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Artigo de método

Estabelecendo um ecossistema de polvo para pesquisa biomédica e bioengenharia

2.9K visualizações

DOI:

10.3791/62705

22 de setembro de 2021

Neste artigo

Resumo

Compreender as estruturas fisiológicas e anatômicas únicas dos polvos pode impactar muito a pesquisa biomédica. Este guia demonstra como configurar e manter um ambiente marinho para acomodar esta espécie e inclui imagens de última geração e abordagens analíticas para visualizar a anatomia e a função do sistema nervoso do polvo.

Resumo

Muitos desenvolvimentos em pesquisas biomédicas foram inspirados pela descoberta de mecanismos anatômicos e celulares que suportam funções específicas em diferentes espécies. O polvo é um desses animais excepcionais que deu aos cientistas novas percepções sobre os campos da neurociência, robótica, medicina regenerativa e próteses. Pesquisas com esta espécie de cefalópodes exigem a configuração de instalações complexas e cuidados intensivos tanto para o polvo quanto para seu ecossistema que é fundamental para o sucesso do projeto. Este sistema requer múltiplos sistemas de filtragem mecânica e biológica para fornecer um ambiente seguro e limpo para o animal. Junto com o sistema de controle, a manutenção e limpeza de rotina especializadas são necessárias para manter efetivamente a instalação funcionando a longo prazo. É aconselhável fornecer um ambiente enriquecido a esses animais inteligentes, mudando a paisagem do tanque, incorporando uma variedade de presas e introduzindo tarefas desafiadoras para que eles trabalhem. Nossos resultados incluem ressonância magnética e uma imagem de autofluorescência de corpo inteiro, bem como estudos comportamentais para entender melhor seu sistema nervoso. Polvos possuem fisiologia única que pode impactar muitas áreas da pesquisa biomédica. Fornecer-lhes um ecossistema sustentável é o primeiro passo crucial para descobrir suas distintas capacidades.

Introdução

Novos conceitos em pesquisa biomédica e engenharia biomédica são frequentemente inspirados na identificação de estratégias específicas que as espécies biológicas possuem para enfrentar as condições e desafios ambientais e fisiológicos. Por exemplo, a compreensão das propriedades de fluorescência em vagalumes levou ao desenvolvimento de novos sensores fluorescentes que podem relatar a atividade celular em outros organismos modelo1; identificar canais de íons ativados pela luz em algas levou ao desenvolvimento de neuromodulação de luz específica celular e temporal2,3,4,5

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Protocolo

Todos os estudos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade Estadual de Michigan.

1. Configuração do equipamento do tanque de polvo

  1. Primeiro, obter todos os materiais não biológicos para um aquário que será incorporado ao sistema ambiental marinho, conforme mostrado na Tabela de Materiais. Os tamanhos são fornecidos em polegadas.
  2. Lave todas as peças do sistema de tubos, tubulações e filtros com 70% de etanol e água desionizada (DI) antes da instalação. Não use sabão ou outros produtos químicos durante a limpeza.
  3. Coloque uma mesa de ....

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Resultados

Todos os animais em nossos estudos foram obtidos da natureza, e assim sua idade exata não pôde ser determinada e sua permanência no laboratório foi variável. A condição do polvo era observada diariamente. Não vimos parasitas, bactérias, danos na pele ou comportamento anormal. O peso médio dos animais foi de 170,38 +/- 77,25 g. Cada animal habitava seu próprio tanque de 40 galões. O desvio padrão médio ± para os parâmetros registrados para um tanque ao longo de uma semana foram: pH 8,4 ± 0,0, salinidade 34,06 ± 0,61 ppt, .......

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Discussão

Configuração do sistema:
O ecossistema do aquário foi desenvolvido de forma que sejam empregados métodos mecânicos e biológicos de filtragem e oxigenação da água. Os elementos filtrantes do sistema utilizam filtros de meias, skimmers de proteínas e limpeza regular para manter os níveis de nitrogênio e oxigênio. Mais importante, também contamos com microrganismos marinhos para consumir os perigosos compostos nitrogenados e outros resíduos biológicos, bem como aerar a água através de processos de fotoss.......

