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Artigo de método

Um Modelo de Apoptose Neuronal Induzida por Compressão da Medula Espinhal em Ratos

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DOI:

10.3791/62604

29 de junho de 2021

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar um modelo de compressão da medula espinhal de rato, avaliar sua pontuação comportamental e observar a região comprimida da medula espinhal. As avaliações comportamentais mostraram diminuição da incapacidade motora do monitor. A coloração e imunocoloração de hematoxilina e eosina revelaram considerável apoptose neuronal na região comprimida da medula espinhal.

Resumo

Como uma doença degenerativa progressiva grave, a mielopatia espondilótica cervical (MSC) tem um prognóstico desfavorável e está associada a dor física, rigidez, disfunção motora ou sensorial e alto risco de lesão medular e acroparalisia. Assim, estratégias terapêuticas que promovam a regeneração medular eficiente nessa doença crônica e progressiva são urgentemente necessárias. Modelos de compressão da medula espinhal animal eficazes e reprodutíveis são necessários para entender o complexo mecanismo biológico subjacente ao CSM. A maioria dos modelos de lesão medular reflete condições destrutivas agudas e estruturais, enquanto os modelos animais de MSC apresentam uma compressão crônica na medula espinhal. Este trabalho apresenta um protocolo para gerar um modelo de compressão da medula espinhal de ratos, que foi posteriormente avaliado avaliando o escore comportamental e observando a região da medula espinhal comprimida. As avaliações comportamentais mostraram diminuição da incapacidade motora do monitor, incluindo movimentos articulares, capacidade de pisar, coordenação, estabilidade do tronco e força muscular dos membros. A coloração e imunocoloração de hematoxilina e eosina (H&E) revelou considerável apoptose neuronal na região comprimida da medula espinhal.

Introdução

Como uma doença degenerativa progressiva comum, a MSC é responsável por 5-10% de toda a espondilose cervical1. Se os pacientes que sofrem de MSC ignorarem seus sintomas e não os tratarem de maneira oportuna e eficaz, isso pode levar a complicações graves, como lesão medular e paralisia de membros, que se deteriorariam com o envelhecimento, representando um fardo econômico e mental substancial para os pacientes e suas famílias 2,3. A patogênese da MSC é complexa, envolvendo fatores estáticos e dinâmicos, a teoria da hipóxia-isquemia, a lesão das células ....

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Protocolo

O procedimento a seguir foi realizado com a aprovação do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai. Todas as cirurgias de sobrevivência foram realizadas em condições estéreis, conforme descrito pelas diretrizes do NIH. A dor e o risco de infecções foram tratados com analgésicos e antibióticos apropriados para garantir um resultado bem-sucedido. Este procedimento cirúrgico é otimizado para ratos machos Sprague-Dawley (SD) com 12 semanas de idade e 400 g de peso.

1. Preparação de hidrogel de poliacrilamida PVA

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Resultados

A lesão compressiva da medula espinhal pode levar à incapacidade neuromuscular nos membros
À medida que o pedaço de hidrogel se expande gradualmente, ele comprime persistentemente a região da medula espinhal por um período prolongado, o que simula as incapacidades do membro anterior induzidas por doenças da medula espinhal cervical 8,10. No modelo atual, foi observada considerável contratura ipsilateral da pata dianteira na maioria dos ratos (.......

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Discussão

O objetivo deste procedimento cirúrgico era gerar apoptose neural prolongada e reprodutível na medula espinhal de ratos. Uma das principais vantagens desse modelo é que os implantes de hidrogel expansível fornecem uma compressão prolongada na medula espinhal, levando a uma resposta apoptótica neural progressiva (Figura 2C), que é consistente com o processo patológico da MSC. No presente estudo, a mortalidade por lesão medular foi extremamente baixa (~ 2 em 5.......

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Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar e afirmam que não há restrições ao acesso total a todos os materiais utilizados neste estudo.

Agradecimentos

Este estudo foi apoiado pelo Programa Nacional de P&D da China (2018YFC1704300), Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81930116, 81804115, 81873317 e 81704096), Programa de Vela de Xangai (18YF1423800), Fundação de Ciências Naturais de Xangai (20ZR1473400). Este projeto também foi apoiado pela Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (2019LK057).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
PomadaPrevine a infecção da ferida
Buprenorfina-SRAlívio da dor
IsofluranoVeteasyAnestesia
anestesia inalanteAnestesia
Micro fórceps oftálmicaEquipamento médico MingrenComprimento: 11 cm, Diâmetro da cabeça: 0,3 mmPrenda o músculo
Fórceps oftálmicoShanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd. Fábrica de instrumentos cirúrgicosJD1050Clipe a pele
Tesoura oftálmica (10 cm)Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd. Fábrica de instrumentos cirúrgicosY00030Incisão na pele
SD ratos machos ShanghaiSLAC Laboratory Animal Co., LtdSCXK2018-0004Modelo animal
Lâminas cirúrgicas estéreis (22 #)Fornecedor verificado - Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd.35T0707Incisão muscular
AparadorDepilação
Creme de depilação VeetRECKITT BENCKISER (Índia) LtdDepilação
Venus tesourasMingren equipamento médicoComprimento: 12,5 cmIncisão muscular
antibiótica Equipamento de de pequenos animais

Referências

  1. Lebl, D. R., Bono, C. M. Update on the diagnosis and management of cervical spondylotic myelopathy. The Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 23 (11), 648-660 (2015).
  2. Haddas, R., et al.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Modelo de RatoMielopatia Espondil tica CervicalLes o MedularAvalia o ComportamentalColora o por Hematoxilina e EosinaImunocolora oDisfun o MotoraRegenera o da Medula Espinhal
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