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Developmental Biology

Em Ovo Alimentação de ovos de frango comercial: um método preciso e reprodutível para afetar o desenvolvimento e o crescimento muscular

Published: September 20, 2021 doi: 10.3791/63006
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Department of Animal and Dairy Sciences, University of Georgia

Summary

Uma metodologia robusta foi desenvolvida para a realização de ensaios de pesquisa de alimentação ovo utilizando ovos de frango de corte comerciais não insusípidos para testar a capacidade de compostos naturais e sintéticos, neste caso, nicotinamida riboside, para influenciar o desenvolvimento e o crescimento muscular.

Abstract

Nas últimas três décadas, cientistas de carne vermelha e aves se concentraram no desenvolvimento de estratégias e tecnologias para manipular o desenvolvimento muscular durante o desenvolvimento embrionário e fetal. Esta área continua sendo uma área de foco porque o número de fibra muscular é estabelecido durante este tempo e determina a base para todo o crescimento futuro. Nas aves de capoeira, inúmeros estudos demonstraram na alimentação ovo de fatores de crescimento, vitaminas ou outros nutrientes melhorou o desenvolvimento do músculo embrionário e intestinal do filhote. Melhorar o desenvolvimento muscular de ovo poderia beneficiar a indústria avícola, possivelmente influenciando o rendimento da carne, a taxa de crescimento ou as condições de miopatia. Durante os últimos cinco anos, o Laboratório Gonzalez da Universidade da Geórgia desenvolveu um riboside de nicotinamida na metodologia de alimentação ovo para embriões de frango de corte, que alteraram o desenvolvimento muscular. Quando injetado no saco de gema de um embrião em desenvolvimento, a nicotinamida riboside aumentou o peso muscular e a densidade de fibra muscular na escotilha. Este protocolo demonstrará uma metodologia para conduzir com precisão e reprodução em estudos de alimentação ovo utilizando embriões comerciais padrão e de alto rendimento. Esses dados e métodos permitirão que outros grupos de pesquisa realizem estudos de alimentação com muito sucesso e reprodutibilidade.

Introduction

Desde 1960, o consumo per capita de carne de aves dos Estados Unidos aumentou a uma taxa surpreendente, enquanto outras fontes primárias de proteína permaneceram estagnadas, declinadas ou minimamente aumentadas. A indústria avícola investiu tempo considerável e esforços de pesquisa otimizando nutrição e genética para produzir uma ave eficiente para acompanhar a demanda. Como o principal objetivo da indústria avícola é produzir músculos para conversão à carne, seus esforços mudaram drasticamente a massa muscular final da ave na colheita.

Como a maioria das espécies, as aves desenvolvem músculos de forma bifásica. A miogênese primária utiliza células-tronco mesenquimais para produzir fibras musculares primárias, que servem como andaime para a segunda onda de desenvolvimento de fibras musculares1. Nas aves, a miogênese primária ocorre durante os dias embrionários de 3 a 8 dias, e a miogênese secundária acontece dos dias 8 a212. Uma vez desenvolvidas, as fibras musculares primárias e secundárias servem de base para todo o crescimento muscular futuro através da hipertrofia celular. Portanto, cientistas e indústria gastaram um esforço considerável tentando manipular a miogênese primária e secundária em todas as espécies produtoras de carne para maximizar o rendimento da carne.

Uma tecnologia explorada em aves de capoeira, chamada de alimentação ovo, envolve alimentar compostos através da injeção. Na alimentação ovo, uma tecnologia empregada pela indústria avícola por quase 40 anos, foi inicialmente desenvolvida para a administração devacinas 3. A literatura documenta que na alimentação de vários compostos e nutrientes em diferentes períodos de desenvolvimento e locais dentro do ovo afetou positivamente no desenvolvimento muscular ovo e crescimento 4,5,6. Até o momento, o Laboratório Gonzalez da Universidade da Geórgia é pioneiro na utilização da nicotinamida riboside na alimentação de ovo para manipular o desenvolvimento muscular avícola.

