Isolamento e Cultura das Células Epiteliais Gengivais Humanas Primárias usando Y-27632

Zhiwei Xie; Jizhou Shi; Min Zong; Qiuping Xu; Chang Liu; Jie Wen; Qun Zhang; Panpan Liu; Guanyi Liu; Jing Guo; Xunwei Wu

doi:10.3791/62978

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Isolamento e Cultura das Células Epiteliais Gengivais Humanas Primárias usando Y-27632

5.1K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/62978

⸱

6 de novembro de 2021

Zhiwei Xie¹^,²^,³ , Jizhou Shi⁴ , Min Zong³ , Qiuping Xu¹ , Chang Liu¹ , Jie Wen¹ , Qun Zhang¹ , Panpan Liu¹ , Guanyi Liu¹ , Jing Guo²^,⁵ , Xunwei Wu¹

¹Department of Tissue Engineering and Regeneration, School and Hospital of Stomatology, Cheeloo College of Medicine, Shandong University & Shandong Key Laboratory of Oral Tissue Regeneration & Shandong Engineering Laboratory for Dental Materials and Oral Tissue Regeneration, ²Department of Orthodontics, School and Hospital of Stomatology, Cheeloo College of Medicine, Shandong University & Shandong Key Laboratory of Oral Tissue Regeneration & Shandong Engineering Laboratory for Dental Materials and Oral Tissue Regeneration, ³Department of Stomatology, Shengli Oilfield Central Hospital, ⁴Department of Pediatric Surgery, Shengli Oilfield Central Hospital, ⁵Ningbo Stomatology Hospital of Savaid Stomatology School, Hangzhou Medical College

Neste artigo

Resumo

Aqui apresentamos um método modificado para o isolamento e cultura das células epiteliais gengival humanas adicionando o inibidor de Rocha, Y-27632, ao método tradicional. Este método é mais fácil, menos demorado, melhora as propriedades das células-tronco e produz um número maior de células epiteliais de alto potencial, tanto para o laboratório quanto para aplicações clínicas.

Resumo

O tecido gengival é a primeira estrutura que protege os tecidos periodontais e desempenha papéis significativos em muitas funções orais. O epitélio gengival é uma importante estrutura de tecido gengival, especialmente na reparação e regeneração do tecido periodontal. Estudar as funções das células epiteliais gengival tem valor científico crucial, como reparar defeitos orais e detectar a compatibilidade de biomateriais. Como as células epiteliais gengivais humanas são células queratinizadas altamente diferenciadas, sua vida útil é curta, e são difíceis de passar. Até agora, há apenas duas maneiras de isolar e cultivar células epiteliais gengivas, um método de explante direta e um método enzimático. No entanto, o tempo necessário para obter células epiteliais usando o método de explanta direta é maior, e a taxa de sobrevivência celular do método enzimático é menor. Clinicamente, a aquisição de tecido gengival é limitada, por isso é necessário um sistema de isolamento e cultura in vitro estável, eficiente e simples. Melhoramos o método enzimático tradicional adicionando Y-27632, um inibidor de quinase associado a Rho (ROCK), que pode promover seletivamente o crescimento de células epiteliais. Nosso método enzimático modificado simplifica os passos do método enzimático tradicional e aumenta a eficiência da cultura de células epiteliais, que tem vantagens significativas sobre o método de explante direta e o método enzimático.

Introdução

A gingiva humana, a estrutura de defesa de primeira linha que protege o tecido periodontal, não é apenas uma barreira física e química^1,mas também secreta diferentes classes de mediadores inflamatórios que participam de respostas imunes e constituem uma barreira imune²^,³. O epitélio gengival desempenha um papel importante na reparação e regeneração do tecido periodontal. Portanto, estudar a defesa e imunidade do epitélio gengival é de grande importância para a compreensão da ocorrência, diagnóstico e tratamento da periodontite. O isolamento e a cultura das células epiteliais gengival do....