Consideração de coleta, processamento e armazenamento para pesquisa de biomarcadores urinários

Summary

Este protocolo visa fornecer considerações para coleta, processamento e armazenamento de amostras de urina para estudos de biomarcadores de infecção do trato urinário.

Abstract

Existem várias proteínas urinárias que se mostram promissoras como novos marcadores de infecções do trato urinário. A identificação de um novo biomarcador com maior precisão preditiva em comparação com os métodos diagnósticos atuais tem o potencial de melhorar muito a capacidade de gerenciar pacientes com infecções do trato urinário. No entanto, a coleta, o processamento e o armazenamento de amostras podem afetar potencialmente os resultados da pesquisa de biomarcadores. Compreender os efeitos de cada um desses estágios nos estudos de biomarcadores é necessário para informar pesquisas futuras e de alta qualidade nessa área, bem como para revisar criticamente outros estudos nessa área. Aqui, o estudo revisa a literatura sobre os efeitos de cada estágio do processamento da amostra de urina e relata os efeitos de várias condições nas proteínas urinárias. O protocolo se concentrará em técnicas de coleta, tempo e temperatura de armazenamento, técnicas de processamento, uso de reagentes e congelamento de longo prazo na estabilidade do biomarcador. Ele se concentrará em proteínas, mas discutirá brevemente outros materiais que podem ser utilizados na pesquisa de biomarcadores. Ao fazer isso, este protocolo fornecerá um guia para futuros pesquisadores para auxiliar no desenho de estudos de biomarcadores urinários.

Introduction

As infecções do trato urinário (ITU) são uma das infecções bacterianas mais comuns em crianças e adultos¹. Embora o diagnóstico de ITU em algumas populações possa ser descomplicado, pode ser mais complexo em outras, como aquelas com bexiga neuropática². A capacidade de diagnosticar com precisão as ITUs ajudará a melhorar os esforços de administração de antibióticos, diminuindo o uso de antibióticos desnecessários e potencialmente auxiliando no diagnóstico precoce de ITU, diminuindo assim o risco de morbidade. Dada a prevalência de ITUs, há um interesse significativo em melhorar o manejo ....

Protocol

Este protocolo segue as diretrizes do comitê de ética em pesquisa com seres humanos da instituição. Certifique-se de que a aprovação seja obtida do conselho de revisão institucional (IRB) antes da coleta e utilização de espécimes biológicos para pesquisa.

1. Coleta

1. Obtenha a amostra de urina em um copo de amostra estéril. Decida o tipo de amostra de urina, bem como os critérios específicos de inclusão e exclusão, com base no desenho específico do estudo. Para estudos de ITU, use o método de captura limpa ou cateterismo para evitar contaminação perineal.
2. Para obter uma amostra de urina ....

Results

A centrifugação teve um pequeno impacto nos níveis de NGAL. As amostras centrifugadas armazenadas a -80 °C apresentaram níveis mais baixos de NGAL do que as amostras não centrifugadas (2,17 ng/mL ± 0,32 ng/mL, 2,77 ng/mL ± 0,21 ng/mL). Os ciclos de congelamento também tiveram impacto nos níveis de NGAL após o terceiro ciclo de congelamento e descongelamento. (Figura 2). Das condições estudadas (centrifugação, ciclos de congelamento e descongelamento e temperatura de armazenamento), a tempera.......

Discussion

A importância de produzir resultados consistentes e reprodutíveis não se limita ao sucesso de estudos individuais, mas também permitirá uma melhor comparação dos resultados dentro da literatura⁹. A variação entre os estudos nas principais etapas processuais pode introduzir vieses irreversíveis que podem afetar os sinais dos biomarcadores e sua interpretação, o que pode ser responsável por discrepâncias entre vários estudos¹⁰. Isso demonstra.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ácido bórico	Sigma-Aldrich	B6768	A considerar para amostras que não podem ser rapidamente processadas e congeladas
Caixas de congelação	Fisher Scientific	03-395-464
Tubos de microcentrífuga	Thomas scientific	1149X93
NGAL ELISA Kit	R& D Systems	DLCN20	Usado para criar resultados representativos
Pipeta e ponteiras	Depende do tamanho da pipeta e do volume de fluido.
Azida de sódio	Sigma-Aldrich	S2002	A ser considerado para amostras que não podem ser rapidamente processadas e congeladas
Copos de coleta de urina	Thermo Scientific	3122B03ORG	Copos estéreis não são necessários, a menos que sejam necessários para outros estudos