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Artigo de método

Um protocolo para bypass gástrico Roux-en-Y em ratos usando grampos lineares

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DOI:

10.3791/62575

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21 de agosto de 2021

Neste artigo

Resumo

O bypass gástrico Roux-en-Y (RYGB) é realizado para tratar obesidade e diabetes. No entanto, os mecanismos subjacentes à eficácia do RYGB não são totalmente compreendidos, e os estudos são limitados pela dificuldade técnica que leva à alta mortalidade em modelos animais. Este artigo fornece instruções sobre como executar RYGB em ratos com altas taxas de sucesso.

Resumo

O bypass gástrico Roux-en-Y (RYGB) é comumente realizado para o tratamento de obesidade grave e diabetes tipo 2. No entanto, o mecanismo de perda de peso e mudanças metabólicas não são bem compreendidos. Acredita-se que múltiplos fatores desempenham um papel, incluindo redução da ingestão calórica, diminuição da absorção de nutrientes, aumento da saciedade, liberação de hormônios promotores da saciedade, mudanças no metabolismo do ácido biliar e alterações na microbiota intestinal.

O modelo RYGB de ratos apresenta uma estrutura ideal para estudar esses mecanismos. Trabalhos anteriores em modelos de camundongos tiveram altas taxas de mortalidade, variando de 17 a 52%, limitando sua adoção. Modelos de ratos demonstram mais reserva fisiológica ao estímulo cirúrgico e são tecnicamente mais fáceis de adotar, pois permitem o uso de grampeadores cirúrgicos. Um desafio com os grampeadores cirúrgicos, no entanto, é que eles muitas vezes deixam uma grande bolsa gástrica que não é representativa do RYGB em humanos.

Neste protocolo, apresentamos um protocolo RYGB em ratos que resultam em uma pequena bolsa gástrica usando grampeadores cirúrgicos. Utilizando dois incêndios grampeador que removem oomaca florestal do rato, obtemos uma bolsa gástrica menor semelhante à que segue um típico RYGB humano. O grampeamento cirúrgico também resulta em melhor hemostasia do que divisão afiada. Além disso, o forestomach do rato não contém glândulas e sua remoção não deve alterar a fisiologia do RYGB.

A perda de peso e as alterações metabólicas na coorte RYGB foram significativas em comparação com a coorte falsa, com tolerância significativamente menor à glicose em 14 semanas. Além disso, este protocolo tem uma excelente sobrevida de 88,9% após o RYGB. As habilidades descritas neste protocolo podem ser adquiridas sem experiência microcirúrgica prévia. Uma vez dominado, este procedimento fornecerá uma ferramenta reprodutível para estudar os mecanismos e efeitos do RYGB.

Introdução

A obesidade e o diabetes tipo 2 tornaram-se epidemias mundiais1. Embora a perda de peso médico possa melhorar o diabetes em pacientes, aqueles com diabetes grave se beneficiam mais da cirurgia bariátrica. A cirurgia bariátrica tem se mostrado segura e eficaz na perda de peso e na melhoria ou cura do diabetes tipo2 ,3, mesmo naqueles com doença de longa data4. Procedimentos bariátricos metabólicos, como a atual cirurgia de bypass gástrico Roux-en-Y (RYGB), induzem melhorias rápidas e sustentadas na homeostase de glicose, ao mesmo tempo em que reduzem a necessidade....

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Protocolo

Os protocolos de uso de animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso animal da Universidade de Alberta (AUP00003000). Consulte a Figura 1 para um diagrama demonstrando a anatomia RYGB.

1. Bypass gástrico Roux-en-Y

  1. Preparação de animais e configuração operacional
    1. Uma semana antes da cirurgia, forneça aos ratos terapia de reidratação oral e dieta líquida, além de sua dieta sólida e água para aclimatá-los a esta nova dieta.
    2. Ratos rápidos com acesso apenas à água por 12-18 h antes da cirurgia.
      1. Certifique-se de que os ratos estão em jejum em uma plataforma de fio elevada....