Nicotinamida riboside, um análogo piridina-nucleosídeo de vitamina B3, produz NAD+ através da viade salvamento 7. Como essa via utiliza menos passos enzimáticos para produzir NAD+, a produção é a8 mais eficiente. Gonzalez e Jackson9 demonstraram que a suplementação do desenvolvimento de gema de embrião de frango com nicotinamida riboside aumentou o peso muscular e a densidade da fibra muscular. Isso foi mais tarde confirmado por Xu et al.10, que descobriram que o aumento da dose de nicotinamida riboside aumentou o peso muscular e aumentou a densidade de fibra muscular. Estes dois primeiros estudos foram realizados em um frango de corte de rendimento comercial. Como os frangos de alto rendimento possuem um potencial genético mais significativo para o tamanho final da massa muscular, o objetivo do estudo foi determinar os efeitos da dose riboside nicotinamida no frango de alta produtividade eclodido peitoral

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Protocol

Todas as metodologias foram aprovadas pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade da Geórgia.

1. Administração de incubação e tratamento de ovos

  1. Aquisição de ovos e atribuição de tratamento
    1. Obtenha ovos de frango de corte de alto rendimento não insincubados e fertilizados e transporte-os para o laboratório.
    2. Inspecione e descarte ovos considerados de má qualidade.
      NOTA: Elimine os ovos defeituosos (redondos, alongados, de lado para a laje), rachados, sujos/manchados, de casca fina e enrugados. Isso é importante para minimizar o risco de ovos podres.
    3. Atribua números individuais de ovos, pese e regise números e pesos de ovos em um programa de software de planilha.
    4. Utilize o programa de software de planilha para classificar ovos em peso.
      1. Destaque o número do ovo e as colunas de peso do ovo .
      2. Selecione a guia Dados e, em seguida, Classifique dados por peso de ovo de menor para maior.
        NOTA: Para a melhor taxa de eclosão, use ovos pesando entre 40 e 70 g.
      3. Com base no desenho do experimento, atribua aos ovos (numericamente ou alfabeticamente) um tratamento de injeção e dia de eutanásia. Digite o número do tratamento e o dia da eutanásia em colunas separadas e atribua aleatoriamente esses fatores dentro de cada estrato.
        NOTA: Para esta publicação, os tratamentos foram atribuídos aleatoriamente dentro de cada estratos de 8 óvulos.
    5. Gere uma Tabela Dinâmica dentro do programa de software de planilha para garantir que cada tratamento possua pesos de ovos iniciais semelhantes.
      1. Destaque todos os dados dentro da planilha a serem analisados.
      2. Selecione a opção Tabela Dinâmica na guia Inserir .
      3. Selecione a variável independente (coluna Dia da Eutanásia ) dentro da subcesse de Campos de Tabela Dinâmica e arraste para o campo Rows .
      4. Selecione a variável independente (coluna tratamento ) dentro da sub-janela B e arraste para o campo Rows , sob o Dia da Eutanásia.
      5. Selecione a variável dependente de interesse (Peso do Ovo) e arraste-a para o campo Valores .
      6. Alterar as configurações do campo de valor clicando na variável dependente e selecionando Configurações de campo de valor.
        1. Altere a configuração para Média.
  2. Atribuição de bandeja
    1. No programa de software de planilha, atribua ovos a uma bandeja (numericamente ou alfabeticamente), de modo que os tratamentos são igualmente representados dentro de uma bandeja.
      1. Atribua os primeiros quatro ovos com tratamentos atribuídos à bandeja 1. Atribua os próximos quatro ovos à bandeja 2 e continue até que todos os ovos sejam atribuídos a uma bandeja.
        NOTA: Esta etapa variará dependendo do número de incubadoras e bandejas utilizadas no experimento.
  3. Certifique-se de que todos os tratamentos estejam igualmente representados em uma bandeja usando a função Deteira.
    1. Destaque todos os dados dentro da planilha a serem analisados.
    2. Selecione a opção Tabela dinâmica na guia Inserir .
    3. Selecione a variável independente (coluna Bandeja ) na sub-janela PivotTable Fields e arraste para o campo Linhas .
    4. Selecione a variável dependente de interesse (Peso do Ovo) e arraste-a para o campo Valores .
    5. Alterar as configurações do campo de valor clicando na variável dependente e selecionando Configurações de campo de valor.
      1. Altere a configuração para Contagem.
  4. Incubação
    1. Coloque os ovos na bandeja de incubação apropriada e pré-incuba-os a 26,6 °C com 40% ± umidade relativa de 4% por 6h.
      NOTA: Algumas incubadoras possuem sistemas de automonitoramento que podem não ser inteiramente precisos. Use outros dispositivos de monitoramento de temperatura e umidade para controlar as condições.
    2. Aumente a temperatura da incubadora para 37 °C com 40% ± umidade relativa de 4% e mantenha essas condições até o dia da incubação 18.
      1. Para garantir a temperatura adequada da incubadora, meça as temperaturas da superfície de vários ovos em toda a incubadora duas vezes por dia com um termômetro de superfície térmica para garantir que as temperaturas da superfície sejam de 37 °C.
    3. Gire ovos de hora em hora para reposicionar.
    4. Recorde de pesos de ovos diariamente para garantir a perda de peso de 10%-12,5% dos ovos durante os primeiros 18,5 dias de incubação.
      NOTA: Se a perda de peso não estiver dentro da faixa desejada, ajuste (aumente ou diminua) a umidade.
  5. Incubação dia 10 em injeções de ovo
    1. Calcule a quantidade de nicotinamida riboside necessária para cada tratamento usando o peso da fórmula de 290,07 g/mol, com 100 μL de solução injetada no saco de gema de cada ovo.
      NOTA: A solução de solução salina estéril (0,9%) será utilizada como diluente para todas as soluções.
      Cálculo: 50 ovos × 100 μL = 5.000 μL (5 mL) da solução necessária. Arredondar até 6 mL para garantir que a solução suficiente esteja disponível para injeção (Figura 1).
      1. Uma vez que as soluções sejam feitas, coloque-as em um banho de água de 37 °C para mantê-las à temperatura dos ovos.
    2. Retire os ovos da bandeja de uma bandeja de cada vez e cubra com uma toalha quente.
    3. Ovo de vela para localizar o saco de gema e limpar a área de injeção com 70% de etanol.
    4. Insira uma agulha hipodérmica estéril de 20 G, 2,54 cm ~1 cm na casca de ovo e injete a dose atribuída no saco de gema. Injete os ovos do tratamento riboside de nicotinamida de 0 mM com 100 μL de soro fisiológico estéril (0,9%).
    5. Imediatamente, cubra o local da injeção com um pequeno pedaço de fita impermeável absoluta para evitar perda excessiva de umidade.
    6. Uma vez que todos os ovos tenham recebido seu tratamento, coloque a bandeja de volta na incubadora.
    7. No dia 18 de incubação, retire os ovos das bandejas e coloque-os em caixas de eclosão de acordo com seus tratamentos.
    8. Coloque caixas de eclosão na incubadora e aumente a umidade para 60 ± 2% até que todos os ovos eclodam ou até o dia 23 de incubação.
      NOTA: Se os ovos não contiveram um embrião em candling, descarte o ovo. Isso evitará a ocorrência de ovos podres.

