Artigo de método

Desenvolvimento de uma tira imunocromatográfica de fluxo lateral para detecção rápida e quantitativa de compostos de pequenas moléculas

DOI:

10.3791/62754

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13 de novembro de 2021

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1School of Life Science, Beijing University of Chinese Medicine, 2Third Affiliated Hospital, Beijing University of Chinese Medicine, 3National Institute of TCM Constitution and Preventive Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, 4Center of Scientific Experiment, Beijing University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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As tiras imunocromatográficas de fluxo lateral baseadas em membrana (ICSs) são ferramentas úteis para o autodiagnóstico de baixo custo e têm sido aplicadas eficientemente à toxina, ao índice fisiológico e à detecção de biomarcadores clínicos. Neste protocolo, fornecemos uma descrição detalhada das etapas para desenvolver um imunoensaio de fluxo lateral rápido, sensível e quantitativo (usando AuNPs como marcador e mAbs como uma sonda). O procedimento descreve a preparação e caracterização do ouro coloidal, síntese do conjugado AuNP-mAb, montagem da tira imunocromatográfica e investigação metodológica do ensaio. Os resultados mostraram que as tiras finais podem ser ainda mais utilizadas para o rápido e conveniente autodiagnóstico de uma pequena molécula, o que pode fornecer uma ferramenta alternativa na análise rápida e precisa dos índices fisiológicos e biológicos.

Introdução

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As tiras imunocromatográficas de fluxo lateral baseadas em membrana (ICSs) são ferramentas úteis para detecção rápida e de baixo custo. A membrana de nitrocelulose como o portador e o ouro coloidal como marcadores de reagentes de diagnóstico rápido de cromatografia imune são o método POCT (teste de ponto de cuidado) mais usado, e o escopo de teste do projeto é mais amplo. A partir de sua aplicação original no monitoramento durante a gravidez, seu uso foi estendido para monitorar o estado de coagulação sanguínea1,2, lesão do miocárdio3, medicina veterinária4, resí....

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Protocolo

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Todos os procedimentos realizados neste estudo foram aprovados pelo Comitê de Revisão ética da Universidade de Medicina Chinesa de Pequim (número de aprovação 2017BZYYL00120).

1. Preparação e Caracterização do Ouro Coloidal

NOTA: Para a síntese de ouro coloidal, como o ouro coloidal é facilmente adsorvido na parede interna do vaso e é propenso à precipitação por impurezas, o recipiente para síntese e armazenamento de ouro coloidal deve ser completamente limpo e encharcado em ácido (40 mL de água destilada, 360 mL de ácido sulfúrico concentrado, 20 g de dícroma de potássio) ou submetido ao tratament....

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Resultados

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Caracterização do ouro coloidal
As soluções de ouro coloidal preparadas eram vermelho claret. Foram utilizadas análises tem para determinar a morfologia e a forma de AuNPs (Figura 2A-D). A Figura 2A e a Figura 2B revelam que as partículas são poliédricas em forma e uniformemente distribuídas. O diâmetro médio dos AuNPs foi encontrado em aproximadamente 14 nm (Figura 2C

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Discussão

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Neste trabalho, apresentamos um protocolo para a preparação de mAbs contra pequenas moléculas derivadas de produtos naturais. As etapas essenciais e as questões que necessitam de atenção no procedimento foram delineadas, e demonstramos a utilidade deste protocolo usando como exemplo a pequena molécula SSD. Exemplos de espectros, imagens TEM, resultados quantitativos e investigações metodológicas são mostrados em dados representativos. Assim, demonstramos que a produção de ouro coloidal, a conjugação AuNP-mAb e a estratég.......

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Divulgações

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Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

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Este trabalho foi apoiado pelos Fundos Especiais de Fundos De Pesquisa Fundamental de instituições de ensino superior filiadas aos departamentos centrais. Agradecemos o apoio da Equipe de Pesquisa Básica de Prescrição Clássica da Universidade de Medicina Chinesa de Pequim.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Solução de ácido cloroáurico (HAuCl4)Fábrica de reagentes químicos Tianjin Fu ChenJY-SJ102
albumina de soro bovinoAMRESCO332
tubo de centrífuga 15 mLCorning430645
tubo de centrífuga 50 mLCorning430828
placas ELISA, 96 poçosNUNC655101
Papel de filtroSinopharmH5072
Membranas de fibra de vidroJieyiXQ-Y6
cabra-anti-rato IgG anticorpoapplygenC1308
Membranas de nitroceluloseMilliporemillipore 180
ovalbuminaPequim BIODEE5008-25g
PEG20000Sigma Aldrich
Pipeta 10mLCOSTAR4488
Pipeta 25mLFALCON357525
folhas de PVC semi-rígidasJieyiJY-C104
Citrato de sódioBeijing Chemical WorksC1034
periodato de sódioSinopharm ChemicalBW-G0008
Sulfo-GMBSPerbio Science Alemanha22324
Pontas TipOne 1,000 µ LStarlabS1111-2021
Tris-HClSolarbio77-86-1
TWEEN 20Solarbio9005-64-5
RNBC6325

Referências

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  1. Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
  2. Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P.

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Reimpressões e permissões

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Etiquetas

Fita de Fluxo LateralOuro ColoidalNanopart culas de OuroDetec o de Pequenas Mol culasImunoensaio QuantitativoConjugado de AnticorpoLeitor de Fita Port tilMicroscopia Eletr nica de Transmiss oLinha de Teste Linha de Controle

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