Um modelo de endotoxina de unidade de terapia intensiva reprodutível em ratos

Resumo

Aqui, apresentamos um modelo de endotoxina de terapia intensiva reprodutível em ratos.

Resumo

A sepse e o choque séptico continuam sendo a principal causa de morte nas unidades de terapia intensiva. Apesar de melhorias significativas no manejo da sepse, a mortalidade ainda varia entre 20 e 30%. Novas abordagens de tratamento para reduzir a falha multiórgão relacionada à sepse e a morte são urgentemente necessárias. Modelos robustos de animais permitem uma ou múltiplas abordagens de tratamento, bem como para testar seu efeito em parâmetros fisiológicos e moleculares. Neste artigo, é apresentado um modelo animal simples.

Em primeiro lugar, a anestesia geral é induzida em animais com o uso de anestesia volátil ou por anestesia intraperitoneal. Após a colocação de um cateter intravenoso (veia da cauda), traqueostomia e inserção de um cateter intraarterial (artéria traseira), inicia-se a ventilação mecânica. Os valores básicos da pressão arterial média, da saturação do oxigênio arterial e da frequência cardíaca são registrados.

A injeção de lipopólises (1 miligrama/quilograma de peso corporal) dissolvida em soro fisiológico tamponado por fosfato induz uma resposta inflamatória forte e reprodutível através do receptor 4. As correções de fluidos, bem como a aplicação da norepinefrina são realizadas com base em protocolos bem estabelecidos.

O modelo animal apresentado neste artigo é de fácil aprendizado e fortemente orientado para o tratamento clínico da sepse em uma unidade de terapia intensiva com sedação, ventilação mecânica, monitoramento contínuo da pressão arterial e amostragem repetitiva do sangue. Além disso, o modelo é confiável, permitindo dados reprodutíveis com um número limitado de animais de acordo com os princípios 3R (reduzir, substituir, refinar) da pesquisa animal. Embora experimentos com animais em pesquisas de sepse não possam ser facilmente substituídos, medições repetitivas permitem uma redução dos animais e manter animais sépticos anestesiados diminui o sofrimento.

Introdução

A sepse e sua forma mais grave, choque séptico, são síndromes no terreno de uma infecção, resultando em uma reação inflamatória exagerada com a liberação de citocinas, levando a alterações fisiológicas e bioquímicas com defesa imunológica suprimida e resultados fatais ^1,2. Essa reação inflamatória desequilibrada resulta em disfunção de órgãos e falência de órgãos em vários órgãos vitais, como pulmão, rim e fígado. Com 37%³, a sepse é um dos motivos mais comuns para o paciente ser internado em uma unidade de terapia intensiva (UTI). A mortalidade por sepse atualmente varia em torno de 20....

Protocolo

Todos os experimentos apresentados neste protocolo foram aprovados pelas Autoridades Veterinárias do Cantão de Zurique, Suíça (números de aprovação 134/2014 e ZH088/19). Além disso, todas as etapas realizadas neste experimento foram de acordo com as Diretrizes sobre Experimentos com Animais pela Academia Suíça de Ciências Medianas (SAMS) e Diretrizes da Federação das Associações Europeias de Zootecnia (FELASA).

1. Indução de anestesia e monitoramento animal

1. Mantenha os ratos Wistar machos com um peso de 250-300 gramas (g) em gaiolas ventiladas sob condições livres de patógenos. Forneça um ciclo claro/escuro de 12-12 horas a uma te....

Resultados

O sistema apresentado permite a endotoxemia com animais hemodinamicamente estáveis, conforme relatado anteriormente⁹. Enquanto a pressão arterial média permanece estável em animais com, e sem estimulação LPS LPS animais tratados desenvolvem características de sepse, como um excesso de base negativa e uma forte reação inflamatória medida por citocinas plasmáticas (6 horas após a aplicação) como CINC-1 (867 ng/mL), MCP-1 (5027 ng/mL) e IL-6 (867 ng/mL)⁸,

Discussão

O protocolo descrito aqui permite um modelo de sepse altamente reprodutível, mas simples de aprender, que pode ser adaptado de acordo com a questão da pesquisa. Dados in vivo essenciais referentes à função do órgão, como frequência cardíaca, pressão arterial e saturação de oxigênio arterial periférico podem ser coletados continuamente, e a amostragem de sangue pode ser realizada repetidamente durante todo o experimento. Além disso, podem ser instaladas modificações em relação aos protocolos de substituição de fluidos e s.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Suturas de seda 2-0	Ethicon, Sommerville, NJ	K833
Cateter intravenoso cirúrgico padrão 26	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	391349	Equipamento de anestesia padrão
6-0 Seda trançada preta LOOK	Surgical Specalities Corporation, Wyomissing, PA	SP114	Bomba de
seringa Alaris	Bencton Dickinson
Betadine	Mundipharma, Basel, Suíça	7.68034E+12	Número GTIN
Micropinças de pontas finas curvas	Instrumentos de precisão mundial (WPI), Sarasota, FL	504513	Facilita a preparação vascular
Micropinças de pontas finas	Instrumentos de precisão mundial (WPI), Sarasota, FL	501976	As pontas precisam ser polidas regularmente
Infinity Delta XL Monitoramento de anestesia	Draeger, Lü beck, Alemanha
Isoflurano, frascos de 250 mL	Attane, Piramal, Mumbai, Índia	LDNI 22098	Equipamento veterinário padrão
Cetamina (Ketalar)	Pfitzer, Nova York, NY
Lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli, sorotipo 055:B5	Sigma, Buchs, Suíça
Q-tips small	Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Alemanha	EH11.1
Ringerfundin	cirúrgico padrão Bbraun, Melsungen, Alemanha
Vaporizador de isofluorano Tec-3	Ohmeda, GE-Healthcare, Chicago, IL	não está mais disponível	Equipamento veterinário padrão
Xylazine (Xylazin Streuli)	Streuli AG, Uznach, Suíça