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Divulgações

Todos os autores não declaram conflitos de interesse.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelo NIH UF1NS115817 (G.P.). O G.P. é parcialmente suportado pelas subvenções do NIH R01NS072171 e R01NS098231. Gostaríamos de agradecer a Patrick Zakrzewki e Mohammed Farhoud da Emit Imaging pela ajuda e suporte na coleta e visualização dos dados na Plataforma de Imagem Xerra. A MSU tem um acordo de pesquisa com a Bruker Biospin.

....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
1-3/4 pol. BrocaHome Depot204074205Ferramenta de corte de vidro
Número da peça:1
Sensores de fluxo de 1"Neptune SystemsLocal DealerPipe com sensor para medir o fluxo de água
Número da peça:2
Filtro de Anteparo de 1"Granel207113Filtro para tanque de saída de água
Número da peça:3
Tanque de 10 galõesPreussPets Revendedor LocalTanque de retenção de caranguejo violinista
Número da peça:4
Meia de Filtro de Malha de Monofiliment de Nylon de 4 polegadas X 12 polegadas 200 Micron com Anel de Plásticode UJ41171AQUAMAXXpara grande matéria orgânica no reservatório
Número da peça:5
Aquário de 40 galõesPreuss PetsLocal Dealer4 Tanques de aquário de alimentos
Número da peça:6
Tanques de poli de 60g - retânguloPreuss PetsLocal Dealer2 Armazenamento de água (água salgada e doce)
Número da peça:7
Active Aqua 1/10th HP Hydroponic ou Aquarium Chiller 2018 ModelWayWe719574198463Para resfriar água continuamente
Número da peça:8
ALAZCO 2 Escova de Rejunte de Azulejo PesadoALAZCOB06W2FT5V5 Limpeza doTanque
Número da peça:9
Kit de Teste de AmôniaAquarium Pharmaceuticals33DPara teste de água
Número da peça:10
Sistema Apex WiFiSistemas Neptunede revendedor localpara monitoramento externo
Número da peça:11
Kit de teste de aquário APIAmazonB001EUE808Para teste de água
Número da peça:12
Kit de teste de cobre APIAmazonB0006JDWH8Para teste de água
Número da peça:13
Unidades da Série Aqua Ultraviolet Classic UV 25 Watt AquaUltravioletA00028Para remover bactérias que saem do sistema de reservatório
Número da peça:14
Insertos de Filtro de Espuma AquaClear 50, pacote de 3AquaclearA1394
Número da peça:15
Filtro de Energia para Aquário Aqueon QuietFlow LED PRO 30Unidades de filtragem de tanque de alimentos Aqueon 100106082
Número da peça:16
Kit de Recarga Automática (ATK) (Cada um inclui 1 módulo FMM, 2 sensores ópticos e 1 flutuador)NeptuneSystems Local DealerPara tanque de água doce
Número da peça:17
Recarga automática da RODI (LLC)NeptuneSystems Local DealerDe armazenamento de água para tanques de polvo
Número da peça:18
Trochus SnailLiveAquariaCN-112080Para algas bin
Número da peça:19
Algas Chaetomorpha, AquacultivadasLiveAquariaBVJ-76354Para algas bin
Número da peça:20
Amêijoas - Vivas, Casca Dura, Cereja, Selvagem, EUA Dúziade Fulton Fish MarketN/AComida viva
Número da peça:21
Mistura Clássica de Sal Marinho - Tropic MarinBulk Reef Supply211813Sal para água do tanque
Número da peça:22
Tubo de Plástico PVC Macio Masterkleer Transparente, para Ar e Água, 3/4" ID,  1" ODMcMaster5233K71Ferramenta de limpeza
Número da peça:23
Continuum Aquablade-P Raspador de Algas Seguro em Acrílico com Lâmina de Plástico - 15 PolegadasMarine Depot4C31001Ferramenta de limpeza
Número da peça:24
Kit de Teste de CobreAquarium Pharmaceuticals65LPara teste de água
Número da peça:25
Curve Refugium CREE LED Aquarium LightEshopps6500KAlgae bin light
Número da peça:26
Bombas de retorno Eheim 1262BombaEHEIM 1250219para tanques de armazenamento
Número da peça:27
