Artigo de método

Imagem de perfusão doppler laser no hindlimb mouse

DOI:

10.3791/62012

⸱

18 de abril de 2021

 , 
1Division of Vascular Surgery, University of Washington, 2VA Puget Sound Health Care System

Neste artigo

Resumo

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Aqui, apresentamos um protocolo que demonstra a técnica e os controles necessários para a imagem de perfusão do Doppler laser para medir o fluxo sanguíneo na linha traseira do rato.

Resumo

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A recuperação do fluxo sanguíneo é uma medida crítica após isquemia de subida experimental ou reperfusão de isquemia. A imagem de perfusão do doppler laser (LDPI) é um método comum, não invasivo e repetitivo para avaliar a recuperação do fluxo sanguíneo. A técnica calcula o fluxo sanguíneo geral no tecido amostrado da mudança do Doppler na frequência causada quando um laser atinge glóbulos vermelhos em movimento. As medidas são expressas em unidades arbitrárias de perfusão, de modo que o contralateral não intervindo sobre a perna é geralmente usado para ajudar a controlar as medidas. A profundidade de medição está na faixa de 0,3-1 mm; para isquemia de cetam hind, isso significa que a perfusão dérmica é avaliada. A perfusão dérmica depende de vários fatores — o mais importante é a temperatura da pele e o agente anestésico, que deve ser cuidadosamente controlado para resultar em leituras confiáveis. Além disso, a pigmentação do cabelo e da pele pode alterar a capacidade do laser de alcançar ou penetrar na dermis. Este artigo demonstra a técnica de LDPI no bloco traseiro do mouse.

Introdução

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A ulceração da pele com cicatrização inadequada da ferida é uma das principais causas de amputações em pacientes humanos1. A cicatrização adequada da ferida requer níveis mais elevados de perfusão arterial do que os necessários para manter a pele intacta, que está comprometida em pacientes com doença arterial periférica2,3,4. Várias outras condições reumatológicas e diabetes também podem levar a microcirculação de pele perturbada e inadequada para curar feridas5,6. Muitos pacientes diabéticos t....

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Protocolo

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Os experimentos em animais foram realizados de acordo com um protocolo aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Washington.

1. Preparação do scanner

  1. Ajuste a altura do scanner de modo que a distância até o sujeito digitalizado seja de aproximadamente 30 cm.
  2. Ligue o imager e inicie o software associado.
  3. Abra o programa de medição. Se o software estiver se comunicando corretamente com o scanner, o laser infravermelho liga o aviso será.
  4. Calibrar a máquina com padrões fornecidos pelo fabricante (não mostrado no vídeo e dependerá do modelo específ....

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Resultados

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O LDPI bem-sucedido deve resultar em medidas repetidas consistentes, com variação de unidade de perfusão de 100-150 (correspondente a cerca de 10% da perfusão média usual para o footpad do mouse) entre as três varreduras(Figura 2). Como demonstrado na Figura 2,as repetições ajudam a determinar que o camundongo foi adequadamente equilibrado de modo que a razão isquêmica/controle reflete melhor o fluxo sanguíneo subjacente em oposição à variação da perfusão dérmic.......

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Discussão

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A técnica consistente é fundamental para obter resultados confiáveis com LDPI. O mesmo anestésico, as configurações de temperatura, a posição do mouse e a região de interesse devem ser usadas durante todo o curso de tempo. Diferentes agentes anestésicos resultarão em valores de perfusão maiores ou menores9. A anestesia isoflurane é conveniente devido ao seu rápido início e emergência, bem como à segurança geral. Uma porcentagem consistente de isoflurane deve ser usada como profundidade de anestesi.......

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Divulgações

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Tang não tem conflitos de interesse para revelar.

Agradecimentos

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Este trabalho foi realizado com a utilização de instalações e recursos no Centro de Saúde De Som VA Puget. O trabalho é do autor e não reflete necessariamente a posição ou política do Departamento de Assuntos dos Veteranos ou do governo dos Estados Unidos. Dr. Tang é atualmente financiado através do VA (Mérito 5 I01 BX004975-02).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
preto não reflexivoLoja de tecidos, neoprene preto recomendado pela empresa
F/air cannisterA.M. Bickford Inc80120
Manta homeotérmica com sonda de metal rígidaAparelhoTambém vem com sonda flexível, mas esta é menos durável
Máquina de anestesia com isofluranoDragerVários fabricantes
Câmara de indução de isofluranoVetEquip941444câmara de 2 L
Imageador de perfusão Doppler laser MoorInstrumentsMoorLDI2-IRImageador de alta resolução (MoorLDI2-HIR)
ConeVários fabricantes
NairNair
TanqueVários fabricantes
SurgilubeDistribuidores múltiplos
Material de Harvard nasal de anestesia de camundongo de oxigênio

Referências

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  1. Varma, P., Stineman, M. G., Dillingham, T. R. Epidemiology of limb loss. Physical Medicine and Rehabilitation Clinics of North America. 25 (1), 1-8 (2014).
  2. Farber, A. Chronic Limb-Threatening Ischemia. New England Journal of Medicine. 379 (2), 171-180 (2018).

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