2. Eutanásia e coleta de amostras musculares principais

  1. Eutanásia de pintinho
    1. No dia da incubação, dia 18, remova os ovos embrionários da incubadora e coloque-os em temperatura ambiente por 1h para cessar o metabolismo. Remova os embriões dos ovos, pese sem o saco de gema e, em seguida, decapite. 12 h pós-eclosão, eutanize os filhotes por exposição ao CO2 por 10 minutos, pese, colete rapidamente a medição do comprimento da coroa à garupa e, em seguida, decapitar.
      NOTA: O fato de o pássaro não ter mais a cabeça garante a eutanásia.
    2. Considere as seguintes medidas (etapas 2.1.2.1-2.1.2.4) utilizando pinças digitais para embriões e filhotes.
      1. Para determinar o comprimento da coroa para a garupa, coloque o filhote de lado com a cabeça abaixada e as pernas sob seu corpo. Meça desde a parte superior da cabeça até a cauda.
      2. Para medir a largura da cabeça, meça de um orifício de ouvido para o outro orifício da orelha.
      3. Para determinar o comprimento da cabeça, meça desde a parte de trás do bico até a parte de trás do crânio.
      4. Pegue uma corda não elástica e enrole-a ao redor do crânio de um orifício de ouvido para o outro para medir a circunferência da cabeça. Coloque a corda em uma régua métrica para obter uma medição.
    3. Colete a circunferência torácica envolvendo uma corda ao redor do peito, sob onde as asas entram em contato com o corpo e colocando a corda em uma régua métrica para obter a medição.
    4. Pulverize os seios com 70% de etanol, e usando os dedos, puxe as penas e a pele para revelar os músculos peitoral e faça as medidas (etapas 2.1.4.1-2.1.4.2) com pinças digitais.
      1. Para determinar a largura do peito, meça através do peito onde as asas entram em contato com o corpo.
      2. Para determinar o comprimento do peito, meça da parte inferior da clavícula até o topo da almofada de gordura.
  2. Extração de peitoral maior músculo, medição e coleta
    1. Usando tesoura cirúrgica ou bisturi e fórceps, remova o músculo peitoral direito cortando ao longo do osso da quilha e liberando o músculo da parede do corpo.
      NOTA: Certifique-se de não coletar o músculo peitoral menor , identificando visualmente que o músculo permanece na caixa torácica.
    2. Depois de remover o músculo peitoral principal , coloque o músculo plano em uma vara de picolé e colete as seguintes medidas (etapas 2.2.2.1-2.2.2.3) usando pinças digitais.
      1. Para determinar o comprimento muscular, meça desde o craniano até a porção caudal do músculo.
      2. Para determinar a largura muscular, meça na porção mais larga da parte craniana do músculo.
      3. Para determinar a espessura muscular, pegue o peito com fórceps e meça na porção mais grossa da parte craniana do músculo.
    3. Se desejar, armazene este músculo e o músculo peitoral esquerdo para novas análises (como histologia, proteína e expressão genética, etc.) a -80 °C por até um ano.