Eshopps R-100 Refugium Sump GEN 3Eshopps15000Sistema de reservatório
Número da peça:28
Álcool etílico, 200 ProvaSigma-Aldrich64-17-5Anestesia
Número da peça:29
Extech DO600 ExStik II Medidor de Oxigênio Dissolvido ExtechDO600Medição de oxigênio
Número da peça:30
Caranguejos Fiddler; vivo; dúziaCAMARÃO SALMOURA NORDESTEN/AComida viva
Número da peça:31
Cartuchos de FiltroFiltros de tanque Aqueon100106087Food
Número da peça:32
Areia Seca de Coral Triturado da Flórida - CaribSeaBulk Reef Supply212959Sedimento para fundo do tanque
Número da peça:33
Módulo FMMrevendedor localNeptune Systemspara sistema apex
Número da peça:34
Fritz-Zyme TurboStart 900 - FritzBulk Reef Supply213036Bactérias start
Número da peça:35
Bomba de tambor operada manualmente, sifão, bomba básica com bico, para balde tipo recipiente, BaldeGrainger38Y789Bomba Manual de Água
Número da peça:36
Kit de Teste de pH AltoAquarium Pharmaceuticals27Para teste de água
Número da peça:37
Rede de Malha Fina Imagitarium para CamarãoPetco2580993Rede de transferência de camarão e peixe
Número da peça:38
Kit de Detecção de Vazamento (LDK) - Inclui módulo FMM mais 2 sensores ALDSistemasNeptuneRevendedor LocalColocado no chão para detectar água
Número da peça:39
Almofada de Limpeza de Algas Lee'S Jumbo - GlassMarine DepotLE12007Ferramenta de Limpeza
Número da peça:40
Pedras vivasPreuss PetsHabitat do Revendedor Localpara polvo
Número da peça:41
Escova de Limpeza de Garrafas Longas 17" Extra LongHaomaomaoB07FS7J7PN Limpeza doTanque
Parte número:42
Cloretode magnésio Sigma-AldrichM1028-100MLEutanásia
Número da peça:43
Suporte de Sonda MagnéticaNeptune SystemsRevendedor LocalPara segurar sondas de sensor de ápice
Número da peça:44
Camarão Fantasma MarinhoCAMARÃO SALMOURA NORDESTEN/AComida viva
Número da peça:45
Meios de Filtro de Sacos de Carbono Marineland C-Series Canister, 2 contagemChewy98331Para níveis elevados de cobre
Número da peça:46
Saco Nitra-ZorbAquarium PharmaceuticalsAP2213Absorve compostos de nitrogênio
Número da peça:47
Kit de Teste de NitratoAquarium PharmaceuticalsLR1800Para teste de água
Número da peça:48
Kit de Teste de NitritoAquarium Pharmaceuticals26Para testes de água
Número da peça:49
Cilindro de Pedras de Ar Pawfly de 2 Polegadas 6 PCS Difusor de Bolha Airstones para Bomba de Aquário de Tanque de Peixes ÁguaAeradada Amazon B076S56XWX Azul
Número da peça:50
Tubulação de Linha Aérea Penn Plax para Aquários - ndash; Transparente e Flexível Resiste a Dobras, 8 Pés Tubulação Amazon B0002563MM padrãopara conectar a bomba de ar à pedra de ar
Número da peça:51
Encanamento com uniões/válvulas mais mangueira flexível de 3/4"Preuss PetsRevendedor LocalTransporte de água
Número da peça:52
Módulo PM1Neptune SystemsRevendedor LocalMódulo de controle de energia para apex
Número da peça:53
Proteína skimmerReef OctopusAC20284Remove resíduos biológicos do sistema
Número da peça:54
PVC Placa de montagem Apex, ilhós, montagens de fioNeptune SystemsLocal DealerAjuda a garantir a organização dos fios e tubulações dentro do sistema
Número da peça:55
PVC Regular Cement e 4-Ounce NSF Purple PrimerAmazonOatey - 30246Para conectar tubos de PVC
Número da peça:56
Unidade RODINeptuneSystems Revendedor LocalRO Water
Número da peça:57
Sondas de SalinidadeHANNAHI98319Mede a salinidade da água
Número da peça:58
Seachem Pristine Aquarium TreatmentSeachem1438Fornece bactérias que decompõem o excesso de comida, resíduos e detritos
Número da peça:59
Estabilizadorde Aquário Seachem StabilitySeachem116012607Seachem Stability estabelecerá rapidamente e com segurança o biofiltro de aquário em sistemas de água doce e marinhos
