar que condições semelhantes podem ser aplicadas para acessar outros sistemas de anéis ligados à methine bicicíclica, como dipyrrinones23,24,

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Z.R.W. e N.B. agradecem ao NIH (2P20 GM103440-14A1) por seu generoso financiamento, bem como Jungjae Koh e a Universidade de Nevada, Las Vegas por sua ajuda na aquisição de 1H e 13C NMR. Além disso, gostaríamos de agradecer aos alunos de mídia visual da NSC, Arnold Placencia-Flores, Aubry Jacobs e Alistair Cooper por sua ajuda nos processos de filmagem e animação dentro das partes cinematográficas deste manuscrito.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
3-etil-4-metil-3-pirrolina-2-onaCombi-Blocks [ 766-36-9]Reagente sólido amarelo
isoindolina-1-onaArkPharm [ 480-91-1]Reagente sólido esbranquiçado
5-bromoisoindolina-1-onaCombi-Blocks [ 552330-86-6]Reagente sólido rosa
2-formilimidazolCombi-Blocks [ 10111-08-7 ]Reagente sólido esbranquiçado
Imidazol-4-carbaldeídoArkPharm [ 3034-50-2]Reagente sólido
1-H-pirazol-4-carbaldeídoOakwood Chemicals [ 35344-95-7]Reagente sólido
1-H-pirazole-5-carbaldeídoMatrix Scientific [ 3920-50-1]Reagente sólido
KOH PelletsBeanTown Chemicals[1310-58-3]Pelotas sólidas brancas
SiliflashScilicycledepó branco fino
Fosfato tamponado salino (PBS) (x10)GrowcellsMRGF-6235Líquido translúcido incolor
Beckman Coulter DU-800 UV/Vis Espectrofotômetro e softwareBeckman CoulterInstrumento e Software de EspectroscopiaN/A
Fluoromax-4 EspectrofluorômetroInstrumento de EspectroscopiaHoriba ScientificN/A
Software de Fluoremetria FluorEssence V3.5Software de EspectroscopiaHoribaScientific N/A
Micropipeta Finnpipette II (tamanhos: 100-1.000, 20-200 e 0,5-10 µ L)FischerbrandN/A
Equipamento Wilmad-LabGlass Evaporador rotativo (Modelo: WG-EV311-V-PLUS)SP SciencewareN/AEquipamento
Bomba de vácuo DuoSeal (Número do modelo: 1405)WelchN/AEquipamento
GraphPad Prism 4GraphPadN/ASoftware de análise de dados
SympHony pH Meter (Modelo: Sb70P)VWRN/AEquipamento
sílica gel R12030B

Referências

  1. Abbandonato, G., et al. Cis-trans photoisomerization properties of GFP chromophore analogs. European Biophysics Journal. 40 (11), 1205-1214 (2011).
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