3. Estatísticas

  1. Analise os dados como um desenho completamente randomizado com ovo/pintinho como unidade experimental.
    NOTA: A dose riboside de nicotinamida (DOS) serviu como efeito fixo. Todos os dados foram analisados com um programa de análise estatística (ver Tabela de Materiais), e comparações em pares entre meios menos quadrados de tratamentos foram computadas. As diferenças foram consideradas significativas em P < 0,05.

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Representative Results

Não houve efeitos DOS para o peso corporal de embriões do dia-18 e filhotes eclodidos (P > 0,52; Figura 2). Não houve efeitos DOS para todas as medidas musculares do embrião do dia 18 (P > 0,24; Figura 3). Não houve efeitos DOS para peitoral de filhote eclodido principais medidas de comprimento e largura muscular (P > 0,26); no entanto, os DOS afetaram o peso e a profundidade muscular (P < 0,03; Figura 4). Os filhotes de embriões não injetados com nicotinamida riboside tinham músculos peitoralis principais que pesavam menos que filhotes de embriões injetados com 500 e 1.000 mM nicotinamida riboside (P < 0,03), mas esses tratamentos não diferem (P = 0,41) um do outro. Os filhotes de embriões injetados com 250 mM de nicotinamida riboside não variaram em peso principal peitoral em comparação com os outros tratamentos (P > 0,06). Os filhotes de embriões injetados com 0 e 250 mM de nicotinamida riboside tinham menos profundidade peitoral do que os filhotes de embriões injetados com 500 e 1.000 mM de nicotinamida riboside (P < 0,05), mas esses tratamentos não diferem (P = 0,95). O filhote de embriões injetados com 500 e 1.000 mM de nicotinamida riboside não variou (P = 0,73) na profundidade peitoral.

Figure 1
Figura 1: Cálculo geral da dose riboside de nicotinamida e exemplos das três doses utilizadas no experimento atual. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2: Efeito da alimentação de ovo de quatro doses de nicotinamida riboside no (A) dia-18 embrião e (B) eclodem pesos corporais de filhotes. Embriões foram injetados no saco de gema com quatro doses de nicotinamida riboside no dia 10 de incubação. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 3
Figura 3: Efeito da alimentação de ovo de quatro doses de nicotinamida riboside no dia 18 embrião peitorale músculo principal . a peso. (B) Comprimento. (C) Largura. (D) Profundidade. Embriões foram injetados no saco de gema com uma das quatro doses de nicotinamida riboside no dia 10 de incubação. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 4
Figura 4: Efeito da alimentação de ovo de quatro doses de nicotinamida riboside no peitoral do corpo do filhote de escotilha. (A) Peso. (B) Comprimento. (C) Largura. (D) Profundidade. Embriões foram injetados no saco de gema com uma das quatro doses de nicotinamida riboside no dia 10 de incubação. a,b indica a diferença estatística entre si dentro de uma subprescagem (P < 0,05). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Discussion

Até o momento, o Laboratório Gonzalez da Universidade da Geórgia é o único grupo a demonstrar efeitos positivos da nicotinamida riboside no ovo alimentando-se de peitoral grande desenvolvimento muscular e crescimento. O primeiro estudo descobriu que na alimentação ovo de 250 mM nicotinamida riboside aumentou o peso muscular e as dimensões quando injetado no saco de gema9. No estudo de acompanhamento, a injeção de dose de nicotinamida ribosídeo na gema, semelhante às doses testadas no presente estudo, não aumentou a morfometria muscular principal do peitoral além da dose de 250 mM10. Estes dois estudos utilizaram uma linha de frango de corte de rendimento comercial; portanto, este estudo foi realizado para demonstrar os efeitos da alimentação de ovo de embriões de frango de alta produtividade com nicotinamida riboside.