Número da peça:60
Conjunto de tampas lexanPreuss PetsRevendedor LocalTampas de tanque de aquário
Número da peça:61
Conjunto de vários cabos de aquabus de comprimento estendidoNeptune SystemsCabos de revendedor localpara sistema Apex
Número da peça:62
Raspador de Algas de Aquário SLSON Escova de Esponja de Dupla Face Limpa Alça Longa Purificador de Tanque de Peixes para Aquários de VidroAmazonB07DC2TZCJFerramenta de limpeza
Número da peça:63
Encaixe de Tubo de PVC de Parede Padrão para Água, Adaptador de Cotovelo de 45 Graus, Soquete 3/4 Fêmea x 3/4 Soquete MachoMcMaster4880K189
Número da peça:64
Parede Padrão  Encaixe de Tubo de PVC para Água, 90 Graus  Cotovelo  Adaptador,  1 Soquete Fêmea x 1 Soquete MachoMcMaster4880K773Tubo de PVC
Número da peça:65
Padrão-Parede  Encaixe de Tubo de PVC para Água, Adaptador,  1  Soquete-Connect  Fêmea x 1 Macho Barbed McMaster4880K415Tubo de PVC
Número da peça:66
Standard-Wall  Encaixe de Tubo de PVC para Água, Reto  Redutor,  2 Soquetes Fêmea x  3/4  Soquete FêmeaMcMaster4880K008Tubo de PVC
Número da peça:67
Padrão-Parede  Conector de Tubo PVC para Água, Conector Tee,  Branco,  1 Tamanho  Soquete-Connect  Tubo deFêmea McMaster4880K43
Número da peça:68
Standard-Wall  Tubo de PVC Rígido Não Rosqueado para Água, 1 Tamanho de Tubo, 10 Pés de ComprimentoTubo de PVC McMaster48925K13
Número da peça:69
Tubo de PVC Rígido Não Rosqueado de Parede Padrão para Água, Tamanho de Tubo de 3/4, 5 Pés de ComprimentoTubo de PVC McMaster48925K92
Número da peça:70
Folha de Fibra de Vidro FRP Estrutural, 48" de Largura x 96" de Comprimento, 1/2" de espessuraMcMaster8537K15Material do tampo da mesa
Número da peça:71
Tubo quadrado de fibra de vidro FRP estrutural, 10 pés de comprimento, 2" de largura x 2" de altura externa, espessura da parede de 1/8"McMaster8548K33Material da mesa estrutural
Número da peça:72
Sedimentodo tanque TopDawg Pet Supply8479001207Sedimento para fundo do tanque de caranguejo violinista
Número da peça:73
Sonda de temperaturaNeptune SystemsLocal DealerSonda de temperatura para tanques
Número da peça:74
Tetra TetraMarine Grandes Flocos de água salgada para todos os peixes marinhosAmazon B00025K0USComida para peixes, camarões e caranguejos
Número da peça:75
Bomba de ar para aquários Tetra Whisper para aquários de 10 galõesPetco2335234Bomba de ar para tanques menores
Número da peça:76
Encaixe de Tubo de Parede Grossa, para Água, Conector de PVC, 1 Soquete FêmeaMcMaster36895K843Tubo de PVC
Número da peça:77
Bomba Vectra s2Bomba de Abastecimento de Recife a Granel212141Bomba de Aquário
Número da peça:78
Bomba de ÁguaTACKLIFEGHWP1ABomba para limpeza de tanques
Número da peça:79
Câmera Inteligente Wi-Fi Interna Wyze Cam v2 1080p HD com Visão noturnaAmazonB076H3SRXGDeepLabCut Recording
Número da peça:80
Filtro de Fornecimento de Recife a Filtro Conexão do sistema Insertos de Filtro de Carbono para Tanque de Alimentos Controlador de da Tubo de PVC PVC

Referências

  1. Wet, J. R., Wood, K. V., DeLuca, M., Helinski, D. R., Subramani, S. Firefly luciferase gene: structure and expression in mammalian cells. Molecular and Cellular Biology. 7 (2), 725-737 (1987).
  2. Han, X., Boyden, E. S.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Pesquisa BiomédicaMontagem de AquárioCuidados com CefalópodesMonitoramento da Qualidade da ÁguaEstudos ComportamentaisImagem por RMTomografia de CriofluorescênciaAnálise do Sistema NervosoRastreamento por Aprendizado de Máquina