Avaliação da Produção de Glicose Hepática em um Modelo de Rato da Síndrome do Ovário Policístico

Resumo

Este estudo descreve a medição direta da produção de glicose hepática em um modelo de rato com síndrome do ovário policístico usando um rastreador de glicose isotópico estável via veia da cauda em estados ricos em jejum e glicose em conjunto.

Resumo

A síndrome do ovário policístico (SPC) é uma doença comum que resulta em distúrbios do metabolismo da glicose, como resistência à insulina e intolerância à glicose. O metabolismo de glicose disregulado é uma manifestação importante da doença e é a chave para sua patogênese. Portanto, estudos envolvendo avaliação do metabolismo da glicose no PCOS são de extrema importância. Pouquíssimos estudos quantificaram a produção de glicose hepática diretamente nos modelos PCOS usando rastreadores de glicose não radioativos. Neste estudo, discutimos instruções passo a passo para a quantificação da taxa de produção de glicose hepática em um modelo de camundongo PCOS medindo o enriquecimento M+2 da glicose de [6,6-2H2], um rastreador de glicose isotópico estável, via cromatografia a gás - espectrometria de massa (GCMS). Este procedimento envolve a criação de uma solução estável de rastreador de glicose isotópica, o uso da colocação do cateter da veia da cauda e a infusão do rastreador de glicose em estados ricos em jejum e glicose no mesmo camundongo em conjunto. O enriquecimento da glicose [_6,6-2H2]é medido utilizando-se derivado de pentaacetato em GCMS. Esta técnica pode ser aplicada a uma grande variedade de estudos envolvendo a medição direta da taxa de produção de glicose hepática.

Introdução

A síndrome do ovário policístico (SPC) é uma doença comum que ocorre em 12%-20% das mulheres em idade ^{reprodutiva1,2}. É uma doença complexa que resulta em fenótipos variáveis envolvendo ovários policísticos, menstruações irregulares e evidências clínicas ou laboratoriais de hiperandrogenemia, e é tipicamente diagnosticada quando uma mulher atende a dois dos três ^critérios3. Um aspecto predominante do SPC, e um fator-chave em sua patogênese, são os desarranjos metabólicos que são encontrados em mulheres que têm a doença. Mulheres com SPC têm maiores incidências de resistência à insulina,....

Protocolo

Todos os procedimentos animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Faculdade de Medicina baylor.

1. Preparação de [6,6-2H2]glicose

1. Um dia antes do procedimento, prepare o rastreador de glicose isótopo estável em soro fisiológico normal. Para este experimento, a glicose [_6,6-2H2] foi usada como rastreador para medir a taxa de aparência da glicose plasmática.
   NOTA: Neste experimento, a produção de glicose durante o jejum e as condições ricas em glicose foram medidas, de modo que o isótopo de glicose foi preparado em duas pre....

Resultados

Utilizando equações de diluição de isótopos descritas anteriormente, a taxa total de glicose plasmática (_glucoseRa) foi calculada a partir do enriquecimento M+2 de [6,6-2H2]glicose em condições de jejum e glicose rica usando o derivado pentaacetato21. Em condições de estado estável, presume-se que a taxa de aparecimento de glicose seja igual à taxa de desaparecimento da glicose. No grupo controle, a glicose _{total foi de} 19,98 ± 2,53 mg/(kg·min) após jeju.......

Discussão

Hiperglicemia e metabolismo de glicose anormal/homeostase são características do PCOS. O nível de glicose no sangue é mantido por uma combinação de glicose da dieta e produção de glicose através da glicogenólise e da gliconeogênese e glicogênese, sob o controle de hormônios e enzimas. A produção de glicose hepática é suprimida pela presença de aumento dos níveis de glicose circulante. Em desordens do metabolismo anormal da glicose, a regulação da supressão da produção de glicose está comprometida levando à hiper.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução de cloreto de sódio a 0,9%	McKesson	275595
10 mL BD Luer-Lok seringa de ponta	VWR	75846-756	Duas seringas por animal (uma para solução isotópica de glicose, uma para solução isotópica rica em glicose)
Fita transpore transparente de 1 polegada	3M	70200400169
1 polegada Fita de rotulagem	Fisher	GS07F161BA	A marca é exemplo
Seringa de 5 mL contendo lavagem salina heparanizada	McKesson	191-MIH-2235 Pode-se	também preparar uma solução de lavagem de heparina (10 unidades/mL de heparina em cloreto de sódio a 0,9%)
Lancetas animais Medipoint Goldenrod de 5 mm	Fisher Scientific	NC9891620	5 mm se o animal tiver entre 2 e 6 meses
Acetona	Sigma-Aldrich	650501
Agitador de placa quente avançado	VWR	97042-602	A marca é exemplo
BD 27 gauge 0.5 polegadas agulhas	Health Warehouse	A283952
BD 30 gauge 0.5 polegadas agulhas	Medvet	305106
BD Intramedic Polyethylene (PE) tubing 0.28 mm ID x 0.61 mm	VWR	63019-004
BD Intramedic Polyethylene (PE) tubing 0.28 mm ID x 0.61 mm	VWR	63019-004
Beaker, 1000 mL			Qualquer marca
Pellets
Frascos de vidro VOA transparentes com tampa fechada	Fisher Scientific	05-719-120	Para armazenamento de amostras de acetona e coleta de sangue
Braçadeira de jacaré desdentada de cobre para torniquete	Amazon		Qualquer marca; clipes de jacaré desdentados lisos feitos de cobre sólido
D-(+)-glicose >99,5%	Sigma-Aldrich	G8270
D-glicose (6,6-D2, 99%)	Cambridge Isotope Laboratories, Inc.	DLM-349-PK
Dow Corning tubo de silicone 0,3 mm ID x 0,64 mm OD	VWR	62999-042
Lupa	Amazon		Qualquer marca; semelhante a LANCOSC Lupa com Luz e Suporte
Microbalança	Ohaus Adventurer Pro	AV264C	Qualquer modelo semelhante com precisão de 0,0001g pode ser usado
Garrafa Nalgene, 500 mL	Sigma-Aldrich	B0158-12EA	Ou qualquer marca similar; serra ao meio (incluindo tampa) e corte o entalhe do tamanho da cauda na parte inferior
PHD Ultra bomba multi-seringa	Harvard Apparatus	70-3024A
		plexiglass	Qualquer marca; para estabilizar o mouse durante a inserção do cateter
Folhas e divisores			Qualquer marca; usado para enjaular camundongos durante a infusão

de gaiolaFolha de de plexiglass