Este artigo demonstra uma abordagem cirúrgica eficiente para estabelecer isquemia aguda em camundongos com uma pequena incisão. Essa abordagem pode ser aplicada pela maioria dos grupos de pesquisa sem quaisquer atualizações laboratoriais.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Este artigo demonstra uma abordagem cirúrgica eficiente para estabelecer isquemia aguda em camundongos com uma pequena incisão. Essa abordagem pode ser aplicada pela maioria dos grupos de pesquisa sem quaisquer atualizações laboratoriais.
O objetivo deste estudo é introduzir e avaliar uma abordagem cirúrgica modificada para induzir isquemia aguda em camundongos que podem ser implementados na maioria dos laboratórios animais. Ao contrário da abordagem convencional para a dupla ligadura da artéria femoral (DLFA), foi feita uma incisão menor na região inguinal direita para expor a artéria femoral proximal (FA) para a realização de DLFA. Em seguida, utilizando uma sutura 7-0, a incisão foi arrastada para a região do joelho para expor a ressonância magnética distal (RM) em membros traseiros bilaterais foi usada para detectar oclusão da FA após a cirurgia. Aos 0, 1, 3, 5 e 7 dias após a cirurgia, a recuperação funcional dos membros posteriores foi avaliada visualmente e avaliada por meio da escala de Tarlov. A avaliação histológica foi realizada após eutanásia dos animais 7 dias após a DLFA. Os procedimentos foram realizados com sucesso na perna direita em dez ApoE-/- camundongos, e nenhum camundongo morreu durante observação subsequente. Os tamanhos de incisão em todos os 10 camundongos foram inferiores a 5 mm (4,2 ± 0,63 mm). Os resultados da ressonância mostraram que o fluxo sanguíneo da FA no lado isquêmico estava claramente bloqueado. Os resultados da escala tarlov demonstraram que a função do membro traseiro diminuiu significativamente após o procedimento e se recuperou lentamente nos 7 dias seguintes. A avaliação histólógica mostrou uma resposta inflamatória significativa no lado isquêmico e reduziu a densidade microvascular no membro traseiro isquêmico. Em conclusão, este estudo introduz uma técnica modificada usando uma incisão em miniatura para realizar isquemia de membros traseiros (HLI) utilizando DLFA.
Há necessidade não atendida de modelos animais pré-clínicos para pesquisas em doenças vasculares, como a doença arterial periférica (PAD). Apesar dos desenvolvimentos avançados no diagnóstico e tratamento, houve mais de 200 milhões de pacientes com PAD em2018 1, e seu número está constantemente aumentando. Embora várias novas abordagens terapêuticas2,3,4,5,6,7 tenham sido descritas, a tradução bem sucedida dessas modalidades terapêuticas para a apli....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
NOTA: Todos os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com a diretriz da CE EC 2010/63/UE e foram aprovados pela legislação alemã local (35-9185.81/G[1]239/18). Dez ApoEmasculinos -/- camundongos com fundo C57BL/6J, pesando 29,6-38,0 g, foram alojados em um ciclo claro/escuro de 12 horas e alimentaram uma dieta ocidental (1,25% de colesterol e 21% de gordura) e ad libitum de água por 12 semanas a partir da idade de 8 semanas. O HLI foi realizado em camundongos de 20 semanas de idade, conforme descrito abaixo.
1. Indução de HLI em ApoE-/- camundongos
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Características do ApoE-/- ratos
As cirurgias de DLFA foram realizadas com sucesso em 10 camundongos para estabelecer o modelo HLI, e nenhum dos camundongos morreu após o procedimento. Para acompanhar as mudanças no peso corporal, os camundongos foram pesados antes do procedimento DLFA (Pré-DLFA) e 7 dias após a cirurgia de DLFA (Pós-DLFA). Os pesos pré-DLFA variaram de 29,6 a 38,0 g (média de 34,74 ± 2,47 g), e os pesos pós-DLFA variaram de 26.5 a 34,1 g .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Este estudo relata uma abordagem modificada, simplificada e cirurgicamente eficiente para estabelecer um modelo HLI em ApoE-/- camundongos usando ligadura dupla nas regiões proximais e distais da FA através de uma incisão de 3-4 mm sem quaisquer atualizações laboratoriais necessárias. A principal característica deste método é o tamanho menor da incisão em comparação com estudos relatados anteriormente descrevendo os modelos HLI do mouse8,9,<.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Os autores declaram que o conteúdo do artigo foi composto na ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que possam ser interpretadas como um potencial conflito de interesses.