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Resultados

Animais e moradia
36 ratos Wistar machos foram alojados em pares e foram alimentados com 60% de roedores estéreis com alta gordura a partir das seis semanas de idade(Figura 2). Com 16 semanas de idade, eles foram submetidos a RYGB ou cirurgia falsa. Após a primeira semana pós-operatória, os ratos foram retomados em uma dieta rica em gordura. Metade dos ratos foram eutanizados em 2 semanas após o operatório e a outra metade foi eutanásia em 14 semanas de pós-operatório.

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Discussão

O RYGB envolve a criação de uma pequena bolsa gástrica (menos de 30 mL), e a criação de um membro biliopancreatic e um membro Roux(Figura 1). Em humanos, o membro biliopancreatic é tipicamente de 30 a 50 cm e transporta secreções do remanescente gástrico, fígado e pâncreas. O membro Roux tem tipicamente 75 a 150 cm de comprimento e é o canal principal para alimentos ingeridos. O canal comum é o distal intestinal delgado restante para onde os dois membros se juntam e é onde ocorre a maioria d.......

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Divulgações

A Ethicon forneceu dois grampeadores de corte linear de 45 mm, várias recargas de grampeador de 3,5 mm e suturas de polipropileno 6-0. Os autores não têm outros conflitos de interesse para declarar.

Agradecimentos

Este estudo foi financiado pela American Society for Metabolic and Bariatric Surgery Research Award. A Ethicon graciosamente forneceu suturas, grampeadores e clipes. A pesquisa de doutorado do autor principal foi financiada pelo Programa de Pesquisadores Clínicos da Universidade de Alberta e pela Alberta Innovates Clinician Fellowship. Também gostaríamos de agradecer a Michelle Tran por sua ilustração médica da anatomia do RYGB.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Suturas de Seda 2-0EthiconK533
3-0 Vicryl SuturasEthiconJ219H
4% IsofluranoN/AN/A Solução
de Dextrose a 5% e Cloreto de Sódio a 0,9% - 1000 mLCônicos Baxter2B1064
50 mL SuturasFisher Scientific14-432-22
6-0Ethicon8805H
N/AN/A
Barbeador de Pêlos de AnimaisN/AN/A
Solução BetadineN/AN/A
Porta-agulha Castrojievo com trava 14 cm (curva suave)Instrumentos de Precisão Mundial503258
ECHELON FLEX Cortador Linear Endoscópico ArticuladoEthiconPinças Econômicas EC45A
#4World Precision Instruments501978
ENDOPATH ETS Cortador Linear Articulado 45mm RecarregaControladorEthicon 6R45B
com almofada de aquecimento (15,2 cm L x 20,3 cm C), sonda de temperatura da almofada e 10 protetores de manga descartáveis e não estéreis Coleira
Kent ScientificEC404VL-10
Tubo de Alimentação para Dieta Líquida (150 mL)Bio-Serv9007
(curto ajustável)Bio-Serv9015
World Precision Instruments500452
Micro ScissorsWorld PrecisionInstruments 503365
Dieta de rato, calorias com alto teor de gordura (60%), pellets maciosBio-ServS3282
No. 11 Lâmina e cabo de bisturiN/AN/A
OPMI Microscópio CirúrgicoVario ZEISSS88
Grade de Piso ElevadoTecniplastGM500150 Grade
Dieta Líquida para Roedores, Lieber-DeCarli '82, Controle, 4 Litros/SacoBio-ServF1259
Solução de Irrigação de Cloreto de Sódio 0,9% - 500 mLBaxterJF7633
Cotonetes EstéreisN/AN/A
Campo EstérilN/AN/A
Toalha EstérilN/AN/A
Unidade de Cauterização TérmicaWorld Precision Instruments501293
Tubos de Centrífuga Prolene Máquina Anestésica de Almofada de Aquecimento de Infravermelho Distante Elizabetana de Rato Grande Kent Scientific RT-0515 Suporte para Tubo de Alimentação para Dieta Líquida Pinça Micro Mosquito de Piso Elevado

Referências

  1. World Health Organization. Obesity and Overweight. , Available from: http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/obesity-and-overweight (2018).
  2. Courcoulas, A. P., et al. Three-year outcomes of bariatric surgery vs lifestyle intervention for type 2 diabetes mellitus treatment. JAMA Surgery. 15213 (10)....

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Reimpressões e permissões

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