Através desses estudos, várias etapas críticas foram identificadas neste protocolo que determina o sucesso. Esse processo é extremamente importante para aqueles que não estão familiarizados com a seleção de ovos para incubação para reduzir a propagação de bactérias e não tendenciosos resultados de filhotes de filhotes. Em primeiro lugar, é extremamente importante não escolher ovos sujos ou defeituosos porque possuem bactérias que podem dificultar os outros ovos. Essas bactérias se espalharão rapidamente pela incubadora e farão com que a incidência de ovos podres aumente drasticamente; assim, afetando o número de embriões e filhotes disponíveis para amostragem.

Quanto à atribuição de ovos a tratamentos experimentais, os pesquisadores devem utilizar métodos de software de planilha descritos acima para garantir que todos os pesos de óvulos iniciantes do tratamento sejam iguais. Completar esta etapa será demonstrado no embrião e dados morfométricos do corpo inteiro do filhote eclodido. Isso garantirá que todas as diferenças musculares de tratamento experimental sejam devido à aplicação do tratamento. Não houve efeitos de nicotinamida riboside em todas as medidas morfométricas do corpo nos estudos Gonzalez e Jackson9 e Xu et al.10 . Devido a esses achados consistentes, apenas os pesos corporais de embriões e filhotes eclodidos foram medidos na pesquisa atual para estabelecer a falta de um efeito riboside de nicotinamida na morfometria do corpo inteiro; no entanto, metodologias para coleta de morfometria corporal inteira são apresentadas nesta publicação para aqueles que desejam coletar esses dados. Não houve efeitos de dose de nicotinamida riboside em embriões ou pesos corporais de filhotes no presente estudo, continuando a tendência relatada anteriormente.

Como essa metodologia afeta estritamente a miogênese secundária, futuras equipes de pesquisa podem ser tentadas a injetar embriões em um momento anterior. Na experiência dos autores, a injeção precoce, dos dias de incubação 0 a 5, reduz drasticamente a escotilhabilidade dos ovos em até 70 a 80%. Uma injeção precoce é uma limitação significativa da técnica. Poderia servir como uma futura área de pesquisa, mas na experiência dos autores, a injeção precoce é prejudicial à eclosão, o que reduz severamente o valor dessa tecnologia.

Ao medir a morfometria do músculo peitoral principal , os pesquisadores devem ponderar duas considerações cruciais. Primeiro, os autores aconselham um único pesquisador bem treinado a remover todos os músculos utilizados para análise morfométrica. Como o músculo principal peitoral é tão pequeno, variação ou viés muito indesejado poderia ser introduzido em dados coletando outros músculos fora do músculo de interesse. Utilizar um único pesquisador garantirá que o mesmo músculo será coletado de acordo com marcos consistentes usados para identificar o músculo. Em segundo lugar, ao colocar os músculos na superfície da madeira para medição, deve-se tomar cuidado ao colocar todos os músculos em uma posição natural. Isso é especialmente verdadeiro para a medição do comprimento, pois pode ser manipulado esticando o músculo ao colocá-lo na superfície de medição. Nenhum efeito riboside de nicotinamida foi visto no presente estudo para morfometria muscular peitoral principal no dia 18. Xu et al.10 não relataram diferenças de peso e comprimento muscular no dia 19; assim, indicando o efeito da nicotinamida riboside em morfometria muscular inteira pode não se manifestar até depois da incubação dia 19 nestas duas linhas genéticas de frango.

