Isolamento de ilhotas de porcos adultos

Ying Lu; Zuhui Pu; Jiao Chen; Jing Deng; Ying Deng; Shufang Zhu; Chunliang Xu; Fuwen Yao; Zijing Wu; Yong Ni; Yongqiang Zhan; Jun Cheng; Naiyang Zhan; Wenlong Huang; Zhiming Cai; Rita Bottino; Lisha Mou

doi:10.3791/63017

Artigo de método

Isolamento de ilhotas de porcos adultos

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DOI:

10.3791/63017

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21 de outubro de 2021

Ying Lu^*¹^,² , Zuhui Pu^*³ , Jiao Chen² , Jing Deng² , Ying Deng²^,⁴ , Shufang Zhu² , Chunliang Xu⁵ , Fuwen Yao¹^,² , Zijing Wu¹^,² , Yong Ni¹ , Yongqiang Zhan¹ , Jun Cheng¹ , Naiyang Zhan¹ , Wenlong Huang⁶ , Zhiming Cai² , Rita Bottino⁷ , Lisha Mou²

¹Department of Hepatopancreatobiliary Surgery, Shenzhen Institute of Translational Medicine, The First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen Second People's Hospital, ²Shenzhen Xenotransplantation Medical Engineering Research and Development Center, Shenzhen Institute of Translational Medicine, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen Second People's Hospital, ³Imaging Department, Shenzhen Institute of Translational Medicine, The First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen Second People's Hospital, ⁴Faculty of Science, University of Waterloo, ⁵School of Life Science, The Chinese University of Hong Kong, ⁶General Surgery, The First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College, ⁷Director Islet Programs, Imagine Pharma

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo detalhado abrange as etapas metodológicas do isolamento de ilhotas de porcos adultos desde a fase de digestão via purificação até a avaliação funcional final das ilhotas. Este esboço pode ser usado como uma diretriz para o isolamento de ilhotas de porcos adultos em instituições de pesquisa.

Resumo

O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é causado pela destruição autoimune das células β pancreáticas, o que resulta em pouca ou nenhuma produção de insulina. O transplante de ilhotas desempenha um papel importante no tratamento do DM1, com a melhora do controle glicometabólico, a redução da progressão das complicações, a redução dos episódios hipoglicêmicos quando comparado com a insulinoterapia tradicional. Os resultados do ensaio clínico de fase III também demonstraram a segurança e eficácia do alotransplante de ilhotas no DM1. No entanto, a escassez de doadores de pâncreas limita seu uso generalizado. Os animais como fonte de ilhotas, como o porco, oferecem uma escolha alternativa. Como a arquitetura do pâncreas do porco é diferente das ilhotas de camundongos ou humanos, o procedimento de isolamento das ilhotas do porco ainda é um desafio. Uma vez que a tradução de fontes alternativas de ilhotas suínas (xenogênicas) para o ambiente clínico para o tratamento do DM1 por meio de transplante celular é de grande importância, um protocolo econômico, padronizado e reprodutível para isolar ilhotas suínas é urgentemente necessário. Este manuscrito descreve um método simplificado e econômico para isolar e purificar ilhotas suínas adultas com base nos protocolos anteriores que transplantaram com sucesso ilhotas suínas para primatas não humanos. Este será um guia para iniciantes sem o uso de equipamentos especializados, como um processador de célula COBE 2991.

Introdução

O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença grave na qual a destruição autoimune das células beta resulta em pouca ou nenhuma produção de insulina ^1,2,3. Um grupo substancial de pacientes com DM1 não consegue estabilizar a labilidade glicêmica com insulinoterapia e apresenta episódios hipoglicêmicos com risco de vida. O transplante de ilhotas, quando bem-sucedido, pode alcançá-lo. Mais de 1.500 pacientes diabéticos foram submetidos a transplante de ilhotas bem-sucedido em todo o mundo, mostrando menor risco, mas sucesso de resultados a long....