Os autores agradecem a Viktoria Skude, Alexander Schlund e Felix Hörner pelo excelente apoio técnico.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 10x tampão fosfato salino Roth | 9143.1 | Usado para coloração de hematoxilina e eosina e coloração de imunohistoquímica | |
| 30% H2O2 | Roth | 9681.2 | Usado para coloração de imunohistoquímica |
| 6-0 suturas absorvíveis | PROLENE | 8776H | Usado para costurar a pele |
| 6-0 sutura absrogável | PROLENE | EP8706 | Usado em cirurgia |
| 7-0 suturas absorvíveis | PROLENE | EH8021E | Usado para ligar a artéria |
| 7-0 sutura absrogável | PROLENE | EP8755 | Usado em cirurgia |
| Ácido acético | Roth | 6755.1 | Usado para coloração de hematoxilina e eosina |
| Albumina Fraktion V | Roth | 8076.2 | Usado para coloração imuno-histoquímica |
| Autoclave | Systec GmbH | Systec VX-150 | Utilizado para a esterilização dos instrumentos cirúrgicos |
| Microscópio Axio vert A1 | Carl Zeiss | ZEISS Axio Vert.A1 | Utilizado para visualizar e tirar fotografias da coloração de hematoxilina e eosina e coloração de imuno-histoquímica |
| Bruker BioSpec 94/20 AVIII | Bruker Biospin MRI GmbH | N/A | Digitalizar o bloqueio da artéria femoral |
| Buprenovet Sine 0,3mg/ml | Bayer AG | 2542 (WDT) | Usado no tratamento da dor pós-operatória. Dose - 0,1 mg/kg de peso corporal a cada 8 horas por 48 h após a operação |
| Anticorpo CD31 | Abcam | ab28364 | Usado para coloração imuno-histoquímica |
| Solução de eosina Y 0,5% em água | Roth | X883.1 | Usado para coloração de hematoxilina e eosina |
| Solução de recuperação de epítopos pH 6 | Leica Biosystems | 6046945 | Usado para coloração imuno-histoquímica |
| Etanol ≥ 99,5 % | Roth | 5054.1 | Usado para coloração de hematoxilina e eosina e coloração imuno-histoquímica |
| Fentanil | Cayman Chemical | 437-38-7 | Usado para anestesia |
| Pinça de ponta fina | Medixplus | 93-4505S | Usado para separar a artéria do nervo e da veia |
| Esterilizador de esferas de vidro | Simon Keller | Tipo 250 | Usado para esterilização dos instrumentos cirúrgicos |
| Graefe iris fórceps curvo | VUBU | VUBU-02-72207 | Usado para separação romba de pele e tecido subcutâneo |
| Creme removedor de pelos, Veet (com aloe vera) | Reckitt Benckiser | 108972 | Remover pelos dos membros posteriores de camundongos |
| Placa de aquecimento | STÖ RK-TRONIC | 7042092 | Manter a temperatura de satble de camundongos |
| Hematoxilina | Roth | T865.2 | Usado para coloração de hematoxilina e eosina e coloração de imuno-histoquímica |
| Microscópio cirúrgico Leica Leica | M651 | Ampliar o campo de visão para facilitar a operação | |
| Sistema de Cromogênio Líquido DAB + Substrato | Dako | K3468 | Usado para coloração |
| de imuno-histoquímicaMacho ApoE-/- camundongos | Charles River Laboratories | N/A | Usado para estabelecer o modelo de camundongos com doença arterial periférica |
| Medetomidine | Cayman Chemical | 128366-50-7 | Usado para anestesia |
| Micro Needle Holder | Preto & Preto Cirúrgico | B3B-18-8 | Segurando a agulha |
| Micro sutura amarrando fórceps | Life Saver Surgical Industries | PS-MSF-145 | Usado para auxiliar no nó durante a cirurgia |
| Microtome Biobase | Bk-Mt268m | Usado para seccionamento de tecido | |
| Midazolam | Ratiopharm | 44856.01.00 | Usado para anestesia |
| Sistema de Monitoramento e Gating de Pequenos Animais compatível com RM Modelo 1025 | SA Instruments | N/a | monitoramento dos sinais vitais do animal durante a ressonância magnética |
| Octeniderm farblos | Schü lke & Mayr GmbH | 180212 | usado para desinfecção da pele |
| Pomada para os olhos e nariz | Bayer AG | 1578675 | Mantenha os olhos molhados sob a anestesia |
| Paraformaldeído | Roth | 0335.1 | Usado para fixação do tecido |
| Pentobarbital | Nembutal | 76-74-4 | Usado para anestesia |
| Solução salina | DeltaSelect | 1299.99.99 | Usado para anestesia |
| mola lidar com tesoura com pontas finas e afiadas | Preto & Preto Cirúrgico | B66167 | Usado para cortar a artéria |
| SuperCut Tesoura | Preto & Cirúrgico Preto | B55992 | Usado para cortar a pele |
| Triton X-100 | Roth | 9002-93-1 | Usado para mancha imunohistoquímica |
| Dieta ocidental, 1,25% de colesterol | ssniff Spezialdiä ten GmbH | E15723-34 | Dieta para camundongos |
| Xileno | Roth | 4436.3 | Usado para coloração de hematoxilina e eosina e coloração imuno-histoquímica |
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.