Em comparação com estudos publicados anteriormente, uma das principais modificações no presente estudo foi o uso de nicotinamida riboside comercialmente disponível. Nos estudos anteriores, 9,10, a riboside de nicotinamida pura foi protegida de um fabricante. Com a ajuda do fabricante, o grupo de pesquisa foi informado de que o produto comercial utilizado no presente estudo também teve ingredientes de celulose misturados ao produto, reduzindo a concentração calculada de nicotinamida ribose em 34%. Portanto, no presente estudo, o peso muscular peitoral de filhotes eclodidos injetado com 500 e 1.000 mM de nicotinamida riboside foi maior do que os filhotes de embriões injetados com 0 mM de nicotinamida riboside em 15 e 10%, respectivamente. Esse peso aumentou principalmente devido ao aumento da profundidade muscular dos principais tratamentos em 17 e 7%, respectivamente. Essa resposta foi menos da metade das respostas anteriores. Xu et al.10 relataram suplementação de nicotinamida riboside, 250 a 1.000 mM concentrações, aumento do peso muscular peitoral principal em 35% devido ao aumento do comprimento muscular, largura e profundidade. Embora a resposta reduzida possa ser principalmente devido à suplementação de menos nicotinamida riboside do que o calculado, também não se sabe se o material de celulose dificultou a miogênese. Portanto, os autores recomendaram que todas as pesquisas futuras utilizem produtos puros de nicotinamida riboside e não disponíveis comercialmente.

Independentemente dos resultados presentes, seguir as metodologias descritas nesta publicação garantirá a execução robusta dos estudos de alimentação de ovo . Os futuros pesquisadores podem utilizar os métodos acima para testar outros compostos que podem afetar positivamente o frango de corte no desenvolvimento e crescimento muscular de ovo .

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Disclosures

Os autores não têm conflito de interesses para declarar.

Acknowledgments

Os autores gostariam de agradecer cobb Vantress, Inc. pela doação dos ovos e prestação de assistência técnica na incubação de ovos. Os autores gostariam de agradecer à ChromaDex, Inc. pela assistência técnica nicotinamida riboside.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Air-Tite™ Sterile Hypodermic Needles- 20 G; 1 inch Fisher Scientific 14-817-208 https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-hypodermic-needles-32/p-7182916#?keyword=
Analytical Balance VWR VWR-214B2 https://us.vwr.com/store/product/20970740/vwr-b2-series-analytical-and-precision-balances
Complete Dissection Set DOCAZON DK1001 https://www.amazon.com/DOCAZON-Complete-Dissection-Set-Dissecting/dp/B07VBHKSW3
Fisherbrand™ Isotemp™ General Purpose Deluxe Water Baths Fisher Scientific FSGPD02  https://www.fishersci.com/shop/products/isotemp-general-purpose-water-baths/p-6448020
Fisherbrand™ Sterile Syringes for Single Use Fisher Scientific 14-955-464 https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-syringes-single-use-12/p-7114739#?keyword=
HIGH INTENSITY EGG CANDLER Titan Incubators N/A https://www.titanincubators.com/collections/egg-candlers/products/egg-candler-high-intensity
Infrared Forehead Thermometer HALIDODO XZ-001
Microsoft Excel Microsoft N/A
Neiko Tools Digital Caliper Neiko Tools 01408A https://www.amazon.com/Neiko-01407A-Electronic-Digital-Stainless/dp/B000NEA0P8?th=1
Nexcare Absolute Waterproof Tape Nexcare Brand 732 https://www.nexcare.com/3M/en_US/nexcare/products/catalog/~/Nexcare-Absolute-Waterproof-Tape/?N=4326+3294529207+3294631805
&rt=rud
Pen Size Temperature and Humidity USB Data Logger with Display Omega OM-HL-SP-TH https://www.omega.com/en-us/temperature-measurement/temperature-and-humidity-data-loggers/p/OM-HL-SP-Series
SAS 9.4 for Windows SAS Institute N/A https://www.sas.com/en_us/home.html
Sportsman 1502 Incubator GQF Manufacturing 1502 https://www.gqfmfg.com/item/1502-digital-sportsman/
Tru Niagen (Nicotinamide riboside) ChromaDex, Inc. N/A https://www.truniagen.com/truniagen-300mg/ - note, contact company for pure product
Wood Craft Sticks Creatology M20001547 https://www.michaels.com/wood-craft-sticks-by-creatology/M20001547.html

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Alcocer, H. M., Xu, X., Gravely, M.… More

Alcocer, H. M., Xu, X., Gravely, M. E., Gonzalez, J. M. In Ovo Feeding of Commercial Broiler Eggs: An Accurate and Reproducible Method to Affect Muscle Development and Growth. J. Vis. Exp. (175), e63006, doi:10.3791/63006 (2021).

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